高效液相色谱法测定小儿肺热平胶囊中黄芩苷含量

徐 虹

小儿肺热平胶囊主要由平贝母、黄连、柴胡、黄芩、射干等药味组方，具有清热化痰、止咳平喘的功效[1]。方中黄芩所含黄芩苷具有清热、解毒、抗炎等作用[2]。为有效控制产品质量，笔者应用高效液相色谱法测定产品中黄芩苷的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪;USC－202型超声处理器(上海波龙电子设备有限公司)。黄芩苷对照品(批号为110715－200212，中国药品生物制品检定所);小儿肺热平胶囊(批号分别为20080101，20080301，20080601，吉林省大俊药业股份有限公司);流动相用甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Zorbax SB－C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);流动相:甲醇 － 水 －冰醋酸(46∶54∶1);流速:1.0 mL/min;柱温:20℃;检测波长:274 nm[3]407;进样量:10μL。理论板数以黄芩苷峰计算应不低于4 000。

2.2 溶液制备

精密称取黄芩苷对照品12.52 mg，加50%甲醇[3]407制成每1 mL含黄芩苷25.04μg的溶液，即得对照品溶液。取装量差异项下的本品，研细，取约0.5 g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，称定质量，超声处理30 min(功率80 W，频率40 kHz)，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液用0.45μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。按处方比例和供试品溶液制备方法制成不含黄芩的阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10μL，按照上述色谱条件进行测定。结果供试品溶液色谱中在与对照品溶液色谱保留时间相同的位置上有色谱峰，而阴性对照品溶液色谱在相同的位置上无色谱峰(见图1)。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密吸取对照品溶液 4，8，12，16，20 μL，在上述条件下测定峰面积，以进样量(X)与峰面积(Y)作标准曲线，计算得回归方程 Y=78.577X+0.373，r=0.999 8(n=5)，结果表明，黄芩苷进样量在0.100 2～0.500 8μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取黄芩苷对照品溶液10μL，重复进样6次。结果峰面积的 RSD为1.5%(n=6)。

重复性试验:取同批样品(批号为20080601)，平行6份，依法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定。结果黄芩苷含量的 RSD为 0.79%(n=6)。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别在 0.5，2，4，6，8 h 时测定。结果的 RSD为1.6%(n=5)，表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。

加样回收试验:取已知含量的样品(批号为20080601，含量为1.045 7 mg/g)，分别精密加入黄芩苷对照品溶液(0.025 04 g/L)适量，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 黄芩苷加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取3批样品，按供试品溶液制备方法操作，按2.1项下色谱条件进样，记录色谱图并用外标法计算含量。结果批号为20080101，20080301，20080601的3批样品中黄芩苷含量分别为 1.181 2，0.945 0，1.045 7 mg/g。

3 讨论

曾分别采用加热回流[3]212及超声(40 kHz，80 W)各30 min提取本品，结果两者没有显著性差别，根据检验快速、简便、准确的原则，选择超声法作为供试品溶液的制备方法。另外分别用70%乙醇和50%甲醇提取本品，发现50%甲醇提取效果好于70%乙醇[2]，故选择50%甲醇作为提取溶剂。

分别采用色谱柱 Zorbax SB－C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)和 Zorbax Extend C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)进行试验，发现在甲醇－水－冰醋酸(46∶54∶1)比例下，Zorbax SB－C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)分离度较好，保留时间适中，故选择此色谱柱。

试验中考察了流动相甲醇－水－冰醋酸(50∶50∶1)、乙腈－0.2%磷酸溶液(20∶80)、甲醇 －水 －冰醋酸(46 ∶54∶1)对供试品预测定峰分离度的影响[4－5]，其中流动相甲醇－水－冰醋酸(46∶54∶1)分离度好，保留时间适中。供试品预测定峰出峰后到60 min内有较多杂质峰，为了不干扰样品测定，故采用了梯度洗脱的方法。

[1]WS3－B－1490－93，卫生部药品标准·中药成方制剂(第八册)[S].

[2]罗定强，王锡领，吕 卓，等.金嗓清音丸质量标准研究[J].医药导报，2009，28(5):653 －654.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005.

[4]崔 岚，安富荣，夏玲红.反相高效液相色谱法测定舒肝祛脂胶囊黄芩苷含量[J].医药导报，2007，26(11):1 363 － 1 364.

[5]顾云燕，葛卫红.高效液相色谱法测定女金胶囊中黄芩苷的含量[J].医药导报，2008，27(2):233 －234.