正交试验法优选西洋参提取工艺
2011-07-21李素婷
李素婷，刘 郁
(徐州工业职业技术学院，江苏 徐州 221140)
西洋参(Radix Panacis Quinquefolii)，别名洋参、花旗参，为五加科植物西洋参(Panax quinquefolium L.)的根，原产于北美，我国亦有栽培。西洋参性凉，味甘、苦，补肺阴，清火，养胃生津，含人参皂甙Ro、Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1 以及假人参皂甙 F11(pseudoginsenoside F11)等，另外还含精氨酸、天冬氨酸等18种氨基酸。具有抗癌、抗疲劳、抗缺氧、抗辐射、抗衰老等多种功能［1-2］。本文以人参皂苷Re为指标，对西洋参提取工艺进行了优化。
1 材料
西洋参，市售;人参皂苷Re对照品(供含量测定用)，中国药品生物制品检定所;乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
HP1100高效液相色谱仪、G1328A紫外可见检测器、HP色谱工作站，美国惠普公司。
2 方法与结果
2.1 人参皂苷Re含量测定
采用高效液相色谱法［3］测定。
2.1.1 色谱条件 YMC-C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈-0.5%磷酸溶液(20 ∶80)，流速:1 mL/min;检测波长:205 nm;柱温:20℃;进样量:20 μL。
2.1.2 线性关系考察 精密称取人参皂昔Re对照品适量，加流动相配制成浓度为0.500 mg/mL的对照品溶液，精密吸取 l，2，4，6，8，10 mL 置 10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别进样20 μL，测定峰面积，以峰面积(Y)对进样量(X，μg)进行线性回归，回归方程为:Y=168.24 X+1.38，r=0.999 9，人参皂苷 Re 在 1 ～10.00 μg 范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.1.3 供试品溶液的制备 西洋参提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩定容至100 mL，精密吸取0.1 mL，置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过即得。
2.1.4 含量测定 分别取供试品溶液和对照品溶液(0.25 mg/mL)20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法，以峰面积计算含量。
2.2 单因素试验
2.2.1 提取时间的选择 取西洋参20 g，4份，分别加70%乙醇200 mL，分别在70℃回流提取1，1.5，2和3 h，测定提取液中人参皂苷Re的含量，结果分别为 1.75%，2.05%，2.08% 和 2.09%。可见，提取1.5 h后含量增加很少，因此，选择提取时间为1.5 h。
2.2.2 提取温度的选择 取西洋参20 g，3份，分别加70%乙醇200 mL，分别在60，70和80℃回流提取1.5 h，测定提取液中人参皂苷Re的含量，分别为2.04%，2.08%和2.19%。可见，在80 ℃提取含量最高，因此，选择提取温度为80℃。
2.3 正交试验方案
确定了提取时间和提取温度，设计乙醇浓度、溶剂用量(料液比)、提取次数三因素三水平的正交试验(表1)，以人参皂苷Re含量为评价指标筛选最佳工艺条件。结果见表2～3。
表1 因素水平表
表2 正交试验结果
表3 正交试验方差分析表
由正交试验的直观分析，影响提取效果的因素的顺序为提取次数＞乙醇浓度＞溶剂的用量，提取的次数影响最大。从方差分析结果看，提取次数和乙醇浓度对提取影响较显著，而溶剂用量也比较显著。最佳的组合为A3B1C3，但乙醇的浓度为70%和80%提取的效果相差不大，因此选用70%的乙醇。确定最佳的提取工艺为A2B1C3。即用70%的乙醇提取3次，溶剂用量为西洋参的10倍(料液比为1∶10)。
2.4 最佳提取工艺的验证
取西洋参20 g，3份，分别加70%乙醇200 mL，分别在80℃回流提取1.5 h，提取3次，合并滤液。浓缩至100 mL，测定提取液中人参皂苷Re的含量，结果分别为2.26%，2.33%和2.39%，平均为2.33%。与正交试验结果基本一致。
3 结论
本研究结合单因素试验和正交试验，以人参皂苷Re为指标，对西洋参提取工艺进行了优化。得到的最佳工艺为:用70%乙醇提取3次，每次提取时间为1.5 h，提取温度为80℃，70%乙醇的用量为西洋参的10倍，即料液比为1∶10。并对该工艺进行了验证，结果较为理想。但由于本研究样品量较小，放大试验结果如何还有待进一步研究。
［1］王 蕾，王英平，许世泉，等.西洋参化学成分及药理活性研究进展［J］.特产研究，2007(3):73-77.
［2］包海花，袁晓环，韩雪山，等.西洋参皂苷对H2O2致PC12细胞损伤的保护作用［J］.中国生化药物杂志，2009，30(5):302-305.
［3］张继昆，杨福国.高效液相色谱法测定西洋参露中西洋参总皂苷的含量［J］.中成药，1995，17(9):15-16.
