黄瓜香提取物对大鼠急性心肌缺血的实验研究

彭湘萍 彭振宇 彭英福 吕江明 李春艳

1.湖南省吉首大学医学院生理系，湖南 吉首 416000;2.湖南省湘西自治州人民医院，湖南 吉首 416000;3.湖南省吉首大学医学院药理系，湖南 吉首 416000

黄瓜香为堇菜科堇菜属蔓茎堇菜 (Viola diffusa Ging，VDG)的全草，属多年生草本植物，湘西地区亦称黄花草、毛毛香，盛产于湘西、闽北等地区。其内含丰富的化学成分，主要为有黄酮、香豆素、有机酸、糖类、氨基酸等，具有清热解毒、散淤消肿、去腐生肌、清肺止咳、生肌接骨之效，民间使用历史悠久。有研究发现黄瓜香可通过抑制超氧阴离子［1］，发挥抗氧化作用，而氧自由基生成及脂质过氧化反应是心肌缺血损伤的重要机制之一。黄瓜香是否具有心肌缺血保护作用未见报道。本实验采用异丙肾上腺素制备心肌缺血模型，评价黄瓜香对实验性大鼠急性心肌缺血的保护作用，为进一步探讨黄瓜香的生物活性提供实验依据。

1 材料

1.1 药物与试剂 黄瓜香的全草水提取物由吉首大学药理学实验室提供，传统方法水提、浓缩，临用时用蒸馏水稀释成所需浓度 (实验室所用剂量均与生药计);乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶 (CK)、超氧化物歧化酶 (SOD)和丙二醛 (MDA)测定试剂盒 (南京建成生物有限公司提供);盐酸异丙肾上腺素 (上海禾丰制药有限公司，批号6E20003);其他试剂均为国产分析纯。

1.2 主要仪器 723可见光分光光度计 (上海光谱仪器有限公司);BL－420机能生物机能实验系统 (成都泰盟科技有限公司);95℃水浴箱;低速离心机 (湖南凯达仪器公司)。

1.3 实验动物 60只健康成年SD大鼠，清洁级，雌雄各半，体重200g左右，由长沙东创实验动物部提供。大鼠自由饮水和饮食，适应性饲养一周后开始实验。

2 方法

2.1 大鼠急性心肌缺血模型制备及实验分组 60只大鼠随机分成6组，每组10只:①正常对照组;②模型组;③黄瓜香低剂量组 (0.4g/kg);④黄瓜香中剂量组 (0.8g/kg);⑤黄瓜香高剂量组 (1.6g/kg);⑥消心痛组 (25mg/kg)。大鼠称重，阳性组及黄瓜香按体重给予相应的药物灌胃，空白组给予同体积生理盐水，每天1次，连续7天。第6、7天灌胃1小时后，给予ISO(5mg/kg)［2］，腹腔注射，造成心肌缺血。末次给药1小时后，3%戊巴比妥钠 (1ml/kg)，腹腔注射麻醉动物，背位固定，心电图机针状电极接在肢体导联Ⅱ的位置，BL－420系统记录大鼠1min，5 min，10 min，20 min心电图，观察心电图 ST段及 T波变化。

2.2 血清CK、LDH测定 大鼠眼球取血，37°温浴30min，2500转/15min，吸取上层血清，分光光度计分别测定血清LDH、CK、SOD、MDA含量，严格按试剂盒说明操作。

2.3 统计学方法 采用SPSS 13.0软件进行统计，组间比较采用t检验，数据用均数±标准差 ()表示，P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 心电图记录:除正常组外经Ⅱ导联心电图记录各组心电图ST段抬高明显，T波高尖明显，说明心肌缺血造模成功。见图1。

图1 急性心肌缺血心电图表现

3.2 黄瓜香对心肌损伤大鼠血清LDH、CK含量的影响与正常组比较，模型组大鼠血清中LDH、CK含量均升高(P＜0.05);与模型组比较，黄瓜香各剂量组，消心痛组均可不同程度减低血清中LDH、CK含量，其中高剂量组作用比低剂量组作用更明显，提示黄瓜香具有调节心肌酶的作用，并具有一定的剂量依赖关系 (P＜0.05)。结果见表1。

表1 黄瓜香对急性心肌缺血大鼠血清LDH、CK含量的影响 (x±S)

3.3 黄瓜香对心肌损伤大鼠血清SOD、MDA的影响 与正常组比较，模型组大鼠血清中SOD含量明显降低，MDA含量明显升高 (P＜0.05)。黄瓜香各剂量组，消心痛组均可不同程度增加血清中SOD含量，且不同程度降低MDA含量，;与模型组比较具有明显差异性 (P＜0.05)，其中高剂量组作用比低剂量组作用更明显，提示黄瓜香具有抗氧化的作用，并具有一定的剂量依赖关系。

4 讨论

缺血性心脏病是严重危害人类健康的疾病，如冠心病、心绞痛等发病率逐年上升。因此寻求抗心肌缺血的天然药物是一种有效的途径。急性心肌缺血时冠脉供血不足或耗氧量增加均可导致心肌缺血损伤，心肌损伤时心肌细胞膜的通透性增加，导致心肌中LDH、CK释放入血，故血清中CK、LDH活性越高，心肌损伤越严重，是实验和临床公认的对心肌缺血有诊断意义的酶，可作为判断心肌缺血损伤程度的指标［3］。心肌缺血时机体通过酶系统与非酶系统产生大量氧自由基，氧自由基能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸 (PUFA)，引发脂质过氧化作用，形成脂质过氧化产物，如丙二醛 (MDA)。MDA为氧自由基攻击生物膜不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应的终产物，其值可间接反映机体细胞受自由基攻击的严重程度。超氧化物歧化酶(SOD)是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。SOD活性的高低间接地反映了机体清除自由基的能力，它是机体清除氧自由基的重要酶类，能清除超氧阴离子，保护细胞免受损伤，常被作为反映氧自由基清除能力的指标。本实验采用异丙肾上腺素 (ISO)造成急性心肌缺血模型，ISO为β受体强激动剂，大剂量应用能诱导心肌产生不可逆的缺血损伤［4］，给予三个剂量的黄瓜香处理，观察对大鼠急性心肌缺血的影响。

实验结果可见，模型组大鼠血清中LDH、CK及MDA含量增加，SOD含量下降。黄瓜香各剂量组能降低心肌缺血大鼠血清中LDH、CK及MDA含量，升高血清中SOD含量。抗氧化损伤一直是心肌缺血治疗的重要措施之一［5］。本实验结果显示，黄瓜香能稳定心肌细胞膜，减少心肌酶外漏，能够增强机体对氧自由基的清除能力，减少细胞膜脂质过氧化损伤，这可能是其保护心肌缺血的机制之一。说明黄瓜香具有减轻心肌损伤，对缺血心肌的保护作用。本实验结果将为进一步研究黄瓜香的药理疗效提供重要依据，为天然药物抗心肌缺血提供新的思路。

［1］李先辉，李春艳，吕江明，方世贤，彭湘萍.黄瓜香水提物体外抗氧化活性实验［J］.吉首大学学报，2006，27(5):95－97.

［2］胡旭光，相湘，杨超燕，周毅生.丹酚酸B对实验性大鼠急性心肌缺血的保护作用［J］.广东医药，2010，31(3):334－336.

［3］徐光佑，谢勇，蔺晓源，刘柏炎，蔡光先.超微参附汤对急性心肌缺血大鼠的保护作用［J］.吉林中医药，2010.30(7):633－634.

［4］王道成，李七一，朱萱萱，严士海，秦晓康，马俊杰.“冠心平”对大鼠急性心肌缺血的保护作用研究［J］.江苏中医药，2010，42(11):79－81.

［5］王维亭，赵专友，周则卫，汤立达，刘厚孝，鲁卓林.核桃壳提取物对大鼠急性心肌缺血作用的影响［J］.中国医院药学杂志，2010，30(5):386－368.