鸡群反复发生强耐药葡萄球菌感染的诊断与病因分析

陆新浩,陈秋英,刘 鸿,诸明涛,黄建勇,任祖伊,吴 勇

(浙江省余姚市禽畜病防治研究所,浙江 余姚 315400)

2010年9月份以来宁波某鸡场10多万羽海蓝白鸡群反复发生一种以皮下、翅膀等部位溃疡并渗出暗红黄色胶冻样物为特征的病症,导致鸡群存活率与生产性能下降,造成一定的经济损失。本研究所禽病门诊部对送检病死鸡进行临床和实验室诊断,结果发现该鸡群感染的是金黄色葡萄菌,并通过药敏试验筛选治疗药物,发现所分离细菌对常见的35种抗生素(包括多种人用抗生素与禁用药)产生了极强的耐药性,对其中的20种抗生素完全产生了耐药性。因此,我们对其原因进行分析与探讨。现报告如下。

1 发病特点

2010年9月份,该鸡场的1号鸡舍共2万羽16周龄的种鸡在注射传染性鼻炎疫苗后2 d,鸡群大量排出白色粪便,继而出现绿色粪便,精神沉郁,羽毛松乱,皮肤溃烂出血,采食量降低约20%,死亡率为1%,使用阿莫西林和环丙沙星进行治疗无效,送本所求治,之后10月重发,此次死亡率高达5%,2～5号鸡舍9月份旧铁笼饲养的鸡先发病,治愈之后,这4号鸡舍的鸡在之后的2个月中陆续发病,总死亡率1%,反复治疗多次无效后,送我门诊部求助。经临床调查发现,鸡群发病有以下几个特点:(1)在9～10月全场共10多万羽海蓝白鸡几乎都感染了金黄色葡萄球菌。全场鸡群平均死亡率达1%,有的鸡舍死亡率高达5%。(2)感染鸡群对畜禽生产常用抗生素几乎都产生了耐药性,用常规药物治疗效果或不够理想。药敏试验也验证了这一现象。(3)发病鸡群经敏感药物治疗康复后20～30 d,会重复发病,说明鸡金黄色葡萄球菌的发病具有反复性。(4)鸡群在发生金黄色葡萄球菌流行过程中我们还发现鸡群饲养密度过高(10～11羽/笼)的鸡群发病较重,饲养密度低(4～5羽/笼)的鸡群发病较轻。(5)同一鸡场的土鸡群未见发病。

2 剖检病变

9月和10月送检的3批死亡鸡翅膀部溃烂,羽毛被渗出物染成暗红色,剖检病死鸡可见皮下组织溃烂,皮下有黄色胶冻样水肿物,肌肉暗红,肝脏有少量白色坏死点,偶见覆盖少量假膜,腹腔发出酸臭味儿。

3 细菌分离鉴定

取病死鸡肝脏及溃烂组织,无菌操作取样接种鲜血琼脂平板,37℃恒温培养24 h,挑取单个菌落进行革兰染色,并划线接种麦康凯培养基,另外接种微量生化反应管与使用氧化酶试纸进行检测。

4 药敏试验

送检的3批死亡鸡分离到的细菌,挑取单个菌落均匀涂布鲜血平板,后用无菌小镊子均匀的贴上药敏纸片,37℃恒温培养12 h后读取结果[1-2]。

5 SPF鸡发病试验

10羽15日龄SPF鸡平均分成2个组,第1组挑取纯培养的 5个菌落与1 m L灭菌生理盐水混合,皮下注射0.1 mL/羽,隔离饲养并记录发病情况,发现死亡鸡立即剖检并进行细菌分离和鉴定。第2组为空白对照组。

6 结果

6.1 细菌分离鉴定结果 培养24 h后血平板上长出金黄色、光滑、隆起的较大菌落,菌落周围有明显的不完全溶血环,挑取单个典型菌落进行革兰染色可见2个、4个相连或连成串的革兰阳性球菌,生化结果显示,本菌发酵葡萄糖、蔗糖和甘露醇等,不发酵木糖,氧化酶试验阴性,细菌能使兔血浆发生凝集现象(见表1),鉴定为金黄色葡萄球菌。第3次送检的病死鸡还分离到在麦康凯培养基上为桃红色的革兰阴性小杆菌,经生化鉴定为大肠杆菌。

表1 生化试验结果

6.2 药敏试验结果 纸片法药敏试验结果见表2。从表2可见,对喹诺酮类、林可胺类、酰胺醇类、四环素类等20种抗菌药完全耐药,对青霉素类和氨基糖苷类药物大部分耐药,对4种头孢类药物比较敏感,不过前后3次分离到的细菌对相同药物的敏感性逐渐降低。

表2 药敏试验 (mm)

6.3 SPF鸡发病试验结果 第1组的试验鸡皮下注射葡萄球菌后,16 h死亡1羽,剖检死鸡,可见皮下有少量胶冻状物,肝有少量坏死点,心包出血,其余试验鸡排出大量白色粪便,精神沉郁、羽毛松乱、鸡冠发黑、食欲废绝,接种部位水肿。48 h出现第2羽死亡鸡,剖检可见皮下有大量胶冻状物,有酸臭味,肝脏有白色坏死点,腹腔有少量黄色渗出物,可检测到金黄色葡萄球菌。其余存活试验鸡可见接种部位及周围皮肤破溃、化脓,排绿色稀粪,鸡冠发黑,精神沉郁,扎堆,呆立于一角。攻毒试验组发病率100%,死亡率40%。空白对照组则无发病现象。

7 病因分析与讨论

根据临床症状、剖检病变、细菌分离鉴定与致病性试验,可知导致该鸡场鸡群发病的病原菌为金黄色葡萄球菌,后期并发大肠杆菌病。

调查得知,该海蓝白种鸡场饲养史较长,铁笼陈旧,设计不合理,笼内有许多金属接口暴露在外,部分焊接口脱落形成“毛刺”,由于饲养密度过大,与铁笼摩擦的可能增加,鸡皮肤破损的几率增大,加上转群时操作粗暴、给鸡带翅号及免疫等造成的损伤,使鸡群发生葡萄球菌病。疾病首次发生后,通过药敏试验筛选出有效药物,治疗鸡群痊愈后,各种致病条件没能有效去除,包括过高的饲养密度、破旧的鸡笼等,葡萄球菌病再次发生,最终出现反复发生的现象。

金黄色葡萄球菌强的耐药性与该鸡场常年反复盲目的在饲料中添加各种抗生素有关,结果是在发病时无有效药物可选用。该鸡场葡萄菌病反复发生,而细菌的耐药性逐渐变得更加严重。

近年来,有关鸡群感染免疫抑制病导致鸡群免疫力下降的文献很多,特别是禽白血病等一些免疫抑制病对鸡群危害越来越大,我们也对该鸡场2个品种的鸡群进行了白血病的抽检调查,结果显示,该场海蓝白鸡群抽检样品禽白血病阳性率高达43%,另一种土鸡群阳性率仅6.6%,明显低于海蓝白鸡群。因此认为禽白血病病毒的感染在葡萄球菌病反复发生中起到了一定的促进作用。但是否是导致鸡群反复发生强耐药葡萄球菌感染的主要病因之一,仍有待于进一步的研究。

针对反复发生的严重耐药葡萄球菌病,除了加强平时的饲养管理外,该鸡场应采取如下措施进行预防:首先,清除鸡笼上造成外伤的金属钩等异物,避免鸡受到外伤;其次,减少饲养密度,每笼按照标准饲养4～5羽鸡;再次,尽量减少往饲料中盲目添加抗生素;最后,对祖代或者父母代种鸡群进行白血病的净化,减少免疫抑制病的发生与传播。

[1]刘新金,周宝坤.鸡金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药敏试验[J].家禽科学,2007(6):34-35.

[2]程国富,王德海,谷长勤,等.45种药物对鸡关节源性金黄色葡萄球菌的体外抑菌效果[J].动物医学进展,2004,25(6):87-89.