刺五加注射液的安全性考察

李秀梅，范能全，赵欣欣，杨柳，詹宇杰，张芳艳

(重庆市药品检验所，401121)

刺五加注射液收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第18册，系刺五加科植物刺五加经提取有效成分而成的供静脉滴注的中药注射剂，除具有免疫调节、抗肿瘤作用外，还可治疗心脑血管疾病、糖尿病、神经衰弱等症。其质量标准中的生物安全性检验项目有热原、异常毒性和无菌。通常按其现行质量标准检验上述指标均符合规定，然而在临床使用中不时发现其存在以下不良反应:药物热、过敏性休克、全身症状、药疹、呼吸道反应、胃肠道反应等［1-2］。

引起中药注射液发生不良反应的原因通常是高分子物污染、抗原性、与输液的配伍作用等［3-4］。为进一步考察刺五加注射液的安全性，笔者对3个厂家生产的刺五加注射液进行了一系列实验考察，报道如下。

1 材料与方法

1.1 药物与试剂 刺五加注射液76批(黑龙江乌苏里江制药有限公司59批，黑龙江省珍宝岛制药有限公司哈尔滨分公司2批，黑龙江多多药业有限责任公司15批);刺五加标准抗原(中国药品生物制品检定所抗生素室，规格:4 mg·mL-1);特异性刺五加抗体(中国药品生物制品检定所抗生素室);牛血清白蛋白干粉(北京欣经科生物技术有限公司);羊抗兔辣根过氧化物酶抗体(中国药品生物制品检定所);凝胶缓冲液(三羟甲基氨基甲烷36.33 g，丙烯酰胺0.3 g，加适量水，调pH至8.45，定容至100mL);阳极缓冲液(三羟甲基氨基甲烷 12.1 g，加适量水溶解，用盐酸液调pH=8.9，定容至500mL);阴极缓冲液(三羟甲基氨基甲烷 6.05 g，tricine8.96 g，丙烯酰胺 0.5 g，定容至500mL，pH8.0);0.1% 硝酸银染色液;过硫酸铵、甘油、硝酸银和 N，N，N＇，N＇-四甲基乙二胺(TEMED)(分析纯，华美生物工程公司);MAKER(ABI公司生产，国内分装);96孔酶标板(COSTAR 2592);500 μL超滤管(Sartorius Vivaspin)。

1.2 仪器 酶标仪(安图2010);电泳仪(BIO-RAD公司);台式高速离心机。

1.3 方法

1.3.1 用间接酶联免疫实验考察过敏物质 用间接酶联免疫法，按照中国药品生物制品检定所抗生素室提供的试剂盒操作规程依法操作。结果判定标准(由中国药品生物制品检定所抗生素室提供):计算空白对照的均值和标准差，当待检样品吸光度值高于或等于空白对照均值+5倍标准差时，判定为阳性［5-6］。

1.3.2 超滤电泳实验考察大分子物质 对制品中可能存在的大分子物质进行检测。采用截留相对分子质量10 000的超滤膜对刺五加注射液进行超滤，并分别对原液、截留液、滤出液进行Tris-Tricine SDS-PAGE电泳分析，考察各厂家的超滤、过滤工艺对刺五加注射液大分子物质的截留效果，以评价不同厂家过滤工艺的优劣［5，7］。胶液配方见表 1。

取刺五加样品原液500 μL置于超滤管中，按转速4 000 r·min-1超滤 2.5 ～4.0min，收集超截留液和滤出液。并分别将样品原液、截留液和滤出液进行Tris-Tricine SDS-PAGE电泳。电泳毕，进行银染。

1.3.3 其他实验 按照现行质量标准进行了热原、异常毒性以及无菌实验考察，还进行了标准外的实验考察:输液配伍混合溶液的不溶性微粒实验、渗透压测定、降压物质检测以及豚鼠过敏实验。

表1 两种胶液配方mL

2 结果

2.1 酶联免疫实验考察过敏物质的结果

2.1.1 标准抗原的测定结果 见表2。

2.1.2 样品测定结果 3个厂家的76批刺五加注射液吸光度检测结果均＜1.322，按照判定标准，所含的过敏性物质均在规定限度范围内，均呈阴性，均符合规定。不同厂家、同一厂家不同批次之间的数据差异无统计学意义。

2.2 超滤电泳实验考察大分子物质的结果 3个厂家的47个样品的电泳结果比较见表3。

电泳实验结果表明:①3个厂家样品的原液中都不同程度地残存一些相对分子质量＞10 000的高分子物质，经过截留相对分子质量为10 000的超滤膜后，大分子物质明显减少的为16批(34.0%)，有一定减少的为13 批(27.7%)，无明显变化的为18 批(38.3%)，说明各厂家都应改进工艺;②3个厂家的过滤、超滤工艺的有效性的顺序为:乌苏里江公司＞多多药业公司＞珍宝岛公司。

表2 标准抗原的间接酶联免疫法实验结果

表3 超滤后大分子物质减少情况的比较

2.3 其他安全性实验的结果 热原、异常毒性以及无菌实验均符合规定，输液配伍混合溶液的不溶性微粒实验考察、渗透压测定、降压物质检测以及豚鼠过敏实验，均未见异常。

3 讨论

常规的SDS-PAGE电泳对相对分子质量＜10 000的物质作电泳分离时，实验效果差，而Tris-Tricine SDSPAGE电泳适合分离相对分子质量范围为1～10 000的物质［7］。

间接酶联免疫实验以空白对照均值加5倍标准差的和作为检测限判定标准，可控制假阳性结果。

对3个厂家共76批样品还按照质量标准做了热原、异常毒性以及无菌实验，结果均符合规定，又进行了输液配伍混合溶液的不溶性微粒实验考察、渗透压测定、降压物质检测以及豚鼠主动过敏实验等标外方法的实验考察，也均未见异常。

对刺五加注射液开展的超滤电泳实验发现，3个厂家的产品均不同程度地存在相对分子质量＞10 000的大分子物质。推测这些大分子物质可能是导致患者发生变态反应的原因。

间接酶联免疫实验未检出刺五加抗原，可能是由于实验采用的样品原液成分复杂，影响了实验结果。建议今后将样品原液进行超滤，再对得到的截留大分子物质作间接酶联免疫实验，以进一步确证大分子物质是否为过敏物质。

［1］符壮.我院刺五加注射液不良反应分析［J］.中国药房，2008，19(3):222－223.

［2］杨军，陈莲珍.刺五加注射液致不良反应119例分析［J］.山西医药杂志，2008，37(8):729－730.

［3］肖树雄，李泳雪.中药注射液安全性问题及质量控制探析［J］.中国药师，2009，12(7):955－957.

［4］刘士敬.中药注射剂不良反应原因分析［J］.中国社区医师，2007，23(5):19－20.

［5］于风平，胡昌勤，崔生辉，等.刺五加注射液中过敏性杂质的分析［J］.中国药学杂志，2008，43(5):384－387.

［6］林惠玲，龚海涛，林连成.变态反应性疾病过敏原特异性及总IgE 的检测［J］.中国热带医学，2008，8(4):580－581.

［7］王旭，何冰芳，李霜，等.Tricine-SDS-PAGE电泳分析小分子多肽［J］.南京工业大学学报，2003，25(2):79－81.