不同厂家六味地黄丸质量比对分析

白 林，方 旬，任 韡 （.解放军总医院药检室，北京 00853；.蚌埠医学院，安徽 蚌埠 33003）

六味地黄丸具有滋阴补肾的功效，是补阴方药中的代表方。该药临床适应证较多，使用金额较大，市售生产厂家较多，性价比相差较大。目前，中药原料及制剂质量相差甚远，六味地黄丸含量测定标准有下限无上限，同为合格产品，市售不同药厂生产的六味地黄丸品种之间有一定的质量差异，这种差异会直接影响患者用药的治疗效果。本文对本院曾用的四个厂家生产的各三批六味地黄丸按照2010年版《中国药典》的质量标准[1]进行比较，并进行体外溶出度的研究，寻找该药疗效存在差异的原因，为临床合理用药及合理购药提供依据。

1 仪器与试药

Agilent 1200高效液相色谱仪（包括在线脱气机、四元泵、自动进样器、柱温箱、紫外检测器、Agilent Chem Station 色谱工作站）（美国）； D-800LS智能溶出试验仪（天津大学无线电厂）。

六味地黄丸（浓缩丸）的厂家：A（批号20091202、20100112、20100225），B（批号0903409、0906403、0907404），C（批号20091218、20100118、20100215），D（批号201001028、201002012、201004023），分别产自山西、安徽、北京、长沙。对照品：丹皮酚、马钱苷（中国药品生物制品检定所，批号0708－9704；111640－200503，含量测定用）。

甲醇、乙腈（色谱纯）；盐酸；四氢呋喃；其他试剂为分析纯；纯化水。

2 方法与结果

2.1 含水量测定

取供试品2～5 g，研碎，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5 mm，精密称定，打开瓶盖在100～105 ℃干燥5 h，将瓶盖好，移置干燥器中，冷却30 min，精密称定重量，再在100～105 ℃干燥1 h，冷却30 min，精密称重，至连续两次称重的差异不超过5 mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量（%），应不超过12.0%。结果见表1。

2.2 重量差异测定

以一次服用量最高丸数8丸为1份，取供试品10份，分别称定重量，再与标示总量比较（无标示量的丸剂，与平均重量比较）。超出重量差异限度（±9%）的不得多于2份，并不得有1份超出限度一倍。结果见表1。

2.3 溶散时限测定

取供试品6丸，按照《中国药典》2010年版一部附录ⅠA溶散时限检查法加档板检查，应在2 h内全部溶散。结果见表1。

表 1 不同厂家的六味地黄丸中含水量、重量差异、溶散时限比较.±sTab 1 Comparison of water content, weight variation and dissolution time of different Liuweidihuang pills.±s

表 1 不同厂家的六味地黄丸中含水量、重量差异、溶散时限比较.±sTab 1 Comparison of water content, weight variation and dissolution time of different Liuweidihuang pills.±s

厂家 含水量/ % 重量差异/ % 溶散时限/min A 8.5±1.0 2.5±0.5 90±3.2 B 7.8±1.2 0.8±0.2 36±4.1 C 7.5±2.1 2.8±0.6 29±5.3 D 6.5±1.4 3.6±0.8 30±3.6

2.4 丹皮酚含量测定

2.4.1 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水（70∶30）为流动相，检测波长为274 nm，理论塔板数按丹皮酚计算不低于3500。

2.4.2 对照品溶液的制备 取丹皮酚对照品适量，加甲醇溶解并稀释成每1 mL含20 µg的溶液，摇匀，即得。

2.4.3 供试品溶液的制备 取六味地黄丸20粒，研碎，取约0.4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250 W，频率33 KHz）45 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4.4 含量测定 按照供试品溶液制备方法分别制备四个厂家六味地黄丸的供试品溶液，用0.45 µm微孔滤膜滤过，分别取10 µL注入液相色谱仪，记录色谱图，另取对照品溶液10 µL注入液相色谱仪，记录色谱图，见图1。按外标法以峰面积计算，分别测定各供试品溶液中丹皮酚的含量。结果见表2。

图 1 丹皮酚色谱图注：1－丹皮酚；A、B、C、D、E分别为A、B、C、D厂家产品色谱图及对照品色谱图Fig 1 Chromatograms of paeonolNote∶1－paeonol; chromatogram A, B, C, D, E stand for that of the products from vender A, B, C, D and control respectively

2.5 马钱苷含量测定

2.5.1 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以四氢呋喃-甲醇-乙腈-0.05%磷酸（1∶4∶8∶87）为流动相，检测波长为236 nm，理论塔板数按马钱苷峰计不低于4000。

2.5.2 对照品溶液的制备 取马钱苷对照品适量，用50%的甲醇溶解并稀释成每1 mL含20 µg的溶液，摇匀，即得。

2.5.3 供试品溶液的制备 取六味地黄丸20粒，研碎，取约0.4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，置中性氧化铝柱(100～200目，4 g，内径1 cm，干法装柱)上，用40%甲醇50 mL洗脱，收集流出液及洗脱液，蒸干，残渣加50%甲醇适量使溶解，并转移至10 mL容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.5.4 含量测定 按照供试品溶液制备方法分别制备四个厂家六味地黄丸的供试品溶液，用0.45 µm微孔滤膜滤过，分别取10 µL注入液相色谱仪，另取对照品溶液10 µL注入液相色谱仪，记录色谱图，见图2。按外标法以峰面积计算，分别测定各供试品溶液中马钱苷的含量。结果见表2。

图 2 马钱苷色谱图注：1－马钱苷；A、B、C、D、E分别为A、B、C、D厂家产品色谱图及对照品色谱图Fig 2 Chromatograms of loganinNote∶1－loganin; chromatogram A, B, C, D, E stand for that of the products from vender A, B, C, D and control respectively

表 2 不同厂家六味地黄丸中丹皮酚和马钱苷的含量测定结果.mg·g-1, ±sTab 2 Results of content determination of paeonol and loganin in different Liuweidihuang pills.mg·g-1, ±s

表 2 不同厂家六味地黄丸中丹皮酚和马钱苷的含量测定结果.mg·g-1, ±sTab 2 Results of content determination of paeonol and loganin in different Liuweidihuang pills.mg·g-1, ±s

厂家 丹皮酚 马钱苷A 1.6±1.2 1.8±1.6 B.1.9±2.2 0.7±1.2 C 3.8±2.4 1.7±2.0 D 3.5±1.8 1.9±3.5

2.6 丹皮酚和马钱苷体外溶出度测定

2.6.1 溶出度测定方法 使用小杯搅拌浆法，按2010年版《中国药典》二部附录XC溶出度测定法第三法项下操作，以0.1 mol·L-1盐酸溶液（250 mL水加入2 mL盐酸脱气）作为溶出介质，温度为（37±0.5） ℃，转速为75 r·min-1[2]，分别取同一厂家同一批生产的六味地黄丸（浓缩丸）6份，每份8粒，精密称定，自六味地黄丸接触溶出介质起，立即计时，分别在10、20、30、45、60、80 min时，吸取溶液1 mL，同时补加同温溶出介质1 mL，立即用0.45 µm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。按照2010年版《中国药典》一部六味地黄丸中丹皮酚和马钱苷含量测定方法[1]，测定各个时间点丹皮酚和马钱苷的峰面积并计算累积溶出量。

2.6.2 溶出度结果 计算各个时间点的平均累积溶出度，结果见表3，表4。

3 讨论

3.1 本试验中测定的四个厂家六味地黄丸的水分、重量差异、溶散时限均在合格范围，其中，水分、重量差异区别不大，但A厂家溶散时限较其他三个厂家有较明显的延长。

表 3 六味地黄丸中丹皮酚平均累积溶出度.%, n=6,±sTab 3 Average cumulative dissolution of paeonol in Liuweidihuang pills.%, n=6,±s

表 3 六味地黄丸中丹皮酚平均累积溶出度.%, n=6,±sTab 3 Average cumulative dissolution of paeonol in Liuweidihuang pills.%, n=6,±s

厂家时间/min 10 20 30 45 60 80 A 6.50±0.43 9.90±0.45 13.50±0.81 17.30±0.66 22.60±1.80 25.80±1.70 B 6.10±0.29 9.60±0.43 13.90±1.34 21.40±1.49 25.50±1.60 33.30x±1.76 C 0.60±0.26 1.20±0.37 2.90±0.45 4.30±0.88 4.70±1.69 9.80±2.51 D 8.80±0.45 23.30±9.33 44.60±9.31 56.70±9.08 71.40±7.37 77.7±8.50

表 4 六味地黄丸中马钱苷平均累积溶出度.%, n=6, ±sTab 4 Average cumulative dissolution of loganin in Liuweidihuang pills.%, n=6, ±s

表 4 六味地黄丸中马钱苷平均累积溶出度.%, n=6, ±sTab 4 Average cumulative dissolution of loganin in Liuweidihuang pills.%, n=6, ±s

厂家时间/min 10 20 30 45 60 80 A 21.5±0.31 29.9±0.78 35.8±0.29 45.3±1.12 56.6±2.03 65.1±0.40 B 11.6±1.77 17.9±1.50 29.8±0.88 37.9±0.45 53.3±2.19 66.4±3.24 C 17.2±0.32 26.7±0.71 31.5±1.09 43.1±2.32 52.2±2.08 62.6±2.56 D 14.5±0.65 32.4±2.32 51.6±5.27 76.6±1.27 90.0±2.28 96.1±1.22

3.2 依据中国药典标准，六味地黄丸（浓缩丸）含马钱苷不得少于1.4 mg·g-1，含丹皮酚不得少于1.8 mg·g-1。四个厂家的六味地黄丸均在有效期内，B厂家产品含马钱苷为0.7 mg·g-1，A厂家产品含丹皮酚为1.6 mg·g-1，含量不符合规定。马钱苷用于山茱萸的质量评价[3]，丹皮酚为六味地黄丸口服后的原形入血成分[4]，二者含量能够反映六味地黄丸的内在质量，因此，含量不同会导致不同厂家的同一种药物具有不同的疗效。

3.3 由于2010年版以前的《中国药典》未收载六味地黄丸（浓缩丸）的质量标准，其质量标准收载于《卫生部药品标准中药成方制剂第十一册》，丹皮酚的含量测定从提取、检测到含量标准均不同于《中国药典》；对山茱萸的质量评价是用无特异性的熊果酸而不是马钱苷，因此，标准的不同可能是造成该两个厂家产品不合格的原因所在。

3.4 A厂家产品90 min溶散，明显长于B、C、D厂家，但体外溶出结果差异并不显著，说明溶散只是物理现象，是溶出的前提，溶散了，并不一定能溶出，药物只有溶出，才能被机体吸收。因此，溶出度检查结果更为重要。

3.5 本试验溶出度检查中，溶出介质采用与胃液相似的盐酸溶液，转速模拟胃蠕动，因用HPLC法[1]检测其中的两种成分，试验耗时较长，80 min的溶出结果，已能比对不同厂家的质量差异，并且考虑样品溶液稳定性的因素，选用采样时间为80 min。

3.6 四个厂家药物的体外溶出度有显著性的差异，其中，D厂家丹皮酚、马钱苷溶出度试验结果均明显优于其他三个厂家，其他三个厂家马钱苷的溶出度试验结果相似。A、B、C厂家产品中丹皮酚80 min时的溶出度分别为25.8%、33.3%和9.8%。溶出度的差异可能导致生物利用度的差异[5]，并与临床疗效相关。生产工艺的不同可能是导致四个厂家体外溶出度差异显著的主要原因，如浓缩丸药材的粉碎程度，药粉混合的均匀性，成药的硬度等都对其有一定的影响。故制作工艺的标准化是提高药品质量的重要方面。

[1] 国家药典委员会.中国药典（一部）[S].2010年版.北京∶中国医药科技出版社，2010.

[2] 鲜洁晨，张宁，冯怡.六味地黄丸质量差异分析[J].中成药，2009，31(6)∶882-886.

[3] 金城，罗云，王强，等.不同产地山茱萸药材质量的比较[J].解放军药学学报，2008，24(4)∶360-362.

[4] 胡建平，韩丽娜，李正翔.六味地黄丸（水蜜丸）的质量评价[J].中成药，2006，28(9)∶1293-1297.

[5] 单婷婷，董瑞华，高洪志，等.两种阿仑膦酸钠片的崩解度和溶出度及在Caco-2细胞模型上的转运比较[J].中国药物应用与监测，2010，7(4)∶207-210.