Survivin在大肠癌中的表达与其64排CT表现的关系

蔡胜艳，王乐秋，代海平，董祥梅

牡丹江医学院红旗医院 a.放射科；b.五官科；c.病理科，黑龙江 牡丹江157013

Survivin在大肠癌中的表达与其64排CT表现的关系

蔡胜艳a，王乐秋b，代海平c，董祥梅c

牡丹江医学院红旗医院 a.放射科；b.五官科；c.病理科，黑龙江 牡丹江157013

目的探讨大肠癌患者CT表现及分期与Survivin（凋亡抑制基因）表达的相关性。方法62例术前行64排CT检查并经手术病理证实为结直肠癌患者，采用免疫组化检测肿瘤标本中Survivin的表达,分析Survivin表达与CT分期及CT表现的关系。结果62例结直肠癌组织中，Survivin的阳性表达率为80.6%，随大肠癌CT分期增加Survivin的阳性表达率逐渐增加，与CT表现中的Ducks分期、浸润深度及淋巴结转移有显著性差异（均P＜0.05）。结论Survivin在大肠癌侵袭转移中发挥重要作用，结合术前CT影像表现，对患者预后的判断及术后治疗方案的选择有积极意义。

CT；大肠癌；凋亡抑制基因；免疫组织化学

0 前言

大肠癌（CRC）是消化道常见的恶性肿瘤之一，在过去的 20年中，世界上大多数国家或地区大肠癌的发病率呈上升趋势[1]。迄今大肠癌的病因不明，但 20 世纪 60 年代以来，分子生物学逐渐进入肿瘤研究领域，大肠癌的发病机制及临床方面的研究已进入分子水平[2]。己经证明，许多基因在大肠癌的演进过程中发挥重要作用，大肠癌是一种基因病己得到共识。大肠癌的发生、发展过程与许多因素有关，其中癌基因的激活和抑癌基因的失活在这一过程中起着重要作用[3]。大肠癌的 CT 分期是临床分期的重要依据,对预后及术后治疗方案的选择至关重要。笔者试图通过 62 例大肠癌 CT 表现及分期与 Survivin 表达的相关性研究，评价大肠癌影像学表现与其恶性程度和预后的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

62 份大肠癌标本取自 2007 年 9 月～2010 年 7 月在我院行大肠癌根治性切除术的患者。所有患者术前均未接受过放疗和化疗，均有完整的随访资料。年龄 26～88 岁，平均年龄 61 岁 ；男性 33 例，女性 29 例 ；直肠癌 23 例，结肠癌 39例。

1.2 CT扫描技术及CT分期标准评定

CT 扫描仪为 Aquiline 64 排螺旋 CT 扫描机。扫描条件：120KV，200mAs，层厚 0.5mm，扫描范围从膈顶至耻骨联合，常规平扫后作增强扫描，非离子型对比剂碘海醇（300mgI/ mL）使用高压注射器经前臂静脉内团注，剂量 1.5mL/kg，流率 2.0mL/s，总剂量不超过 100mL，延时 60s 扫描。肿瘤CT 分期标准按 Dukes分期，Ⅰ期 3 例，Ⅱ期 16 例，Ⅲ期41 例，Ⅳ期 2 例。CT 征象评定采用双盲法，由 2 位从事腹部放射诊断的主治医生分别进行，有分歧时由上级医生评定。CT征象评定与免疫组化评定分别单独进行。

1.3 免疫组织化学染色

采用 EliVisinn 二步法检测大肠癌组织中 Survivin 的表达，用 PBS替代一抗作阴性对照，用已知阳性切片作阳性对照。

（l）常规石蜡连续 4μm 切片，二甲苯脱蜡，经梯度酒精（100%-95%-90%-80%）水化。

（2）进行组织抗原修复，采用柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复法。取 pH=6.0 柠檬酸缓冲液 1500mL 于压力锅中，大火加热直至沸腾；将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中。盖上锅盖，扣上压力阀，继续加热至喷气，从喷气开始计时，2min 后，压力锅离开热源，冷却至室温，取出玻片，先用蒸馏水冲洗2 次，之后用 PBS（pH=7.4）冲洗 2 次，每次 3min。

（3）3% 过氧化氢去离子水孵育 5min，以阻断内源性过氧化物酶的活性，PBS 冲洗 3 次。

（4）每张切片加一滴第一抗体 ；鼠抗人 Survivin 单克隆抗体，室温下孵育 60min。

（5）PBS 冲洗 3 次，每次 5min。

（6）滴加 IgG 抗体一 HRD 多聚体，室温下孵育 15min。PBS 冲洗 3 次，每次 2min。

（7）应用 DAB 溶液显色 1～4min，显微镜下控制显色程度，自来水冲洗，终止反应。

（8）蒸馏水冲洗，苏木素复染，自来水冲洗返蓝。

（9）切片用梯度酒精（80%-90%-95%-100%）脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固。

（10）Olympus显微镜观片。

1.4 免疫组织化学染色结果判定

免疫组化判定标准：以细胞膜、细胞核或胞浆出现棕色颗粒为阳性。癌组织 Survivin 蛋白主要定位于大肠癌细胞细胞核或细胞浆，为棕黄色颗粒，呈异质性染色。

1.5 统计分析

采用卡方检验，分别分析 Survivin 的表达与大肠癌的CT表现（肿瘤部位、肿瘤大小、侵润程度，淋巴结转移、Dukes 分期）的相关性。以 P＜0.05 为差异有统计学意义，所有统计分析均采用计算机 SPSS13.O 软件进行检验。

2 结果

2.1 大肠癌的CT分期与Survivin表达相关性（见表1）

Survivin 在结直肠癌中的表达与肿瘤大小、肿瘤位置、无显著性差异（均 P＞0.05），与 Dukes 分期、浸润深度及淋巴结转移有显著差异（均 P＜0.05）。

表1 大肠癌的 CT 分期与 survivin 表达相关性

3 讨论

控制侵袭、防止浸润、转移是当今肿瘤研究的重要课题之一[4]。侵袭和转移是影响结直肠癌患者治疗效果和预后的重要因素。本研究用免疫组化染色法检测原发肿瘤灶中 Survivin 的表达并与 CT 分期对照，发现随大肠癌分期增加 Survivin 的阳性表达百分率逐渐增加。深入探讨它们之间的作用机制，对阐明和阻断肿瘤转移的形成具有重要价值。Survivin 在结直肠癌中的表达与肿瘤大小、肿瘤位置无明显相关，与 Dukes分期、浸润深度及淋巴结转移有相关关系，表明不论其病理分化程度、肿瘤大小、位置及CT病灶强化程度如何，均应积极进行术后治疗，早期预防转移及侵袭的发生，而 Dukes分期大，周围脂肪浸润及淋巴结肿大预示预后较差[5-8]。随着科学的发展和研究的深入，在分子水平结合大体影像学表现对大肠癌的预后提供新的方向和思路，符合当前影像学发展的方向，我们将做进一步的努力。

[1] Montgomery E,Abraham SC, Fisher C．CD44 loss in gastric stromaltumors as a prognostic marker[M]．Lippincott Williams & Wilkins,Inc,2004,28:168-177．

[2] Wilmanns C,Grossmann J,Steinhauer S,et al．Soluble serum E-cad-herin as amarker oftumor progression in colorectal cancer patients[J]．Clin Exp Metastasis,2004,21:75-78．

[3] Bartolazzi A,Gasbarri A,PapottiM,et al．Application of an immuno-diagnostic method for improving preoperative diagnosis of nodular thy-roid lesions[J]．Lancet,2001,(57):1644-1650．

[4] 冼沛中,康旭,王芳．Survivin在大肠癌中的表达及其与血管生长因子的相关性研究[J]．中国实验诊断学,2005,9(2):216-219．

[5] 金军,袁宏银,熊金．bag-1,bcl-2在大肠肿瘤和大肠癌中的表达及意义[J]．肿瘤防治研究,2005,32(5):254-256．

[6] 王从玉,邓跃华,刘弋,等．nm23 VEGF-C及VEGFR-3在大肠癌中的表达及意义[J]．中国肿瘤临床,2008,46(19):42-46．

[7] 邵佳发,张树春,周媛媛,等．大肠癌相关肿瘤转移抑制基因的研究进展[J]．医学综述,2009,16(22):70-72．

[8] 熊煜,甄万燚．p16和CyclinD1在大肠癌组织中的表达及临床意义[J]齐齐哈尔医学院学报,2008,25(18):14-15．

Correlation of CT Appearance with Survivin Expression in Colorectal Cancer

CAI Sheng-yana,WANG Le-qiub, DAI Hai-pingc,DONG Xiangmeic
a.Radiology Department;b.ENT;c. Pathology Department,Hongqi Hospital of Mudanjiang Medical College,Mudanjiang Heilongjiang 157013,China

ObjectiveTo study the correlation between 64-slice CT staging, appearance and Survivin expression in colorectal cancer.Methods62 cases of colorectal cancer proved by surgery and pathology were examined with abdominal CT scan before operation.The expression of Survivin was estimated with SP immunohistochemical technique individually.The relation between CT staging, appearance and expression of survivin was retrospectively analyzed.ResultsSurvivin positive expression was 80.6%.According with the Ducks staging increasing, Survivin expression between Ducks staging, invasion of adjacent fat and lymph nodes metastases had significant difference (P＜0.05).ConclusionSurvivin combine with CT scan before operation, can play important role in invasion and metastases of colorectal cancer, judge prognosis and choose correct therapy.

CT; colorectal cancer; Survivin; immunhistochemistry

R735.34

B

10.3969/j.issn.1674-1633.2011.06.034

1674-1633(2011)06-0095-02

2010-12-07

作者邮箱：mdjwjf@qq．com