HPLC法测定藿精片中淫羊藿苷含量*

张荣泉，王 莲，米 沙，吕 方

(天津市医药科学研究所，天津 300020)

藿精片是由淫羊藿、黄精、菟丝子等中药材提取制成，具有补气养阴，滋补肝肾等功效。淫羊藿苷(icariin，ica)是淫羊藿中的主要活性成分，具有保护心血管系统、调节免疫、抗肿瘤、影响内分泌等多种重要的生物活性[1]。为了保证制剂质量，有效控制藿精片中淫羊藿苷的含量，本实验特采用超声处理提取，利用高效液相色谱法对淫羊藿苷进行含量测定，方法可行，操作简便，误差较小，结果较为满意。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪(日本岛津公司)，AB204-E型电子天平(万分之一精度)， KQ-100型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号110737-200415)；藿精片(天津市医药研究开发公司提供，批号20100429、20100516、20100717)；甲醇为色谱纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱：依利特Hypersil C18柱(4.6 mm×250 mm，10 μm)；流动相：甲醇-水(55∶45)；流速1.0 ml/min；检测波长270 nm；进样量20 μl。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备 精密称取淫羊藿苷对照品0.009 9 g，置于50 ml量瓶中，加甲醇溶解至刻度，混匀，即得浓度为198 μg/ml的对照品储备液。精密吸取对照品储备液2.0 ml，置于5 ml量瓶中，加入甲醇至刻度，混匀，即得浓度为79.2 μg/ml的对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备 取藿精片10片(片重约为0.70 g，批号20100429)，研细，精密称取供试品约0.05 g，置于25 ml量瓶中，加入50%甲醇15 ml，超声处理提取30 min，放冷，加50%甲醇至刻度，混匀，即得藿精片供试品溶液。

2.2.3阴性对照品溶液的制备 按照处方制备不含淫羊藿的阴性对照品，取该阴性对照品10片(片重约为0.70 g)，研细，精密称取约0.05 g，置于25 ml量瓶中，加入50%甲醇15 ml，超声处理提取30 min，放冷，加50%甲醇至刻度，混匀，即得藿精片阴性对照品溶液。

2.3干扰试验 按照“2.1”项下色谱条件，取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各20 μl分别进样，进行HPLC测定。结果显示供试品溶液色谱图与对照品溶液色谱图中的相同位置(约16 min处)，有相同的色谱峰出现，而阴性对照溶液在此处无峰，表明处方中其他成分对淫羊藿苷含量测定无干扰，见图1。

2.4线性关系考查 精密吸取对照品储备液0.5、1.0、2.0、3.0和4.0 ml，置于5 ml量瓶中，加入甲醇至刻度，并以对照品储备液为第6个浓度梯度。按照“2.1”项下色谱条件，将以上6个浓度的对照品溶液分别注入液相色谱仪中测定，以溶液浓度(X)为横坐标、峰面积(Y)为纵坐标绘制标准曲线，线性回归方程为Y=50 988X-1 021.9(n=6，r=0.999 8)。结果表明淫羊藿苷进样浓度在19.8～198 μg/ml范围内与峰面积线性关系良好。

2.5精密度试验 按照“2.1”项下色谱条件，取对照品溶液20 μl连续进样6次，测定峰面积。结果峰面积值的RSD为0.39%(n=6)，符合精密度要求。

2.6重现性试验 精密称取同一批(20100429)供试品5份，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，并按照“2.1”项下色谱条件，各取20 μl进样，进行HPLC测定，计算含量。结果含量的RSD为1.06%(n=5)，符合重现性要求。

1.淫羊藿苷

2.7稳定性试验 按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液(批号20100429)，分别在0、1、2、4、6、8和24 h时进样，测定峰面积。结果峰面积的RSD为0.36%(n=7)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.8加样回收试验 精密称取淫羊藿苷含量为4.10%的供试品(批号20100429)0.03 g，共6份，分别精密加入对照品储备液2、4和6 ml各2份，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再分别注入液相色谱仪中进行测定，计算含量。结果平均回收率为99.94%，RSD为0.30%(n=6)，表明加样回收率良好，见表1。

2.9供试品含量测定 取3批样品(批号20100429、20100516、20100717)按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，并按照“2.1”项下色谱条件进行HPLC测定。结果供试品中淫羊藿苷含量分别为4.10%、4.15%和4.13%。

表1 淫羊藿苷加样回收试验结果

3 讨论

3.1检测波长的选择 取淫羊藿苷对照品和藿精片供试品配制成适宜浓度的溶液，于190～700 nm波长范围内进行紫外光谱扫描，结果表明：淫羊藿苷对照品最大吸收波长为270.2 nm，藿精片供试品最大吸收波长为269.0 nm，故本实验含量测定选择波长为270 nm。

3.2提取方法的选择 本实验比较了回馏提取同超声提取的差别，在保证提取完全的前提下，使用回馏提取的方法制备供试品溶液时，操作较为复杂，并且由于过程中含有溶液转移等操作，存在一定的误差。而采用超声提取不仅操作简便，而且可以有效减少中间过程，误差较小 。

3.3提取时间的选择 取同一批次供试品，按照“2.2.2”项下操作，对供试品分别超声处理30 min和60 min，在同一色谱条件下进行高效液相测定。结果显示，二者淫羊藿苷含量无显著差异，故本实验超声提取时间选择为30 min。藿精片中含有中药提取物，易吸潮，使片质地坚硬，过程中溶解较慢，故应干燥储存，在超声提取前注意研细，以使之提取完全。

3.4流动相的选择 在《中国药典》2010年版一部[2]中，中药材淫羊藿的主要成分淫羊藿苷含量测定方法是高效液相法，但其流动相选择的是乙腈-水系统，由于乙腈毒性较大，价格较高，本实验采用甲醇-水系统，在保证分离效果的前提下，不仅能够有效降低实验过程毒性，而且取得了较好的实验结果。

3.5HPLC法测定藿精片中淫羊藿苷含量的方法学实验研究证明，本方法简便，准确，专属性强，重现性好，可作为藿精片的质量控制方法。

1 刘雪花.淫羊藿苷药理研究进展.中国现代医生，2009，47(21)：49

2 中国药典.一部.2010：306-308