血小板源性生长因子BB与IgA肾病的关系

2011-06-24刘翠云周晓玲陈孟华

肾脏病与透析肾移植杂志 2011年2期

刘翠云周晓玲陈孟华

刘翠云1周晓玲2陈孟华2

目的：探讨IgA肾病（IgA nephropathy，IgAN）患者血清中血小板源性生长因子BB（PDGF-BB）与肾脏不同病理改变的关系，旨在寻找一种能反映IgAN肾损害程度的非创伤性临床检测指标。方法：应用酶联免疫吸附法（ELISA）测定92例IgAN患者、30例微小病变性肾病（MCD）患者、30例健康对照的PDGF-BB水平并进行比较；将92例IgAN患者的肾脏病理按Lee氏分级分为A组（Lee氏I级或II级）16例，B组（Lee氏III级）43例，C组（Lee氏IV级或V级）33例，并进行katafuchi半定量评分，观察血清PDGF-BB水平与IgAN不同肾脏病理改变的关系。结果：（1）IgAN患者血清PDGF-BB的含量（746.530±293.012）ng/L明显高于MCD组（208.910±118.56）ng/L及正常对照组（215.320±124.064）ng/L（P＜0.05）；MCD组（208.910±118.56）ng/L与正常对照组（215.320 ±124.064）ng/L对比无统计学意义（P＞0.05）；（2）IgAN者中血清PDGF-BB的浓度C组（926.443±237.162）ng/L明显高于B组（693.103±284.608）ng/L及A组（519.043±198.671）ng/L（P＜0.05）；同时B组（693.103± 284.608）ng/L高于A组（519.043±198.671）ng/L（P＜0.05）；（3）Pearson相关分析：血清PDGF-BB水平与平均动脉压、血肌酐、24h尿蛋白定量，尿素氮均呈正相关（r=0.353，0.342，0.270，0.261；P均＜0.05）；与肾小球滤过率呈负相关性（r=-0.414，P＜0.05）；（4）多元线性回归分析：平均动脉压及Lee氏分级是血清PDGF-BB升高的独立危险因素。结论：血清PDGF-BB浓度可反映IgAN肾脏病理改变的严重程度，可做为IgAN肾损害的非创伤性临床检测指标。

IgA肾病血小板源性生长因子BB Lee氏分级 katafuchi半定量评分

IgA肾病（IgA nephropathy，IgAN）是目前全球范围内最常见的一种原发性肾小球肾炎，约占原发性肾小球肾炎的20%～45%［1-2］。IgAN患者的肾组织病理改变及临床表现多种多样，其肾脏病理改变程度与临床表现并不完全一致。约1/3以上的患者在病程的20～25年会进展为终末期肾脏病［3］。因此，IgAN患者治疗和随访的动态监测及评估在临床上尤为重要，但肾脏穿刺为有创性检查，对IgAN患者进行重复肾活检在临床工作中有一定难度。因此，临床亟需一个可靠的、非创伤性的生物指标能够动态反映IgAN患者的肾脏病理改变和病程进展。近年研究表明，血小板源性生长因子BB（PDGF-BB）是肾小球系膜细胞最强的有丝分裂原，能够促进系膜细胞增生，还可使系膜细胞收缩、趋化成纤维细胞、从而分泌大量的细胞外基质，促使肾小球及肾间质纤维化，这是IgAN进展的重要病理过程。在IgAN患者中PDGF-BB可由肾脏固有细胞分泌，且其受体PDGFR-B可由肾小球系膜细胞、壁层上皮细胞、内皮细胞及间质细胞表达［4，5］；因此本研究通过测定IgAN患者血清PDGFBB的水平，观察其与IgAN肾组织病理改变的关系，以探讨血清中PDGF-BB浓度能否反映肾脏病理损害的程度，旨在寻找一种能反映IgAN肾脏病理损害的非创伤性指标。

资料与方法

一般资料 IgAN组92例，为宁夏医科大学附属医院肾内科住院经肾活检穿刺确诊的资料完整患者，排除过敏性紫癜性肾炎、系统性红斑狼疮、乙型肝炎病毒相关性肾炎、类风湿性关节炎、肝硬化肾小球硬化症及其他继发性IgAN。其中男43例，女49例；患者平均年龄（35.3±11.1）岁（17～60岁）。按照IgAN Lee氏分级，将所有IgAN患者分成A组（Lee氏I级或II级）：16例；B组（Lee氏III级）：43例；C组（Lee氏IV级或V级）：33例；另设经肾活检穿刺确诊为微小病变性肾病（MCD）组30例（男19例，女11例），平均年龄（32.3±10.0）岁（18～71岁）；正常对照组30例（男15例，女15例），平均年龄（31.6±12.6）岁（17～67岁）。三组间年龄具有可比性（P＞0.05）。所有患者在留取标本前均未用糖皮质激素和免疫抑制剂。

方法

标本收集所有受检者留取肾活检当天空腹静脉血5ml，以3 000 r/min离心15min后收集上清液1.5 ml于EP管中-70℃密封保存备用。

检测方法 PDGF-BB测定采用双抗体夹心ELISA法。试剂盒购买自美国R&D公司。仪器采用全自动酶标仪（型号BIO-RAD Model 680），全自动洗板机（型号BIO-RAD Model1575）。检测由专人严格按说明书进行操作。

采用MDRD公式计算肾小球滤过率（eGFR）eGFRMDRD=186×［0.818×SCr（μmol/L）］-1.154×［年龄（岁）］-0.203×（0.742女）。

肾组织标本肾活检组织病理标本经常规处理，分别行免疫荧光、光镜和电镜检查，应用直接免疫荧光法检测IgA、IgG、IgM、C3、C1q、FRA、ALB，石蜡切片采用HE、Masson、PASM-Masson染色。

肾脏病理分级及katafuchi半定量评分由专业的肾脏病理医师采用单盲法进行独立阅片，按Lee氏及Katafuchi半定量评分系统进行分级及评分，半定量评分包括以下指标：（1）肾小球积分：由肾小球增生指数、肾小球节段病变指数、肾小球硬化指数组成；（2）肾小管间质积分：由间质炎细胞浸润指数、间质纤维化指数、肾小管萎缩指数组成；（3）血管积分：由血管壁增厚指数及透明样变指数组成；半定量积分定义为所有病理指标的总和，总分1～27分。

统计学分析应用SPSS 11.0统计软件进行数据处理及分析，计量资料用（±s）表示，正态分布的计量资料组间比较采用t检验，组内数据比较采用one-way ANOVA检验，相关性分析采用Pearson相关和多元逐步回归分析，P＜0.05为有统计学差异。

结果

血清PDGF-BB的水平 IgAN患者血清中PDGF-BB的水平明显高于MCD组及正常对照组，而MCD与正常对照组血清中PDGF-BB无统计学意义（P＞0.05）（表1）。

表1 各组血清PDGF-BB水平的比较（±s）

PDGF-BB：血小板源性生长因子BB；对照组比较：*P＜0.05

组别例数 PDGF-BB（ng/L）IgA肾病组 92 746.53±293.01*30 215.32±124.06微小病变组 30 208.91±118.56正常对照组

IgAN不同病理分级之间血PDGF-BB、血肌酐（SCr）和eGFR的比较 C组（lee氏Ⅳ级或Ⅴ级）患者血中PDGF-BB的水平高于A组（Lee氏I级或II级）及B组（lee氏III级）；同时B组血PDGF-BB的水平高于A组；A组SCr与B组比较无统计学意义；而C组SCr高于B组及A组；C组肾小球滤过率明显低于A组及B组，B组肾小球滤过率低于A组（表2）。

表2 IgAN不同病理分级之间血PDGF-BB浓度、SCr及eGFR的比较（±s）

PDGF-BB：血小板源性生长因子BB；SCr：血肌酐；eGFR：估算肾小球滤过率；*：与A组比较，P＜0.05；△：与B组比较，P＜0.05

组别例数 PDGF-BB（ng/L） SCr（μmol/L） eGFR（ml/min·1.73m2）A（Lee氏I级或II级）16 519.04±198.67 73.88±16.80 58.65±7.84 B（Lee氏Ⅲ级） 43 693.10±284.06*90.51±26.90 50.22±7.96*C（Lee氏Ⅳ级或Ⅴ级） 33 926.44±237.16*△123.97±58.73*△44.67±6.46△

IgAN患者血PDGF-BB与临床资料的pearson直线相关分析 IgAN患者血PDGF-BB水平与平均动脉压，SCr，24h尿蛋白定量，尿酸成正相关；与eGFR呈负相关性；与年龄及性别无相关性（表3）。

表3 IgAN患者血PDGF-BB与临床资料的pearson直线相关分析

IgAN患者血PDGF-BB与临床、病理指标多元线性回归逐步分析以IgAN患者血PDGF-BB水平为因变量，以尿酸、24h尿蛋白定量、平均动脉压、Lee氏分级、SCr、肾组织总积分、肾小球积分、肾小管间质积分为自变量进行多元逐步回归分析，结果显示Lee氏分级及平均动脉压与血清PDGF-BB水平的密切相关（表4）。

讨论

IgAN是最常见的肾小球疾病，发病机制目前尚不清楚，其主要病理特征是肾小球系膜区以IgA为主的免疫复合物沉积，同时伴有系膜细胞增生和细胞外基质聚集、扩张，过量的细胞外基质聚集最终导致肾小球硬化，促使疾病走向终末期［6］。已有研究证实在IgAN患者的肾组织中PDGF-BB及其mRNA明显高于其他肾小球肾炎［7］，近年来亦有大量研究表明PDGF-BB是参与IgAN肾小球局部炎症反应的重要细胞因子之一，其在IgAN的发生与发展中的作用越来越被重视。目前已知PDGF家族有A、B、C和D四个成员，分别组成PDGF-AA、PDGF-AB、PDGF-BB、PDGF-CC和PDGF-DD。病理状态下，PDGF-BB与IgAN肾小球系膜细胞上的PDGF受体结合，从而促使系膜细胞增生，并产生PDGF-BB、转化生长因子β1、表皮生长因子、肿瘤坏死因子α、血管紧张素II及内皮素等细胞因子，他们通过自分泌和旁分泌相互作用，共同调节PDGF-BB及PDGFR在肾小球系膜细胞和小管间质中表达和分泌［8，9］。引起细胞外基质过度产生，导致ECM聚集，后者是肾小球硬化的重要病理基础。

表4 血清血小板源性生长因子BB水平与相关指标的多元线性回归分析结果

IgAN的临床表现及肾脏病理改变多种多样，且预后不尽相同，但目前比较公认的影响预后不良的因素主要有：大量蛋白尿、肾功能损害、高尿酸血症、高血压及肾脏组织病理改变程度；本研究显示血PDGF-BB水平与与平均动脉压、SCr、血尿酸、24h尿蛋白定量及eGFR等临床指标密切相关，并随着病理改变的加重，血PDGF-BB浓度逐渐升高。提示血PDGF-BB能够反映肾脏病理改变的严重程度。在轻度和中度肾损伤的两组患者中其SCr比较并无统计学意义，但其肾小球滤过率和PDGF-BB已有明显差异。提示在轻中度肾损伤患者中血PDGF-BB的敏感度可能要优于SCr。

本研究中，IgAN患者血PDGF-BB浓度明显高于微小病变组及正常对照组［（746.530±293.012）ng/L，（208.910±118.56）ng/L，（215.320± 124.064）ng/L］，可能因为IgAN患者存在免疫因素介导的微炎症状态，导致PDGF-BB等炎性细胞因子分泌增加所致，这与Matsuda等［10］发现在系膜增生性肾小球肾炎中PDGFmRNA基因和受体的表达明显升高，认为PDGF是人类系膜增生性肾小球肾炎的重要介质，及国内学者潘楚瑛等［11］发现在IgAN间质纤维化的患者中PDGF-BB高表达等结果一致；本研究中C组（Lee氏Ⅳ级或Ⅴ级）患者血PDGF-BB（926.443±237.162）ng/L高于A组（Lee氏I级或II级）和B组（lee氏III级）［（519.043±198.671）ng/L，（693.103±284.608）ng/L］，同时B组血清PDGF-BB的浓度高于A组，说明IgAN患者血清PDGF-BB浓度随着肾脏病理的加重而升高，提示PDGF-BB在IgAN中可以反映肾脏病理的损伤状况。与国内外学者所认为的PDGF-BB能显著刺激系膜细胞增生及细胞外基质积累，使肾小球及间质纤维化，导致肾脏疾病进行性发展，肾脏中表达PDGF的量可反映疾病的活动情况和肾小球损伤的严重程度这一结果是一致的。在IgAN病程进展过程中，能够正确评估肾脏病理改变情况是非常重要的，因为肾脏病理改变程度是IgAN预后主要决定因素，尤其是弥漫性和（或）节段性肾小球硬化，显著肾小管间质病变，肾小球和（或）肾小管间质病变高评分都是预后不良的病理指标。本研究多元线性逐步回归进一步分析Lee氏分级是PDGF-BB的独立危险因素，均说明血PDGF-BB水平与肾脏病理改变程度呈密切相关。

总之，PDGF-BB是肾脏强有丝分裂原，在病理状态下，能够刺激系膜细胞、间质细胞、肾小管上皮细胞增生，趋化成纤维细胞，分泌大量细胞外基质，导致肾小球硬化，是参与局部炎症反应的重要细胞因子［8］，通过醛糖还原酶抑制剂可抑制PDGF-BB促进肾小球系膜增生的作用［12］。本研究中IgAN患者血清PDGF-BB浓度较正常人显著增高，其浓度与肾组织损伤程度呈正相关，且与平均动脉压、SCr、24h尿蛋白定量、尿酸、肾小球滤过率均呈正相关关系，提示血清PDGF-BB能够动态监测IgAN的病情进展，可能成为反映IgAN患者肾脏病理损伤的一项无创性临床监测指标。

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Change of serum p latelet derived grow th gactor-BB（PDGF-BB）in patients w ith IgA nephropathy

LIU Cui-yun1，ZHOU Xiao-ling2，CHEN Meng-hua21Ningxia Medical University，Yinchuan 750004，China
2Department of Nephrology，Affiliated Hospital of Ningxia Medical University，Yinchuan 750004，China Corresponding author：CHEN Meng-hua（E-mail：nxchenmh@163.com）

Objective：To investigate the significance of serum platelet derived growth factor-BB（PDGF-BB）in different renal pathology injury of patientswith IgA nephropathy. Methodology：Ninety two patientswith IgAN，30 cases with minimal change disease（MCD）and 30 health adults were enrolled in this study.The serum PDGF-BB wasmeasured by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）in three groups'people.According pathological degree constituted by Lee's classifications，all patientswith IgAN were divided into five degreesI、II、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ，and score for each patient was according to katafuchi semi-quantitative pathological scoringmethod.Those IgAN patients were divided into three groups：group A（n=16，Lee-I or II），group B（n=43，Lee-Ⅲ）and group C（n=33，Lee-ⅣorⅤ）. Results：In IgAN patients，the levels of serum PDGF-BB（747 ng/L±2 937 ng/L）were significantly higher than that in MCD（209 ng/L± 119 ng/L）and health subjects（215 ng/L±124 ng/L），P＜0.05.The levels of serum PDGF-BB in group C（926 ng/L± 237 ng/L）were significantly higher than that in group A（519 ng/L±199 ng/L）and B（693 ng/L±285 ng/L），P＜0.05，and also significantly higher in group B than that in group A.The correlation analysis indicated the serum PDGF-BB was positively associated with Mean arterial pressure，serum creatinine（SCr），24 urine protein，and uric acid respectively，（r=0.353，0.342，0.270，0.261；P＜0.05）；and negatively associated with eGFR（r=-0.414，P＜0.05）.Themultiple regression analysis showed：themean arterial pressure and Lee's gradewere independent dangerous factors of PDGF-BB.Conclusion：The levels of serum PDGF-BB could reflect the severity of renal injury in human IgAN，so itmay be used as a biologicalmark in prediction of IgAN.

IgA nephropathy PDGF-BB Lee's grade katafuchi'semi-quantitative pathological scoring

2010-12-21

（本文编辑凡心）

1宁夏医科大学（银川，750004）；2宁夏医科大学附属医院肾脏内科

陈孟华（E-mail：nxchenmh@163.com）