MACC－1 mRNA 和 c－Met mRNA 在胃癌组织中的表达及其临床意义

顾荣民 陈环球 明学志 文旭 俞军

胃癌是我国常见的恶性肿瘤，临床诊治的胃癌多为进展期胃癌，根治术后最常见的复发是腹膜转移，约占总复发的33%～50%，腹膜转移是导致患者死亡的主要 原 因 之 一［1－2］。肝 细胞 生 长 因 子 (hepatocyte growth factor，HGF)和编码其受体的基因 c－Met存在于人类消化道组织中，HGF/c－Met信号通路的异常可以导致肿瘤的生成和转移，c－Met被广泛认为是肿瘤转移和早期侵犯的一个诊断指标［3］。最新研究表明，c－Met是胃癌组织中结肠癌转移相关因子－1(metastasisassociated in colon cancer－1，MACC－1)的一个转录产物，在肿瘤样本中表达的MACC－1是转移已经形成和尚未形成生存的一项独立预测指标［4］。本研究通过研究胃癌患者组织中 c－Met mRNA、MACC－1 mRNA 的表达来判断和预测胃癌患者腹膜转移可能。

1 资料与方法

1.1 研究对象 45例胃癌及相应癌旁正常组织来自江苏省肿瘤医院2011年1月至2011年7月接受胃大部分切除术的腺癌患者，术前均未接受放疗和化疗。男31例，女14例，年龄27～71岁，平均(54±3.8)岁。病理均为腺癌，其中高、中分化腺癌共10例，低分化腺癌35例，发生淋巴结转移31例，发生血行及种植转移3例。按国际抗癌联盟(UICC)1997年修订的PTNM分期标准分为Ⅰ期2例，Ⅱ期8例，Ⅲ期18例，Ⅳ期17例，肿瘤直径≥5 cm者23例，＜5 cm者22例。

1.2 试剂与引物 组织RNA提取试剂盒购自罗氏公司，逆转录及荧光定量PCR试剂均购自大连TAKALA生物有限公司。定量PCR引物序列如下:c－Met Forward:5'－AGGCTTGTAAGTGCCCGAAGTGTA－3'，Reverse:5'－TCGGCATGAACCGTTCTGAGATGA－3';MACC－1 Forward:5'－TTCTTTTGATTCCTCCGGTGA－3'，Reverse:5'－ACTCTGATGGGCATGTGCTG－3';内参 β－Actin Forward:5'－AGCGGGAAATCGTGCGTGACA－3'，Reverse:5'－GTGGACTTGGGAGAGGACTGG－3'。引物均委托上海生工公司合成。

1.3 方法 采用TRIzol试剂，在无菌无RNA酶条件下严格按照说明书的方法提取总RNA，琼脂糖电泳鉴定总RNA有无降解，Nano Drop检测RNA浓度及纯度。取1 μg总RNA以 Oligo dT18逆转录 cDNA，定量PCR检测MACC1和C－Met在各组织样品中的相对表达。定量PCR条件如下:95℃预变性2 min;94℃变性1 min，60℃退火1 min，72℃延伸1 min，循环40次;末次循环后从55℃至95℃，每隔0.5℃保温30 s，行熔链曲线分析。

1.4 统计学分析 数据以均数±标准差表示，用SPSS 13.0统计软件进行数据分析。组间比较采用t检验。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 标准曲线的绘制 以10倍稀释的cDNA为模板，定量PCR检测MACC－1和c－Met的扩增曲线、熔链曲线、标准曲线以及扩增效率的计算结果:MACC－1扩增效率(E)为 0.95，c－Met扩增效率(E)为 0.99。

2.2 胃癌组织与癌旁组织中 MACC－1、c－Met mRNA表达水平的比较 MACC－1 mRNA在胃癌组织中，相对于内参的表达为(8.52±2.39)×10－4，而癌旁组织中 MACC－1 的相对表达为(6.47 ±1.24)×10－5，MACC－1在肿瘤组织中的表达显著高于癌旁组织(P＜0.05);c－Met mRNA在胃癌组织中的相对表达为(4.48 ±0.96)×10－1，癌旁组织中 c－Met的表达为(9.36±3.21)×10－5，c－Met在胃癌组织中也明显高表达(P＜0.05)。

2.3 MACC－1 mRNA和c－Met mRNA阳性表达与胃癌临床病理参数关系 进一步研究发现，MACC－1 mRNA和c－Met mRNA与胃癌患者临床分期、肿瘤直径大小、浸润深度、肿瘤的分化程度、淋巴结转移有关(P均＜0.05)，而与年龄和肿瘤大小无关(P＞0.05)，见表1。相关性分析发现 MACC－1 mRNA 和 c－Met mRNA在胃癌组织中表达呈正相关关系(r＝0.366，P＜0.05)，见表2。

表1 临床和病理参数与胃癌组织中MACC－1 mRNA和c－Met mRNA阳性表达和不同阳性表型间的关系(±s，×10－4)

表1 临床和病理参数与胃癌组织中MACC－1 mRNA和c－Met mRNA阳性表达和不同阳性表型间的关系(±s，×10－4)

注:同一项目不同子项目间比较，*P＜0.05

项目 n MACC－1 mRNA c－Met mRNA性别男31 7.96±3.12 4.29±0.96女14 8.01±2.55 4.50±0.55年龄(岁)≤60 33 8.22±1.98 4.55±1.05＞60 12 8.31±3.54 4.43±0.48腺癌组织分化低度 35 8.79±3.01* 5.10±1.12*高、中度 10 6.02±2.41 3.23±0.88肿瘤大小(cm)≥5 23 8.26±2.66 4.25±0.34＜5 22 8.14±3.14 4.51±0.39淋巴转移有31 8.91±3.55* 5.97±1.20*无14 6.12±2.98 2.49±0.98 PTNM分级Ⅰ～Ⅱ 10 6.20±2.07 2.35±1.05Ⅲ～Ⅳ 35 9.07±3.25* 5.84±1.33*

表2 胃癌组织中MACC－1 mRNA和c－Met mRNA表达的相关性

3 讨论

MACC－1是2009年在 nature杂志上发表的一个与结肠癌转移相关的基因，在肿瘤样本中表达的MACC－1是一项转移已经形成但是尚未形成生存的独立预测指标。已经发现的编码HGF受体的基因c－Met是 MACC－1 的一个转录产物［5］。

HGF又称分散因子(scatter factor，SF)，是酪氨酸激酶受体 c－Met的配体。HGF/c－Met信号通路是由HGF作用于c－Met，引起一系列信号转导蛋白的酶促反应，促发相应生物学效应的信号传递路径［6－8］。HGF/c－Met信号通路能诱导细胞增殖、分散、迁移、器官形态形成、血管发生等一系列生物效应，这对组织修复和胚胎发育起重要作用。然而，HGF/c－Met信号通路的失调会导致细胞的侵袭性生长以及肿瘤的演进和转移。正常的HGF/c－Met信号转导在胚胎发育、组织损伤修复中起重要作用，而异常的HGF/c－Met信号转导与肿瘤发生，尤其是侵袭和转移密切相关。在正常细胞中，原癌基因c－Met mRNA呈低水平表达或不表达，虽然在组织器官切除或损伤后，c－Met的表达会暂时性的增加，但表达水平很快恢复正常状态，表明正常细胞有能力通过减少c－Met的表达来控制其对HGF的反应。c－Met的过表达可见于人肝癌、胆管癌、胰腺癌、肺癌、甲状腺癌、胸膜间质瘤等，尤其是在发生转移的肿瘤中，它的作用可能包括影响肿瘤细胞间的黏附、促进细胞外基质降解、诱导血管生成以及促进细胞增殖等［9－12］。

本研究发现在胃癌组织中MACC－1 mRNA和c－Met mRNA表达率分别为77.33%和78.8%，且呈正相关(r＝0.366，P ＜0.05)，提示在胃癌组织中，MACC－1 mRNA和c－Met mRNA的高表达密切相关，对肿瘤的生长、转移具有协同作用。在试验中我们还发现，两者均表达阳性的38例胃癌中，临床分期在Ⅲ期以上、组织学分型为低分化腺癌、有淋巴结转移的高达25例，浸润至浆膜层者达26例。在两者均表达阴性的4例患者，均为高、中分化腺癌，仅1例浸润至浆膜层，且仅1例临床分期在Ⅲ期以上及有淋巴结转移，提示MACC－1 mRNA和c－Met mRNA的共同高表达，与胃癌的发生、发展、浸润、转移密切相关，可能与其更易形成HGF/c－Met信号转导通路促进胃癌的恶性发展有关，也有可能是其他因素促进了HGF的分泌及c－Met的表达。由本试验结果可推断MACC－1 mRNA和c－Met mRNA在胃癌的发生、发展、浸润、转移中可能起重要作用，联合检测 MACC－1 mRNA 和 c－Met mRNA 有助于胃癌的病情估计及预后判断。

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