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基于图像配准的原子力显微镜图像热漂移失真校正

2011-06-30王春梅孙洁林

核技术 2011年11期
关键词:扫描线胶体金准确性

龙 飞 王春梅 孙洁林 胡 钧,2

1(上海交通大学生命科学技术学院 上海 200240)

2(中国科学院上海应用物理研究所 上海 201800)

原子力显微镜(Atomic Force Microscopy, AFM)成像具有纳米级高分辨率[1],其将一个对微小力非常敏感的微悬臂一端固定,另一端为微小探针,探针与样品表面的相互作用能引起悬臂偏折,记录此信号即可得到样品表面的信息。AFM摆脱了扫描隧道显微镜[2,3]对于样品导电性的限制,能在真空、气相、液相等多种环境下进行检测,在材料学、电子学、生物学等领域中得到广泛应用[4–11]。

然而,若 AFM 成像过程中未严格控制环境条件,环境温度波动会引起仪器尺寸变化而导致热漂移[12]。例如,一个1 mm长的部件,膨胀系数若为10–5/ºC,则 1ºC 的波动将产生 10 nm的尺寸变化。对宏观尺度而言,这种热漂移通常可忽略;但在纳米尺度上,这将严重地影响 AFM 扫描的准确性。AFM的栅格扫描模式获得一幅图像常需数分钟,受热漂移影响,图像的样品形貌会发生失真,产生测量误差。

本研究受电镜中图像处理技术的启发[13–17],将图像配准技术应用于 AFM 成像时热漂移计算,并通过对热漂移变化规律的分析,提出针对 AFM 图像的热漂移校正方法。此法广泛适用于室温大气环境中AFM图像的校正,能有效提高AFM图像测量的准确性。

1 实验条件及样品制备

本实验使用 MultiMode型原子力显微镜(美国Veeco/DI公司),控制器为NanoScope IIIa,扫描管为J型。探针为Mikromasch公司的NSC-11硅探针,标称弹性系数48 N/m,半径10nm。

实验所用衬底为云母。将20nm胶体金颗粒(Sigma公司)用纯水稀释10–50倍,取5–10μL滴在Parafilm膜上。将云母片缓慢盖在胶体金液滴上,静置2–3min后揭下,用纯水冲洗,用吸耳球吹干待用。

2 基于图像配准的热漂移补偿方法

图像配准是指对不同视角用不同种传感器,或在不同时刻,获得同一场景的两幅或多幅图像不断迭和的过程,使同一坐标下的像素对应统一场景点。配准过程通常以其中一幅图像作为参考图像,其余为测量图像,将测量图像与参考图像进行匹配。其匹配过程为:在参考图像中以匹配点P为中心确定一个m×n窗口,该窗口区域即为模板,在测量图像中选择足够大的搜索区域(以保证对应点在该区域),将模板在搜索区域中移动时所覆盖的区域与模板进行比较,寻找相似性最大的区域中心点即为对应的点。

在诸多匹配相似性的度量中,归一化互相关函数具有对噪声不敏感、匹配位置准确等特点,成为图像配准的主要方法[18,19]。用相关系数γ(u,v)表征测量图像和参考图像间的相似度:

式中,γ(u,v)为相似系数,如果γ(u,v)达到最大值,那么u和v可以分别认为是图像在X和Y方向上的漂移量。将连续扫描的 AFM 图像视作取自不同时间的同一场景的图像,以第一幅图像为参考,后续图像为测量图像,就可算出连续扫描的 AFM 图像间的热漂移。图1为连续50幅AFM图像的配准结果,扫描范围2 μm×2 μm,扫描速度2 Hz,分辨率256×256,总扫描时间为106.7 min。可见AFM开始工作时,漂移非常明显,漂移的变化也很快,并随机性很强。仪器工作一段时间后,各种环境因素和仪器本身趋于一个较为稳定的状态,漂移的性质便呈近似线性变化。测量结果与文献[20,21]报道一致,说明这是热漂移普遍存在的性质,因此能够建立线性模型对热漂移进行补偿。

图1 连续50幅AFM图像的热漂移变化曲线Fig.1 Thermal drift of 50 successively scanned images.

3 热漂移引起的AFM图像失真及校正

由于扫描过程中的热漂移,成像过程中目标物体不断偏移,所得 AFM 图像产生失真,无法反映目标物体的真实形貌。本文所指的图像失真主要是二维平面(X、Y)内的拉伸或压缩,而目标物体的高度信息(Z方向)由于始终由反馈回路控制,其准确性取决于系统误差。

设衬底上有一正方形的目标物体,慢扫描方向为从上至下扫描。若X方向热漂移为X–,Y方向热漂移为Y–,则该正方形物体的AFM图像如图2(a)所示。即真实形貌(虚线)将在Y方向被拉长,并逐渐向X–方向偏移(实线)。若热漂移方向为X+和Y+,其AFM图像见图2(b)。即真实形貌(虚线)将在Y方向被压缩,并逐渐向X+方向偏移(实线)。由此可见,扫描过程中的热漂移会使基于图像的二维测量产生较大的误差。如果能够根据扫描时的热漂移信息,对 AFM 图像进行热漂移校正,则能减小测量的误差,提高AFM测量的准确性。

图2 热漂移引起的AFM图像失真,正方形(虚线)表示物体形貌,平行四边形(实线)表示AFM在热漂移影响下扫描得到的该物体的图像Fig.2 Image distortion induced by thermal drift.The square (dash line) represents the real shape of an object;the parallelogram (solid line) is AFM image of the object affected by thermal drifts.

根据AFM热漂移的性质,连续扫描多幅AFM图像,得到每个扫描时刻热漂移的估计值。计算AFM图像的每条扫描线的热漂移,从而恢复目标物体的真实形貌。图 3(a)为云母表面 1.2 μm×1.2 μm内20 nm胶体金颗粒的扫描图像,扫描速率2 Hz,分辨率 128×256。AFM 启动 1 h后,连续扫描10幅图像,按照热漂移的线性模型计算得到X、Y方向热漂移速度分别为0.11和0.29 nm/s。根据扫描速率,可知每行扫描线在X方向向右偏移0.055 nm,Y方向被压缩0.145 nm。因此,相比于样品真实形貌,扫描的图像在X方向右偏移,而在Y方向被压缩。由图2(b),应当将AFM图像向X–和Y–方向拉伸,从而恢复真实形貌。图3(b)中虚线方框表示原图像大小。校正量分别为–1.17%和3.13%。原图像中胶体金颗粒的纵横比为0.91,而校正后的颗粒纵横比为0.95,更接近其真实形貌。

图3 AFM图像失真校正A. 原扫描图像;B. 校正后的图像Fig.3 Correction of AFM image.A. Original image; B. Corrected image

由于热漂移始终存在,每条扫描线本身也会受到热漂移的影响。例如X方向热漂移会导致扫描线伸长或缩短,Y方向热漂移会导致扫描线向上或向下倾斜。只是由于每条扫描线所经历时间短,热漂移影响可予忽略。因此,本文提出的方法仅针对扫描线间的热漂移进行校正。

4 结语

室温大气环境中的热漂移会导致 AFM 扫描图像的失真,从而增大基于图像的测量结果的误差。我们在图像配准方法的基础上,通过对 AFM 图像热漂移性质的分析,提出了一种图像校正方法。实验结果表明,在室温大气环境中没有严格环境控制的条件下,这种方法能够有效恢复 AFM 扫描图像的真实形貌,避免热漂移导致的图像测量误差,有助于提高图像二维平面内测量的准确性。

1 Binnig G, Quate C F. Atomic force microscopy[J]. Phys Rev Lett, 1986, 56: 930–933

2 Binnig G, Rohrer H, Gerber Ch,et al. Tunneling through a controllable vacuum gap[J]. Appl Phys Lett, 1982, 40:178–180

3 Binnig G, Rohrer H, Gerber Ch,et al. Surface studies by scanning tunneling microscopy[J]. Phys Rev Lett, 1982,49: 57–61

4 Chen Z H, Appenzeller J, Lin Y M,et al. An integrated logic circuit assembled on a single carbon nanotube[J].Science, 2006, 311: 1735

5 Lyshevski S E. Carbon-based Nanoelectronics: NanoICs with fullerenes[C]. 4thIEEE Conference on Nanotechnology, 2004: 382–385

6 Scott R C, Deborah C, Barbara K,et al. Aiming for the heart: targeted delivery of drugs to diseased cardiac tissue[J]. Expert Opinion on Drug Delivery, 2008, 5:459–470

7 Avi S, Reuma H, Keren T,et al. Ultrasound triggered release of cisplatin from liposomes in murine tumors[J].Journal of Controlled Release, 2009, 137: 63–68

8 Scott R C, Wang B, Ramakrishna N,et al. Targeted delivery of antibody conjugated liposomal drug carriers to rat myocardial infarction[J]. Biotechnology and Bioengineering, 2007, 96: 795–802

9 Cavalcanti A, Shirinzadeh B, Freitas R A,et al.Nanorobot architecture for medical target identification[J].Nanotechnology, 2008, 19: 015103(1-15)

10 Menciassi A, Sinibaldi E, Pensabene V,et al. From miniature to nano robots for diagnostic and therapeutic applications[C]. 2010 Annual International Conference on EMBC, 2010: 1954–1957

11 Cavalcanti A, Shirinzadeh B, Kretly L C. Medical nanorobotics for diabetes control[J]. Nanomedicine, 2008,4: 127–138

12 Mokaberi B, Requicha A A G. Drift compensation for automatic nanomanipulation with scanning probe microscopes[J]. IEEE Transaction on Automation Science and Engineering, 2006, 3: 199–207

13 Frank J, Verschoor A, Boublik M. Computer averaging of electron-micrographs of 40s ribosomal-subunits[J].Science, 1981, 24: 1353–1355

14 Auer M. Three-dimensional electron cryo-microscopy as a powerful structural tool in molecular medicine[J].Journal of Molecular Medicine, 2000, 78: 191–202

15 Scheuring S, Fotiadis D, Moller C,et al. Single proteins observed by atomic force microscopy[J]. Single Molecules, 2001, 2: 59–67

16 Muller D J, Anderson K. Biomolecular imaging using atomic force microscopy[J]. Trends in Biotechnology,2002, 20: S45–S49

17 Frank J, Alali L. Signal-to-noise ratio of electron micrographs obtained by cross-correlation[J]. Nature,1975, 256: 376–379

18 Penczek P, Radermacher M, Frank J. Three-dimensional reconstruction of single particles embedded in ice[J].Ultramicroscopy, 1992, 40: 33–53

19 Lewis J P. Fast template matching[J]. Vision Interface,1995, 95: 120–123

20 John S, van Noor T, Kee O,et al. High speed atomic force microscopy of biomolecules by image tracking[J].Biophysical Journal, 1999, 77: 2295–2303

21 Abe M, Sugimoto Y, Namikawa T,et al.Drift-compensated data acquisition performed at room temperature with frequency modulation atomic force microscopy[J]. Appl Phys Lett, 2007, 90: 203103(1–3)

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