脑络舒宁胶囊益智作用实验研究

苟显娜，彭成，王忠，刘建林

记忆障碍(Impaired Memory)，指个人处于一种不能记住或回忆信息或技能的状态，有可能是由于病理生理性的或情境性的原因引起的永久性或暂时性的记忆障碍。

脑络舒宁胶囊是王永炎院士提出的临床应用的有效方，由女贞子、墨旱莲等中药组成，具有滋肾平肝、理气活络的功效。本文通过制作经典记忆障碍动物模型，探讨脑络舒宁胶囊对记忆获得、巩固、再现缺失障碍动物模型的智力影响。

1 实验材料

1.1 实验动物

SD大鼠，普通级，雌雄各半，体重（240±20）g；昆明种小鼠，普通级，雌雄各半，体重18～22g，由成都中医药大学实验动物研究中心提供，动物质量合格证号：SCXK（川）2008-11。

1.2 药品与试剂

受试药物 脑络舒宁胶囊浸膏粉，由北京阳光合和中医药科技有限公司提供。批号：100401；浸膏粉1 g相当于原生药3.833 g。试验设低、中、高三个剂量组，试验前用蒸馏水分别配制成0.067 gmL-1、0.133 gmL-1、0.266 gmL-1药液备用。阳性药物：甲磺酸双氢麦角毒碱片（喜得镇），由天津华津制药厂和瑞士诺华制药有限公司联合生产，生产批号：9J856T。规格：1 mg/片。用蒸馏水配制成0.2 mgmL-1药液，4℃冷藏备用。

造模药物 氢溴酸东莨菪碱，由SIGMA公司生产，批号：648K1200；临用时用0.9%生理盐水配成0.5 mgmL-1溶液备用。亚硝酸钠，成都市科龙化工试剂厂生产，批号：20070717，临用时用0.9%生理盐水配成6 mgmL-1备用。环己酰亚胺，由SIGMA公司生产，批号030M1524，临用时用0.9%生理盐水配成6 mgmL-1药液备用。酒精，75%酒精，由成都蜀都实业有限责任公司生产，批号20100402，临用时配成40%的药液，备用。

1.3 主要仪器

YLS-3TB小鼠跳台仪；MT-200Morris型水迷宫跟踪分析系统；BA-200自动避暗测试仪。

2 实验方法

2.1 大鼠、小鼠记忆获得障碍试验

取健康、合格普通级SD大鼠60只，按体重随机分为空白组、模型对照组、喜得镇组、脑络舒宁胶囊高、中、低剂量组；取健康、合格普通级KM小鼠72只，分组方法同上。喜得镇组及脑络舒宁胶囊各剂量组灌胃相对应药液10 mLkg-1，空白组及模型对照组灌胃等体积蒸馏水，1次/d，SD大鼠连续灌胃30 d；小鼠连续灌胃14 d。末次给药后1 h，除空白组外，其他各组大鼠腹腔注射氢溴酸东莨菪碱5 mgkg-1，造成记忆获得障碍模型[1]，对照组注射等体积生理盐水。造模20 min后用跳台法进行训练，记录大鼠从平台跳下的潜伏期和5 min内跳下次数（错误次数）作为记忆指标。

2.2 大鼠记忆巩固障碍试验

亚硝酸钠所致记忆巩固障碍模型：取健康、合格SD大鼠66只，按体重随机分为空白组、喜得镇组、脑络舒宁胶囊高、中、低剂量组；取健康、合格SD大鼠60只，分组方法同上。喜得镇组和脑络舒宁胶囊各剂量组灌胃相应药液10 mLkg-1，空白组及模型对照组灌胃等体积蒸馏水，1次/d，分别连续灌胃21 d和14 d。亚硝酸钠：在给药的第17d，用MT-200 Morris水迷宫跟踪分析系统行定位航行训练[2]，末次训练结束后，除空白组外，各组动物立即一次性腹腔注射亚硝酸钠120 mgkg-1，造成记忆巩固障碍模型；空白组注射等体积生理盐水。24 h后进行定位航行测试，于定位航行试验结束24 h后，进行空间搜索测试。环己酰亚胺所致记忆巩固障碍模型：末次训练结束后，除空白组外，其他各组大鼠立即腹腔注射环己酰亚胺120 mgkg-1，造成记忆巩固障碍模型，空白组注射等体积生理盐水。造模24 h后，用跳台法进行测试，记录大鼠跳台潜伏期和5 min内错误反应次数。

2.3 小鼠记忆再现缺失障碍试验

取健康、合格昆明种小鼠66只，按体重随机分为空白组、喜得镇组、脑络舒宁胶囊高、中、低剂量组。喜得镇组及脑络舒宁胶囊各剂量组灌胃相对应药液10 mLkg-1，空白组及模型对照组灌胃等体积蒸馏水，1次/d，连续灌胃14 d。末次给药24 h后，除空白组外，其它各组灌胃40%的酒精10 mLkg-1，造成记忆再现缺失模型[5]，空白组灌胃等体积蒸馏水。造模20 min后进行避暗测试，记录小鼠的错误潜伏期和5 min内从明区到暗区的错误次数。

2.4 结果统计

以上数据均采用SPSS17.0统计软件包建立实验结果数据库并进行分析，以（x±SD）表示各定量指标的平均值和分散程度。多样本均数的比较采用oneway ANOVA分析。

3 实验结果

3.1 脑络舒宁胶囊对大鼠、小鼠记忆获得障碍的影响

经训练，大鼠跳台潜伏期均达标；小鼠跳台淘汰1只动物。与空白组比较，模型对照组大鼠、小鼠潜伏期明显缩短，触电错误次数明显增多，有显著的统计学意义（P<0.01）。结果详见表1、2。

表1 脑络舒宁胶囊对东莨菪碱致记忆获得障碍大鼠的影响(x±SD)

表2 脑络舒宁胶囊对东莨菪碱致记忆获得障碍小鼠跳台法测试的影响(x±SD)

注：与空白组比较，△△P <0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

3.2 脑络舒宁胶囊对大鼠记忆巩固障碍的影响

3.2.1 对大鼠亚硝酸钠致记忆巩固障碍模型的影响 经训练，从喜得镇组和脑络舒宁胶囊中剂量组淘汰有明显认知障碍的大鼠2只，其余大鼠进入正常试验。结果：定位航行测试：模型对照组大鼠逃避潜伏期明显延长，到达平台的总路程明显增加，同时在第二象限的距离明显增加，与空白组比较具有显著性差异（P<0.05或P<0.01）。空间搜索测试：与空白组比较，模型对照组平台停留时间明显缩短，有效区停留距离明显缩短，经过平台的次数明显减少，差异具有统计学意义（P<0.01）。结果详见表3、4。

表3 脑络舒宁胶囊对亚硝酸钠记忆巩固障碍大鼠定位航行测试的影响 （x±SD）

表4 脑络舒宁胶囊对亚硝酸钠记忆巩固障碍大鼠空间搜索测试的影响 （x±SD）

3.2.2 对大鼠环己酰亚胺致记忆巩固障碍模型的影响 经训练，所有动物均达标。与空白组比较，模型对照组大鼠潜伏期明显缩短，触电错误次数增多，差异有统计学意义（P<0.01）。结果详见表5。

表5 脑络舒宁胶囊对环己酰亚胺记忆巩固障碍大鼠跳台法测试的影响 （x±SD）

3.3 脑络舒宁胶囊对小鼠记忆再现缺失障碍的影响

经训练，脑络舒宁胶囊中剂量组1只动物不达标被淘汰。经灌胃40%酒精后，模型对照组小鼠避暗潜伏期明显缩短，5 min内错误次数明显增加，与空白组比较有显著性差异（P＜0.01）。结果详见表6。

表6 脑络舒宁胶囊对酒精致记忆再现缺失小鼠避暗测试的影响（x±SD）

4 讨论及结论

学习和记忆是动物和人类赖以生存的重要脑功能。记忆，是使贮存于脑内的信息复呈于意识中的功能，是保存和回忆以往经验的过程。人类的记忆是一个相当复杂的过程，有三个基本过程：即获得、巩固、再现[3]。东莨菪碱是M-胆碱受体阻断剂，能特异性阻抑信息由第1级记忆向第2级记忆的转移过程，从而干扰获得近期记忆的能力，制造的记忆障碍模型属于记忆获得性障碍[4]。脑组织的缺血缺氧会严重影响动物的学习记忆功能，亚硝酸钠为致缺氧剂，它可使血液中的低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，失去运输氧的能力而导致组织缺氧，进而引起脑组织缺血缺氧，损害学习和记忆过程。蛋白质合成是长期记忆的内在基础，在学习过程中形成的新蛋白质是记忆的存贮分子，反之，抑制蛋白质合成40%即能引起遗忘[5]；环己酰亚胺作为蛋白抑制剂能明显损害动物的学习记忆能力。乙醇作为中枢抑制剂，较低浓度下（40%）即可明显破坏记忆过程，而对中枢和一般运动功能无明显影响[5]。本试验在用上述药物造模后，模型组大、小鼠的学习记忆能力明显弱于正常组，说明本试验的造模方法是可取的，造模是成功的。

脑络舒宁胶囊是王永炎院士提出的临床应用的有效方，由女贞子、墨旱莲等中药组成，具有滋肾平肝、理气活络的功效。本试验中，脑络舒宁胶囊能够显著延长记忆获得障碍大、小鼠的跳台潜伏期，减少5 min内错误次数，差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01）；明显缩短亚硝酸钠所致记忆巩固障碍大鼠定位航行测试的逃避潜伏期，缩短到达平台的总路程，增加空间搜索测试2min内经过平台次数和有效区停留距离，延长平台停留时间，差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01）；显著延长环己酰亚胺所致记忆障碍大鼠的跳台潜伏期和减少5min内的错误次数，差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01）；明显延长记忆再现缺失小鼠潜伏期和5min内进入暗区的错误次数，差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。以上结果提示：脑络舒宁胶囊可能具有胆碱能样作用，改善脑部缺血缺氧，改善中枢抑制以及增加脑内蛋白质合成，从而发挥其益智作用。结论：脑络舒宁胶囊具有较好的益智作用。

[1] 徐淑云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,2001:826.

[2] 陈奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社,2006:739.

[3] 曾锦旗,董为伟.记忆障碍动物模型研究进展[J].现代康复,2001,5(10):74.

[4] 邹宇晓,廖森泰,吴娱明,等.金针菇多糖提取物对记忆障碍 模型大鼠、小鼠学习记忆能力的影响[J].中国食品学报,2010,10(1):28.

[5] 陈玉兴,周瑞玲,崔景朝,等.益智汤对三种化学药品所致小鼠记忆损伤的影响[J].中国实验方剂学杂志,2006,12(1):43.