胃腺癌中HPSE、VEGF的表达与临床病理特征的关系

陈锦章,谢剑明,李爱民,郑 航,罗荣城

(南方医科大学南方医院肿瘤科,广州510515)

胃癌是全球发病率较高的恶性肿瘤。目前,缺乏开展胃癌筛查及早期诊断方法,因此,大部分胃癌患者确诊时已为晚期[1]。手术,放、化疗等虽目前常用的治疗手段,但是并不能显著改善胃癌患者预后,延长患者的生存时间。因此,提高胃癌的早期诊断率、寻找新的、有效的治疗靶点和预后指标,是当前胃癌研究的重要方向。现应用免疫组化法检测并分析乙酰肝素酶(heparanase,HPSE)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在胃腺癌组织和正常胃黏膜组织中的表达及其与临床病理特征的关系,结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2000年 1月至 2004年1月在本院手术切除并经病理确诊为胃腺癌的患者103例为治疗组,男67例,女36例;年龄31～78岁,平均(57.97±12.28)岁。从胃腺癌患者的正常切缘组织中随机抽取20例为对照组,男13例,女7例;年龄32～72岁,平均(57.95±11.83)岁。随访时间为2～6年。

1.2 试剂和仪器 MAB-0243 Mouse Anti-VEGF(福州迈新生物技术开发有限公司),BA1630R abbit Monoclonal anti-HPA(武汉博士德生物工程有限公司)。石蜡切片机(山东,AS325);显微镜(Olympus BX40);电热恒温干燥箱(上海跃进医疗器械一厂)。

1.3 方法 免疫组织化学法采用EliVisionTM二步法,具体操作步骤如下:(1)65℃烤片2～4 h;(2)石蜡切片脱蜡至水;(3)蒸馏水冲洗2 min;(4)抗原修复:将切片浸泡于枸橼酸盐缓冲液(pH 6.0)中,在功率850 W的微波炉中加热 11 min,放至室温后用蒸馏水冲洗2 min;(5)浸泡于3%H2O2中,在功率350 W的微波炉中加热2.5 min,以消除内源性过氧化物酶的活性;(6)蒸馏水冲洗2 min;(7)PBS冲洗,2 min×3次;(8)滴加一抗工作液,37℃孵育1 h;(9)PBS冲洗,2 min×3次;(10)滴加试剂1(polymer helper),37℃孵育20 min;(11)PBS冲洗,2 min×3次;(12)滴加试剂2(poly peroxidase-anti-mouse/rabbit IgG),37℃孵育30 min;(13)PBS冲洗,2 min×3次;(14)DAB显色5 min;(15)自来水充分冲洗,复染;(16)脱水,透明,封片。

1.4 评判标准 阴性:细胞膜无棕黄色颗粒样沉淀;阳性:细胞膜有棕黄色颗粒样沉淀。染色分级:整张切片无阳性细胞(-),标识为0级表达;阳性细胞小于10%(+),标识为1级表达;阳性细胞数10%～50%(++),标识为 2级表达,阳性细胞超过50%(+++),标识为 3级表达。

1.5 统计学处理 采用χ2检验、Fisher′s精确概率法及 Kaplan-M eier法,生存期曲线显著性的比较用Log Rank(M antel-Cox)法进行分析;各项指标表达的相关性以Spearman等级相关分析的双侧检验;以COX回归对各项指标单因素或多变量联合与生存期的关系进行统计学分析,P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

103例胃癌组织中 HPSE、VEGF阳性表达率分别为57.3%(59/103)、46.6%(48/103),见插Ⅳ图1。HPSE、VEGF蛋白表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、部位、分化程度均无显著性相关(P＞0.05)。与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移及临床分期相关(P＜0.05)。HPSE、VEGF蛋白表达阳性患者中位生存时间分别为12、11个月,阴性患者中位生存时间为70个月;HPSE、VEGF表达阳性患者与阴性患者生存时间的差异有统计学意义(P＜0.05,图2、3)。胃癌中 HPSE蛋白表达与VEGF蛋白表达呈正相关(r=0.675,P＜0.05)。

图2 胃癌组织中HPSE蛋白表达与生存时间的关系

图3 胃癌组织中VEGF蛋白表达与生存时间的关系

3 讨 论

有研究表明,HPSE和VEGF可作为胃癌细胞扩散、转移以及预后的指标[1-5]。本研究结果与之相符。HPSE是一种能裂解糖氨聚糖中HS侧链的内切糖苷酶,在肿瘤细胞的侵袭、转移及血管生成等过程中起着极其重要的作用,是肿瘤细胞扩散与转移过程的关键酶,也是裂解连接于硫酸乙酰肝素蛋白多糖,heparin sulfate proteogly can,HSPG)核心分子上硫酸肝素的一类内切糖苷酶,是抗肿瘤的理想靶点[1]。有研究发现,正常胃黏膜组织中无HPSE的表达,胃癌组织中HPSE的表达与肿瘤体积和局部淋巴结转移呈正相关。HPSE高表达的患者预后差。

VEGF是重要的促血管生成因子,在肿瘤血管形成中起重要作用。应用斑点杂交和原位杂交方法发现,卵巢癌、肺癌、结肠癌、直肠癌、肾癌、乳腺癌、膀胱癌、胰腺癌、胃癌、肝癌、恶性胶质瘤和淋巴瘤等肿瘤组织内VEGF mRNA呈过度表达,肿瘤细胞分泌的VEGF最终通过与内皮细胞上的受体结合而发挥作用。有研究还发现VEGF是恶性肿瘤治疗的一个有效靶点[1]。本研究发现,HPSE蛋白与VEGF蛋白在胃癌组织中的阳性表达率较高,而在胃正常组织中呈阴性表达;HPSE和VEGF的表达越高,肿瘤侵袭及转移能力也越强,与文献报道的相似[6-15]。胃癌组织中HPSE与VEGF蛋白的联合表达与患者生存期相关,二者的高表达有减少胃癌患者生存时间的危险。

总之,同时检测 HPSE、VEGF蛋白在胃癌中的表达,对判断胃癌的恶性潜能及其预后有重要的参考价值。如果能研制出同时针对以HPSE和VEGF为靶点的药物,那么不仅可以丰富胃癌治疗的方法,而且可以改善胃癌患者的预后,提高晚期胃癌患者的中位生存期。

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