测定复方苦参乳膏中蛇床子素的含量*

俞建芬，顾建明，张新民

江苏省吴江市中医医院，吴江 215221

复方苦参乳膏是本院药剂科会同皮肤科研制的中药外用型乳膏制剂，主要用于治疗湿疹、瘙痒、过敏性皮炎。其处方由苦参、蛇床子、白鲜皮、黄柏、土荆皮、地肤子、紫草等中药材组成。蛇床子素作为该方中君药之一的蛇床子的主要成分，其含量将直接影响该药的疗效。目前蛇床子素的含量测定方法有薄层扫描法[1]、分光光度法[2]、气相色谱法[3]和高效液相色谱法[4-5]等。本课题组采用高效液相色谱法对复方苦参乳膏中蛇床子素的含量进行测定，以便对该制剂的质量进行控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器

美国Waters 2695-UV2489液相色谱仪；Mettler Toledo XS105电子分析天平；Q/BKYY32-2000电热恒温水浴锅；HU-6150F超声波清洗器。

1.2 试药

复方苦参乳膏（吴江市中医医院吴江市第二人民医院，规格:20g/盒，每克乳膏含生药0.06g，批号:20101008、20110117、20110120、20110125、20110410、20110421、20110427）；蛇床子素对照品（中国药品生物制品检定所，批号:110822-200407）。乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Turner C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相:乙腈-水（65∶35）；流速:1.0 mL·min-1；柱温:30℃；检测波长:322 nm；进样量:10μL。理论塔板数按蛇床子素峰计算应不低于3000。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取蛇床子素对照品4.9 mg置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液，浓度为 49μg·mL-1。

2.2.2 供试品溶液 取复方苦参乳膏1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，60℃水浴回流30 min使样品溶化，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，冰箱（0～4℃）放置过夜，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.2.3 阴性供试品溶液 按照复方苦参乳膏的处方和制法，制备不含有蛇床子的乳膏作为阴性样品；取阴性样品约1 g，精密称定，按供试品溶液的制备方法制备，即得阴性供试品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 干扰试验 精密吸取蛇床子素对照品溶液（1.96μg·mL-1）、供试品溶液及阴性供试品溶液各10μL，按照“2.1”色谱条件进样测定。结果表明，阴性供试品色谱中在与蛇床子素对照品保留时间相应的位置无色谱峰，说明处方中其他药味对测定无干扰。见图1。

图1 对照品（A）、样品（B）及阴性供试品（C）色谱图

2.3.2 线性范围的考察 分别精密量取上述蛇床子素储备液 1 mL 置 10、25、50、100 mL 量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，得浓度为4.9、1.96、0.98、0.49μg·mL-1的对照品溶液；精密量取上述对照品溶液系列及对照品储备液各10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，以对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为 Y=3.028×104X-5.699，r=0.9999。结果表明，蛇床子素在 0.49～49μg·mL-1的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.3.3 精密度试验 在上述色谱条件下，精密吸取上述蛇床子素对照品溶液10μL，连续进样5次，测得蛇床子素峰面积平均值为61891，RSD为0.61%。表明仪器精密度良好。

2.3.4 稳定性试验 精密吸取同一样品溶液10μL，分别在 0、1、2、4、6、8 h 进样，结果表明，样品溶液在8 h内稳定性良好，蛇床子素的峰面积平均值为85682，RSD为0.86%。

2.3.5 重复性试验 精密称取同一批样品6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液。按上述色谱条件测定，计算。结果平均含量为 48.49μg·g-1，RSD 为1.68%。表明此法重复性良好。

2.3.6 加样回收率试验 精密称取已测知含量（48.49μg·g-1）的样品约 0.5g，共 6 份，分别置具塞锥形瓶中，精密加入蛇床子素对照品溶液（0.98μg·mL-1）25 mL，照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，外标法计算。测得平均回收率（n=6）为96.33%，RSD为2.80%。

2.3.7 样品含量测定 取7批复方苦参乳膏样品，按拟定方法测定所含蛇床子素的含量，每批样品取2份，每份溶液进样2次，并计算平均含量。结果，7批样品中蛇床子素的平均含量分别为79.13、48.49、61.78、65.22、50.96、43.97、43.21μg·g-1。

3 讨 论

3.1 提取溶剂的选择

本实验比较了甲醇提取与无水乙醇提取该制剂中的蛇床子素，结果显示，以无水乙醇作溶剂，提取不完全，去除基质效果不佳；用甲醇提取，提取完全，去除基质效果较好。

3.2 供试品溶液制备方法的确定

由于本品为O/W型乳膏剂，含白凡士林、脂肪酸甘油酯、羊毛脂、液体石蜡等基质，约占样品总量的2/3，严重影响高效液相色谱含量测定。为了更好地除去基质，保证蛇床子素提取完全，采用超声前60℃水浴回流30 min，使样品溶化，超声后冷藏（0～4℃）放置过夜，经试验考察，该提取方法能去除大量基质，从而不影响蛇床子素的含量测定。

3.3 提取时间与方法的选择

对甲醇超声提取时间（30、45、60min）进行了考察，显示甲醇提取的三个时间结果无明显区别；另外，通过甲醇超声处理0.5 h与加热回流0.5 h进行比较，提取结果相近，因此采用前者进行乳膏蛇床子素的提取。

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[4]华春红.HPLC法测定少林正骨精中蛇床子素的含量[J].海峡药学，2008，20（8）:43-4.

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