百合健脾润肺胶囊质量标准研究

祁 红,刘传统

(湖南省石门县人民医院,湖南 石门 415300)

百合健脾润肺胶囊是本院制剂室配制的制剂(批号:090824,091020,100224),由黄芩、功劳木、白芍、百合等19味中药组成,具有滋阴润肺,化痰止咳之功效。用于浸润性肺结核,慢性支气管炎具有咳嗽,咳痰带血、哮喘等具有肺肾阴虚表现者。为控制产品质量,确保临床疗效,本文建立黄芩、白芍、陈皮、当归、功劳木的薄层色谱鉴别,并采用高效液相色谱法对主要药味黄芩的主要成分黄芩苷的含量进行测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津LC-10AT高效液相色谱仪,SPD-10Avp紫外检测器,SCL-10Avp色谱工作站。Meter AE240电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。

1.2 试药 黄芩苷对照品(批号:0751-200212)、盐酸小檗碱对照品(批号:110713-200609)、芍药苷对照品(批号:110736-200484),陈皮苷对照品(批号:110721-200211),当归对照药材(批号:927-200110),均购自中国药品生物制品检定所。硅胶G(青岛海洋化工厂),甲醇为色谱纯,其他均为分析纯。百合健脾润肺胶囊(本院生产,批号:090824,091020,100224)。

2 薄层色谱鉴别

2.1 黄芩的鉴别[1]取本品内容物2 g,加甲醇20 mL,超声提取20 min,放冷,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2 mL使溶解,作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品加乙醇制成每1 mL含黄芩苷1mg的溶液,作为对照品溶液,取去黄芩的样品,同供试品溶液的制备方法,制成阴性对照液。吸取上述溶液各5 μ L,分别点于同一以4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯—丁酮—甲酸—水(5∶3∶1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干。喷以1%三氯化铁乙醇溶液。结果供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的主斑点,阴性对照液则无斑点显示。见图1。

图1 黄芩的TLC鉴别

2.2 功劳木的鉴别[1]取本品内容物 5 g,加甲醇20 mL,超声处理 15 min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇5 mL溶解,作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品,加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液,作为对照品溶液。取去功劳木的样品,同供试品液的制备方法,制成阴性对照液。吸取上述3种溶液各1 μ L,分别点于同一硅胶G板上,以苯-乙酸乙酯—甲醇—异丙醇—浓氨试液(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂,置氨蒸气饱和的展开缸内,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。结果供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的黄色荧光斑点,阴性对照液则无斑点显示。结果见图2。

图2 功劳木的TLC鉴别

2.3 当归的鉴别[1]取本品内容物2 g,加乙醚15 mL放置1 h,时时振摇,滤过,残渣加丙酮1 mL使溶解,作为供试品溶液。另取当归对照药材0.1 g,同法制成对照药材溶液。取去当归的样品,同供试品溶液的制备方法,制成阴性对照液。吸取上述3种溶液各5μ L,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正己烷—乙酸乙酯(9∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。结果供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显示相同颜色的荧光斑点。阴性对照液则无斑点显示。结果见图3。

图3 当归的TLC鉴别

2.4 白芍的鉴别 取本品内容物1 g,加乙醇5 mL,时时振摇,放置 1 h,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇 0.5 mL溶解,作为供试品溶液。另取芍药苷对照品适量,加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液,作为对照品溶液。取去芍药的样品,同供试品溶液的制备方法,制成阴性对照液。吸取上述供试品溶液与阴性溶液各 4 μ L,对照品溶液1 μ L,分别点于同一硅胶G 薄层板上,以三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%的香草醛硫酸溶液。结果供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。阴性对照液则无斑点显示。结果见图4。

图4 白芍的TLC鉴别

2.5 陈皮的鉴别 取本品内容物2 g,加乙醇5 mL,时时振摇,放置1 h,滤过,滤液作为供试品溶液。取陈皮苷对照品适量,加甲醇制成饱和溶液,作为对照品溶液。另取去陈皮的样品,同供试品溶液的制备方法,制成阴性对照液。吸取上述溶液各2μ L,分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯—甲醇—水(100∶17∶13)为展开剂,展至约3 cm,取出,晾干,再以甲苯—乙酸乙酯—甲酸—水(20∶10∶1∶1)的上层溶液为展开剂,展至约8 cm,取出,晾干,喷以三氯化铝试液,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。结果供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。阴性对照液则无斑点显示。结果见图5。

图5 陈皮的TLC鉴别

2.6 黄芩苷含量测定

2.6.1 对照品的制备 精密称取黄芩苷对照品适量,置棕色瓶中,加70%的甲醇使溶解,摇匀,制成每1 mL含 78μg的黄芩苷对照品溶液,即得。

2.6.2 供试品溶液的制备 取本品10粒,顷出内容物,研细,精密称定约0.2 g,置100 mL容量瓶中,加70%乙醇溶液50 mL,称定重量,超声提取(功率250 w,频率50 Hz)30 min,冷却,加70%乙醇至刻度,滤过,取续滤液,即得。

2.6.3 色谱条件 色谱柱:大连依利特Hypersil ODS-BP(150 mm×4.6 mm,5 μ m);流动相:甲醇-水—磷酸(47∶53∶0.2);流速:1 mL/min;柱温:室温;检测波长:278 nm;理论塔板数按黄芩苷计算应不低于3000。

2.6.4 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液5,7,10,12,15 μ L,按上述色谱条件进样测定,测得峰面积为1350999、1869232、2683631、3200158、3984690,以峰面积积分值 Y 为纵坐标,对照品量X(μ g)为横坐标,作线性回归,得回归方程:

2.6.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μ L,连续进样5次,按上述色谱条件测定,黄芩苷峰面积积分值的平均值为2683149,相对标准偏差 RSD=0.20%。

2.6.6 重复性试验 取同一批号样品(091020)6份,分别按样品测定方法测定。结果:黄芩苷平均含量为4.4mg/粒,RSD=0.19%.

2.6.7 空白试验 取缺黄芩的阴性对照溶液,按供试品溶液制备方法制备,进样,测定,图谱表明阴性对照无干扰。见图6。

2.6.8 稳定性试验 取供试品溶液,分明于0、1.2、4、6、8 h进样 1次(10 μ L),共进样 6次,按上述色谱条件分别测定,峰面积积分值 RSD=0.35%,表明供试品溶液在 8 h内基本稳定。

2.6.9 加样回收率试验 取已知含量的供试品(批号:091020)6份,精密加入一定量黄芩苷对照品,按供试品溶液制备方法制备,依法测定,计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

2.6.10 样品测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10 μ L,注入液相色谱仪,测定,以外标法计算含量。结果见表 2,色谱图见图6。

图6 百合健脾润肺胶囊H PLC色谱图

表2 样品的含量测定结果(n=3)

3 讨论

黄芩苷的含量测定试验参考文献[1]黄芩项下黄芩苷的含量测定方法,采用流动相甲醇-水—磷酸(47∶53∶0.2),流动相乙腈-0.2%磷酸(28∶72),结果黄芩苷采用流动相甲醇-水—磷酸(47∶53∶0.2)可以基线分离不受其他组分干扰,分离效果好,准确度高。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北京:北京化学工业出版社,2005:58～539.