银杏外种皮黄酮类化合物的提取方法研究

宋国斌，席国萍

(山西大同大学医学院，山西 大同 037009)

银杏是地球上现存最古老的中生代孑遗植物之一[1]，属银杏科银杏属落叶乔木，又称白果树、公孙树，为我国特有树种[2]。银杏外种皮是银杏果仁的皮层，即种子硬壳外面的肉质皮层，俗称白果衣胞[3]。银杏外种皮的主要化学成分是黄酮类化合物、银杏内酯等，其中黄酮类化合物具有抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、防治心血管疾病、增强免疫能力等重要作用。我国有着丰富的银杏资源，但银杏外种皮的研究相对较少。在银杏产区，通常只取其仁，而将外种皮丢弃，既严重污染环境，又浪费了可观的生物资源。作者在此分别以水、乙醇、丙酮作为提取溶剂，对银杏外种皮黄酮类化合物的不同提取方法进行比较研究，拟为银杏外种皮资源的开发利用提供依据。

1 实验

1.1 材料、试剂与仪器

银杏外种皮，采自贵州省贵阳市乌当区杨昌镇。

芦丁对照品，中国药检所；其它试剂均为分析纯。

UNICO UV-2000型紫外可见分光光度计，上海丽度电子科技发展有限公司；RE-25型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；METTLER-AE240型电子天平，瑞士梅特勒公司；康氏电动振动仪，北京通县医疗器械厂。

1.2 方法

1.2.1 银杏外种皮的前处理

将银杏外种皮自然风干后，置于50 ℃烘箱中烘至变脆，粉碎，置于冰箱中保存。

1.2.2 银杏外种皮总黄酮提取液的制备

准确称取10 g银杏外种皮，以甲醇为溶剂，用索氏提取器在70 ℃提取至提取液无色，浓缩至干，用70%乙醇溶解定容至50 mL，待测。

1.2.3 银杏外种皮黄酮类化合物提取液的制备

(1)浸提法

准确称取3份银杏外种皮，每份10 g，在室温下，分别以5 BV的水、乙醇、丙酮作为提取溶剂，浸提3次，每次1 h；合并提取液，于50 ℃减压浓缩至干，用70%乙醇溶解定容至50 mL，待测。

(2)振荡提取法

准确称取3份银杏外种皮，每份10 g，在室温下，分别以5 BV的水、乙醇、丙酮作为提取溶剂，振荡提取3次，每次1 h；合并提取液，于50 ℃减压浓缩至干，用70%乙醇溶解定容至50 mL，待测。

(3)回流提取法

准确称取3份银杏外种皮，每份10 g，在70 ℃下，分别以5 BV的水、乙醇、丙酮作为提取溶剂，回流提取3次，每次1 h；合并提取液，于50 ℃减压浓缩至干，用70%乙醇溶解定容至50 mL，待测。

1.3 测定方法

1.3.1 标准曲线的绘制

以芦丁为标准品、70%乙醇为溶剂，准确配制0.13 mg·mL-1的芦丁标准溶液。精确量取1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL芦丁标准溶液置于10 mL具塞试管中，加30%(体积分数)乙醇至5 mL；再加5%(质量浓度)NaNO20.3 mL，摇匀，放置6 min；再加10%(质量浓度)Al(NO3)30.3 mL，摇匀，放置6 min；再加4%(质量浓度)NaOH 4 mL；用蒸馏水稀释至10 mL，室温放置15～20 min，以蒸馏水为空白。在波长510 nm处测定吸光度，由最小二乘法得浓度与吸光度标准曲线方程，并据此计算黄酮类化合物含量[4]。

1.3.2 银杏外种皮总黄酮的含量测定

准确量取1 mL银杏外种皮总黄酮提取液，置于具塞试管中，按1.3.1法测定吸光度，由标准曲线方程计算黄酮类化合物的浓度，进而计算银杏外种皮总黄酮的含量。

1.3.3 银杏外种皮提取液黄酮类化合物的含量测定

准确量取1 mL银杏外种皮提取液，置于具塞试管中，按1.3.1法测定吸光度，由标准曲线方程计算黄酮类化合物的浓度，进而计算银杏外种皮提取液黄酮类化合物的含量。按下式计算黄酮类化合物的提取率(%)：

2 结果与讨论

2.1 标准曲线方程

用最小二乘法对标准曲线进行线性回归，得线性方程：

Y=0.09894A+0.00180(R=0.9995)

式中：Y为芦丁标准溶液浓度，mg·mL-1，A为吸光度。

2.2 银杏外种皮总黄酮的含量

按1.3.2方法，测得银杏外种皮总黄酮的含量为30.78 mg·g-1。

2.3 银杏外种皮黄酮类化合物的提取效果比较(表1)

表1 不同溶剂、不同方法银杏外种皮黄酮类化合物的提取率比较/%

由表1可以看出，从溶剂方面比较，乙醇的提取率最高；从提取方法比较，回流提取法提取率最高。因此，以乙醇作为溶剂、采用回流提取法提取银杏外种皮黄酮类化合物的提取效果最好，提取率超过84%。

2.4 重复性实验

以乙醇为提取溶剂，采用回流提取法进行3次平行实验，提取率分别为84.60%、84.53%、84.71%，平均提取率为84.61%，标准偏差为0.0009，RSD为0.10%。表明所确定的最佳方法的重复性良好。

3 结论

比较了不同溶剂、不同方法对银杏外种皮黄酮类化合物的提取效果。结果表明，以乙醇作为提取溶剂，采用回流提取法提取银杏外种皮黄酮类化合物的效果最好，提取率超过84%，标准偏差为0.0009，RSD为0.10%。为银杏外种皮资源的开发利用提供了依据。

[1] 冯彤，于新，吴建生，等.不同处理方法对银杏外种皮黄酮含量变化的影响[J].农业工程学报，2006，22(4)：178-181.

[2] 李春美，何静仁，杜红祥，等.银杏果外种皮总黄酮提取工艺研究[J].食品科学，2002，23(12)：70-74.

[3] 唐于平，楼凤昌，王欢，等.银杏外种皮的化学成分和药理作用[J].药学进展，2000，24(3)：152-155.

[4] 卢锦花，胡小玲，岳红，等.大孔吸附树脂对银杏叶黄酮类化合物吸附及解吸的研究[J].化学研究与应用，2002，14(2)：164-166.