TopoⅡ蛋白表达对晚期胃癌患者化疗后华蟾素维持治疗生存期的影响

高立超 张中冕 李 平 李 燕 李建国 (南阳市中医院，河南 南阳 473003)

在我国，胃癌是常见的恶性肿瘤之一，发病率在恶性肿瘤中列第2位。早期患者以手术治疗为主。大约40%的患者确诊时失去了手术治疗的机会，化疗则成为主要的治疗手段。近几年来，胃癌的化疗取得了一些进展，但中位生存期也只有10个月左右，如何延长化疗的缓解期，是临床工作面临的主要挑战。本院从2007年7月开始采用顺铂(DDP)联合表阿霉素(EPI)、氟尿嘧啶(5-FU)(ECF方案)治疗晚期胃癌，4个周期后，对于疾病无进展的患者，口服华蟾素片维持治疗，并与安慰剂组进行了对比研究。

1 对象与方法

1.1 病例资料 2007年7月1日至2009年3月1日按以下条件入组的晚期胃癌患者120例。(1)经病理检查确诊，未经化疗;(2)年龄30～75岁，Karnofsky(KPS)评分≥70分，预计生存期＞2个月;(3)具有可测量的病灶，能根据CT、X线、胃镜等确定病变的部位及大小;(4)血常规、肝肾功能、心电图正常;(5)患者知情同意。入组患者中，男88例，女32例;年龄33～72岁，中位年龄59岁;贲门癌86例，胃体、胃窦癌34例;TNM国际分期(UICC，1997)均为Ⅳ期;腹膜转移15例，远处淋巴结转移23例，肝转移27例，肺转移11例，两个以上部位转移44例;病理类型:乳头状腺癌13例，管状腺癌19例，低分化腺癌58例，黏液腺癌16例，印戒细胞癌14例。

1.2 治疗方法 120例患者均采用ECF方案治疗，药物剂量及用法:DDP 60 mg/m2，静脉点滴，分为2 ～4 d;EPI 50 mg/m2，静脉冲入，第 1天，5-FU 750 mg·m－2·d－1，第 1～5天，每21 d重复。治疗过程中应用抗呕药物及粒细胞集落刺激因子。每2个周期评价疗效，如果肿瘤缓解(CR)或部分缓解(PR)，或者稳定(SD)，则继续用药，可用至6～8个周期。对于疾病无进展的患者随机分为华蟾素维持治疗组和观察组。维持组持续口服华蟾素片 每次0.3 g×4片 ，3次/d，直到疾病进展(PD)或毒性反应不能耐受。疗效评价方法按照WHO评价标准为CR、PR、SD和PD。有效率为(CR+PR)%。无进展生存期(progression-free survival，PFS)是指从患者随机分组到肿瘤出现进展、毒性不能耐受、失访或死亡的时间，毒性按WHO评价标准分为0～Ⅳ度。

1.3 免疫组化检查方法 入组患者分别收集治疗前2 w内的肿瘤组织蜡块，采用免疫组化(Eli Vision TM二步法)检测拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)蛋白在石蜡包埋组织中的表达。试剂购于北京中杉生物技术有限公司，操作步骤按试剂盒说明。取公司提供的已知阳性组织为阳性对照，以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗为阴性对照。结果判定:双盲法随机观察5个不同高倍视野，计数染色阳性的细胞数，TopoⅡ阳性颗粒分布于胞质(图1)。TopoⅡ判断标准:根据染色的细胞数量及染色强度分为阴性(－):无阳性细胞染色或阳性细胞数低于10%;阳性细胞数＜25%为Ⅰ级;阳性细胞数25% ～50%为Ⅱ级;阳性细胞数50% ～75%为Ⅲ级;阳性细胞数＞75%为Ⅳ级。

1.4 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件进行分析，计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验。

2 结果

2.1 近期疗效 入组患者120例，4例因疾病进展、14例因毒性反应较重或其他因素未完成4个周期化疗而退出。102例(85.0%)按要求完成了4～8个周期化疗，中位数6个周期，化疗疗效评价 CR 9例(8.8%)，PR 46例(45.1%)，SD 34例(33.3%)PD 13例(12.7%)。89例有效和稳定的患者，随机分为华蟾素片维持治疗组45例，对照组44例，两组分别有2例和1例失访，治疗组和观察组分别有43例进行统计学分析，两组中位PFS有显著性差异，分别为6.2个月和5.5个月(P=0.001)。

2.2 TopoⅡ表达及其对疗效的影响 华蟾素维持治疗组TopoⅡ表达阴性 10例(23.3%)，低表达(Ⅰ级、Ⅱ级)13例(30.2%)，高表达(Ⅲ级、Ⅳ级)20例(45.6%)。对照组TopoⅡ表达阴性8例(18.6%)，低表达(Ⅰ级、Ⅱ级)12例(27.9%)，高表达(Ⅲ级、Ⅳ级)23例(53.5%)，两组之间TopoⅡ表达无显著性差异(χ2=0.49，P＞0.05)。各组 PFS如表1所示，TopoⅡ高表达患者华蟾素维持治疗显著延长中位PFS(P＜0.001)，TopoⅡ表达阴性和低表达患者华蟾素维持治疗对中位PFS无显著影响(P＞0.05)。见图1，表1。

图1 胃癌组织中TopoⅡ蛋白表达(免疫组化)

2.3 不良反应 华蟾素维持治疗组患者主要不良反应为恶心4例 (8.9%)，食欲减退6例 (13.3)，Ⅰ/Ⅱ度白细胞减少3例 (6.7%)，乏力 5例 (11.1%)，皮肤过敏反应 1例(2.2%)。

表1 TopoⅡ表达对华蟾素维持治疗患者中位PFS的影响(个月)

3 讨论

化疗是晚期胃癌治疗的主要手段，ECF及其衍生方案是治疗胃癌最有效的方案之一，但其中位PFS也只有6个月左右〔1〕，对于化疗后获益的患者给予适合的维持治疗是一种新的探索。本文采用ECF方案一线治疗晚期胃癌，疗程4个周期，对于疾病无进展的患者，口服华蟾素片维持治疗，延长了患者PFS，亚组分析显示TopoⅡ高表达的患者PFS显著延长，而TopoⅡ表达阴性和低表达的患者PFS无显著延长。TopoⅡ是真核细胞的一种重要核酶，具有切割、旋转和重接DNA的功能，还参与基因重组、转录和 DNA修复〔2〕。研究结果显示TopoⅡ在胃癌中均有不同程度的表达，且随着胃癌组织恶性程度的增高而明显升高〔3〕，与肿瘤生物学行为有一定关系。这与多数低分化胃腺癌对抗癌药较敏感的现象相符〔4〕。华蟾素片是采用科学方法提取干蟾皮中的脂溶性成分精制而成的，其主要成分有蟾毒灵、华蟾素毒基、脂蟾毒配基等。近年来研究发现，华蟾素促使DNA断裂，并通过抑制TopoⅡ活性，阻止TopoⅡ对断裂链的再连接，导致DNA断链的错误修复，激发细胞死亡的生化过程而达到杀伤肿瘤细胞的作用;另外，还能诱导细胞凋亡，诱导肿瘤细胞分化，抑制内皮细胞增殖及血管生成〔5～7〕。本文的结果与临床上含有蟾蜍毒素的中药制剂对肝癌、肺癌、胃癌、食管癌等具有明显的抗肿瘤作用相一致。维持治疗组的毒性反应很小，是一个值得推广的治疗方案。

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