石墨炉原子吸收分光光度法测定雄黄和牛黄解毒片中可溶性砷的含量Δ

肖安菊，尹美珍，喻 昕，林 静（黄石理工学院医学院，黄石市 435003）

前文报道[1]的古蔡氏法、二乙氨基二硫代甲酸银分光光度（DDC-Ag）法测定雄黄和牛黄解毒片中可溶性砷的含量，方法虽然简单，成本低廉，但测定过程中影响因素太多，极易影响到数据的准确性。本文拟报道石墨炉原子吸收分光光度（GF-AAS）法测定水溶性砷的条件、方法。

1 仪器与试药

AA240FS原子吸收分光光度计、GTA120型石墨炉控制器、石墨管、空心阴极灯（美国VARIAN公司）。

雄黄（产地山东，分装批号：081028）；牛黄解毒片（北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂，批号：9120196，以下简称“同仁堂”；修正药业集团股份有限公司，批号：090704，以下简称“修正”；广西广明药业有限公司，批号：091203，以下简称“广明”。）；三氧化二砷（基准试剂，北京化工厂，批号：81046）；硝酸镍（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：20070716）；硝酸为优级纯），水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 稀盐酸溶液的制备 取浓盐酸234 mL，加水稀释至1 000 mL，即得。

2.1.2 硝酸镍溶液的制备 精密称取2.48 g硝酸镍（分析纯）在纯水中溶解并稀释至50 mL，此溶液含镍离子浓度为10 mg·mL－1[2]。

2.1.3 砷标准溶液的制备 将1.32 g三氧化二砷，置于1 000 mL容量瓶中，加20%氢氧化钠溶液5 mL溶解后，用适量稀硫酸中和，再加稀硫酸10 mL，用水稀释至刻度，作为贮备液（100 μg·mL－1）。

2.1.4 砷标准使用液的制备 精密量取贮备液10 mL，置于1 000 mL容量瓶中，加稀硫酸10 mL，用水稀释至刻度，即得（1 μg·mL－1）。

2.1.5 人工胃液的制备 取稀盐酸5.9 mL，加水至1 000 mL，用pH酸度计测得pH＝1.34即可。

2.2 样品的处理

2.2.1 药品粉碎 分别取雄黄、去包衣的牛黄解毒片适量，于乳钵内研末，过50目筛，备用。

2.2.2 稀盐酸提取 分别精密称取雄黄0.259 8 g、牛黄解毒片0.762 5 g[3]，置于4个烧杯中，各加稀盐酸20 mL，振摇提取1 h，滤过，滤渣用稀盐酸洗2次，每次10 mL，搅拌10 min，滤过，洗液与滤液合并后置于500 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀[4]。取雄黄提取液1 mL，置于100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 人工胃液提取 分别精密称取雄黄、牛黄解毒片（取样量同上）适量，置于4个烧杯中，各加“2.1.4”项下方法配制的人工胃液300 mL，电磁搅拌提取4 h，滤过，滤液加水定容为500 mL，摇匀。取雄黄提取液1 mL，置于100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 仪器工作条件

光源发射波长：193 nm；灯电流：10 mA；狭缝宽度：0.2 nm；进样体积：50 μL；保护气体：氩气。石墨炉的工作条件见表1，每个样品仪器自动按表中9个步骤进行检测。

表1 石墨炉工作条件Tab 1 Operating conditions of graphite furnace

2.4 线性关系考察

母液是砷标准使用液，内含40 μg硝酸镍[2]；稀释液是2%硝酸溶液。仪器自动配标，浓度分别为0、2、4、6、8、10 μg·L－1，测得平均吸光度分别是 0.006 0、0.055 6、0.116 1、0.180 2、0.238 9、0.299 3。以吸光度（A）为横坐标，浓度（C）为纵坐标，得回归方程C＝33.611A－0.019 8（r＝0.999 0），可溶性砷检测浓度在0～10 μg·L－1范围内与吸光度呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取砷标准使用液50 μL，按“2.3”项下仪器工作条件重复进样5次，测定并记录吸光度，计算RSD值。结果，RSD＝0.52%，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

精密称取已知含量的雄黄粉末5份，每份约0.26 g（可溶性砷含量为8.723 mg·g－1），按“2.2.3”项下方法制备供试液，按“2.3”项下仪器工作条件进样测定。结果，可溶性砷吸光度的RSD＝2.72%，表明方法重复性良好。

2.7 稳定性试验

取“2.6”项下供试品溶液适量，按“2.3”项下条件分别于0、2、4、6 h进样测定。结果，可溶性砷吸光度RSD＝1.53%，表明样品在6 h内稳定。

2.8 加样回收率试验

精密称取已知含量的牛黄解毒片（修正）粉末9份，每份约0.762 5 g（可溶性砷含量为0.915 mg·g－1），分别精密添加一定量的砷（分别相当于样品含量的80%、100%、120%），按“2.2.3”项下方法处理后进样测定。结果，可溶性砷平均加样回收率分别为99.20%、98.67%、100.77%，RSD＝2.01%，详见表2。

表2 加样回收率试验结果（n＝9）Tab 2Recovery results of soluble arsenic（n＝9）

2.9 样品含量测定

按照“2.3”项下仪器工作条件，测定8个样品的吸光度值（每份样品平行操作3份），在砷标准曲线上求得样品砷的浓度，通过计算得样品中可溶性砷的含量，结果详见表3。

表3 样品含量测定结果Tab 3 Content determination of samples

2.10 与DDC-Ag法测定结果比较

将文献[1]中DDC-Ag法测定的数据与本文中GF-AAS法测定的砷含量结果进行比较，结果见表4。

表4 2种方法测定结果比较（±s）Tab 4Results of determination by 2 methods（±s）

表4 2种方法测定结果比较（±s）Tab 4Results of determination by 2 methods（±s）

与稀盐酸提取液比较：＊P＜0.05；与DDC-Ag法测定结果比较：#P＞0.05vs.diluted hydrochloric acid；＊ P＜0.05；vs.determination by DDC-Ag：#P＞0.05

样品名称同仁堂稀盐酸提取液同仁堂人工胃液提取液广明稀盐酸提取液广明人工胃液提取液DDC-Ag法/mg·g－1 0.784±0.025 2.008±0.036＊0.800±0.031 1.140±0.040＊GF-AAS法/mg·g－1 0.659±0.019#2.096±0.037＊1.144±0.023#1.580±0.041＊

3 讨论

3.1 基体改进剂的作用与选择

石墨炉的灰化温度一般在500～800℃，灰化作用是将样品中的基体在灰化阶段破坏并排出炉外。砷元素很不稳定，在500℃时就破坏随基体挥发了，损失相当严重，必须加入基体改进剂。有文献报道[5]用二氯化钯能产生较为稳定的吸光度；也有文献报道[1]用硝酸镍能明显提高砷的吸光度。本文采用了加40 μg·L－1硝酸镍作为基体改进剂。

3.2 溶剂的选择

因为无机砷毒性最大，而砷酸钠、亚砷酸钠均易溶于水；三氧化二砷微溶于水，溶于酸、碱，故2005年版《中国药典》采用稀盐酸提取。本试验根据药物进入人体后的真实情况设定用人工胃液提取，对人工胃液的用量和提取时间也进行了探讨。结果发现，用300 mL，提取4 h是最佳选择。古蔡氏法、DDC-Ag法和GF-AAS法所测结果比较后发现，人工胃液提取的可溶性砷含量均高于稀盐酸。

3.3 检测方法比较

由表4可见，对于同一供试液而言，GF-AAS法测得的砷含量数据大多高于DDC-Ag法，但无显著性差异。可能是因为GF-AAS法测定时可以直接用提取液进样，减少了很多中间步骤带来的误差。

综上所述，建议对于雄黄和含雄黄的复方制剂，其质量控制标准中均应有可溶性砷含量测定项目，采用GF-AAS法测定，提取溶剂用人工胃液。

[1] 肖安菊，喻 昕，尹美珍，等.2种方法测定雄黄及牛黄解毒片中可溶性砷含量的比较[J].中国药房，2011，22（8）：747.

[2] 张贵马，花长庚，邓 艳，等.基体改进剂原子吸收光谱法直接测定水中砷[J].实用医技杂志，2004，11（7B）：1 293.

[3] 杨志强，李凤艳，李庆杰，等.砷斑法测定砷含量[J].北京石油化工学院学报，2005，13（2）：57.

[4] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：附录ⅨF.

[5] 唐 虹，黄 薇，王延琦，等.石墨炉原子吸收分光光度法测定中药中微量砷[J].职业与健康，2001，17（8）：42.