HPLC法测定清化丸中黄芩苷含量*

孙燕燕，陈双璐，钱宇坤

(天津市儿童医院，天津 300074)

清化丸是《天津市医疗机构制剂规范》2008年收载的本院传统成方制剂，由玄参、连翘、马尾莲、黄芩、蒲公英、苦地丁、天花粉、赤芍、黄柏等16味中药组成的传统蜜丸，有清热解毒、软坚消肿的功效，用于急性淋巴腺炎，疮疖化脓性皮肤病。该药为医院制剂，药物成分复杂，近年来对其质控标准报道较少，笔者查阅有关文献[1-5]，采用HPLC法测定清化丸中黄芩苷含量，结果显示该方法简便快捷、精密度高、重现性好，测定结果准确可靠，可作为该制剂的质量控制标准。

1 仪器与试药

1.1仪器 LC-2010A高效液相色谱仪(日本岛津)；LC solution色谱工作站；双频恒温数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2试药 黄芩苷对照品(由中国药品生物制品检定所提供，批号110715-200212)；色谱分析用甲醇为色谱纯，水为纯净水，其他试剂为化学纯；清化丸(本院自制，批号20100301、20100501、20100701)。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱：Shim-pack VP-ODS (150 mm×4.6 mm，5 μm )；流动相为甲醇-水-冰醋酸(40∶60∶1)；柱温40 ℃；流速1.0 ml/min；检测波长280 nm：进样量5 μl。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2 500。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的黄芩苷对照品适量，加70%乙醇制成每1 ml含50 μg的溶液，即得。

2.2.2供试品溶液的制备 取本品适量，剪碎，取1 g，精密称定，精密加入70%乙醇50 ml，称定重量，超声处理(功率240 W，频率45 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

2.2.3阴性样品溶液的制备 按处方配比，取除黄芩外的其他各药味，按清化丸的制备方法制得样品，再按“2.2.2”供试品溶液制备方法，制得阴性样品溶液。

2.2.4专属性试验 分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，按照“2.1”项下色谱条件进样。结果表明，供试品溶液在对照品溶液黄芩苷峰保留时间处有一色谱峰，而阴性对照溶液在该处未出现色谱峰，对测定无干扰。理论塔板数按黄芩苷峰计算均大于2 500；分离度符合要求。HPLC图谱见图1。

1.黄芩苷

2.3标准曲线的绘制 精密称取105 ℃干燥至恒重的黄芩苷对照品5.40 mg，加70%乙醇适量，超声处理30 min，放冷，分别制成浓度为0.021 6、0.043 2、0.064 8、0.086 4、0.108 0、0.129 6 mg/ml的对照品溶液，按照“2.1”项下色谱条件进样，测定各自峰面积，以对照品进样量(μg)为横坐标(X)，峰面积值为纵坐标(Y)，求得回归方程：Y=3 014 105.38X-9 115.21(r=0.999 8)。结果表明黄芩苷在0.108～0.648 μg范围内线性良好。

2.4精密度试验 取“2.2.1”项下的对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件分析，连续进样6次，测定黄芩苷峰面积，峰面积平均值为1 292 607.5，RSD为0.69%，符合要求。

2.5重复性试验 取同一批号样品1 g，精密称定，共6份，分别按照“2.2.2”项下供试品溶液制备操作，按“2.1”项下色谱条件分析测定。结果样品中黄芩苷平均含量为3.499 mg/g，RSD为0.22%(n=6)，符合要求。

2.6稳定性试验 取同一批号样品1 g，精密称定，按照“2.2.2”项下供试品溶液制备操作，按“2.1”项下色谱条件分析，分别在0、4、8、12、24 h进样，测得各时间点样品峰面积值的RSD为0.95%，结果表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.7加样回收试验 取同一批号(20100301)样品适量，剪碎，取0.5 g，共6份，精密称定，分别精密加入黄芩苷对照品溶液(0.034 16 mg/ml)50 ml，按照“2.2.2”项下方法操作，制得供回收率用供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分析，计算回收率，结果平均回收率为101.5%，RSD为1.30%。结果见表1。

表1 黄芩苷加样回收试验结果(n=6)

2.8样品含量测定 取3批清化丸样品，按照“2.2.2”项下供试品溶液制备操作，按“2.1”项下色谱条件分析测定，计算含量，结果见表2。

表2 样品中黄芩苷含量测定结果

3 讨论

3.1溶剂的选择 取同一批号(20100301)样品，剪碎，取1 g，精密称定，分别精密加入50%乙醇、70%乙醇各50 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，称定重量，用各自溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，测定样品中黄芩苷的含量。结果采用70%乙醇溶剂和50%乙醇溶剂提取样品中黄芩苷含量分别为3.499和3.231 mg/g，故采用70%乙醇为提取溶剂。

3.2提取方式的确定 取同一批号(20100301)样品，剪碎，取1 g，精密称定，分别精密加入70%乙醇50 ml，称定重量，分别超声处理(功率240 W，频率45 kHz)和加热回流方式，提取时间均为30 min，放冷，称定重量，用70%乙醇补足各自减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，测定样品中黄芩苷的含量。结果采用超声提取和加热回流样品中黄芩苷含量分别为3.499和3.189 mg/g，故采用超声处理方式提取。

3.3提取时间的考查 取同一批号(20100301)样品，剪碎，取1 g，精密称定，分别精密加入70%乙醇50 ml，称定重量，分别采用超声处理20、30、45 min，放冷，称定重量，用70%乙醇补足各自减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，测定样品中黄芩苷的含量。结果超生处理20、30和45 min后样品中黄芩苷含量分别为3.204、3.499和3.513 mg/g，认为提取30 min即可将样品中的黄芩苷提取完全，故提取时间定为30 min。

3.4本实验采用的高效液相色谱法准确性高、简便可靠、重复性好，排除了其他组分对测定的干扰，可用于清化丸中黄芩苷含量的测定。

1 李晓梅,赵琪钟,卫舒帆. HPLC法测定清肺抑火片中黄芩苷的含量. 中国药师, 2007,10(4):358

2 刘广川，孙敬东，吴贵华.HPLC法测定祛斑胶囊中黄芩苷的含量.天津药学，2007，19(6)：15

3 江丽,申国庆,龚春燕. 高效液相色谱法测定复方黄芩胶囊中黄芩苷的含量.中国医院药学杂志,2008,28(16):1418

4 刘艳,张玉萍. HPLC法测定银黄滴丸中黄芩苷的含量. 云南中医中药杂志,2009,30(1):56

5 陈喜生,胡滨湘. HPLC法测定胆炎康胶囊中黄芩苷的含量.中国药师,2009,12(10)：1412