万孚疟疾快速检测试剂在苏丹维和任务区的应用

薛成军，张胜利，翟慎军，陈治水

近年来，我国已派出多批维和部队在非洲数个国家和地区执行维和任务。由于非洲一直是疟疾疫情高发区，每年因疟疾病死人数近一百万，因此各任务区维和部队在做好预防工作的前提下，及时准确的对疟疾感染者作出诊断尤为重要。目前，疟原虫显微镜检查仍是确诊疟疾的最可靠方法，但其费时，耗力，且需要熟练的专业技术人员及一定的实验室条件，因此具有快速、简便等特点基于免疫层析技术的疟疾快速诊断测试（RDTs）逐渐普及应用。现利用广州万孚疟疾快速检测试剂对RDTs在苏丹瓦乌维和任务区的应用效果进行评估和探讨。

1 材料与方法

1.1 试剂 由广州万孚生物技术有限公司开发的疟疾快速检测试剂盒（胶体金法）。包装规格：铝箔袋单人份包装测试卡，25 人份/盒。

1.2 一般资料 2009-10～2010-07联合国苏丹维和团第二战区（瓦乌）中国二级医院门诊和当地一级医院的215例门诊发热患者（包括各出兵国军事人员，民事人员和当地雇员等）血液样本共236份，男193份，女43份；年龄19～54岁。其中个别患者血液样本采集2～3次。血液样本皆用EDTAK2抗凝真空管采集保存。

1.3 方法

1.3.1 显微镜镜检 每份血液样本制作厚、薄2张涂片，采用快速瑞氏染液进行染色，高倍油镜下查找疟原虫，并进行分类，结果作为疟疾诊断的金标准。

1.3.2 万孚疟疾快速诊断试剂检测 每份血液样本严格按照试剂盒说明书进行操作，在规定时间内判断结果并记录。

2 结 果

2.1 试剂效果 共使用万孚疟疾快速检测试剂进行测试标本246份次，样本检测236次，重复试验10次，其中0次无效。随机抽取10例疟疾快速检测试剂阳性血样进行重复试验，符合率100%。

2.2 检测结果 共检测发热患者236例次。显微镜检查阳性39例次，阴性197例次；万孚疟疾快速检测试剂检测阳性37例次，阴性199例次。具体检测结果见表1。

2.3 试剂检测效果 以显微镜检查结果为标准，万孚疟疾快速检测试剂检测灵敏度92.3%，特异性99.5%，总有效率98.3%。

3 讨 论

疟原虫泛乳酸脱氢酶（panLDH）是其有性生殖阶段在糖酵解途径中产生的一种可溶性终端酶，它的产生和积累可以作为疟原虫体内或体外活动的指标，属于广谱疟原虫抗原（pan-malaria antigen，PMA）。可感染人类的四种类型的疟原虫都可产生这种酶，但分别是四种不同的乳酸脱氢酶异构体。恶性疟原虫特异性乳酸脱氢酶（pfLDH）就是其中的一种异构体。作为疟疾快速诊断测试（RDTs）商品试剂的一种，万孚疟疾快速检测试剂则是通过采用双抗夹心法检测红细胞中或释放与红细胞外的panLDH和pfLDH来检测血液中是否存在疟原虫。

表1 万孚试剂和镜检结果（例次）

万孚疟疾快速检测试剂的总体灵敏度92.3%，特异性99.5%，表现出很好的检测效能，符合文献报道[1]。其中，万孚试剂对恶性疟、非恶性疟和混合感染的灵敏度分别为91.7%、90%和100%，表现出一定的差异。虽然由于样本的基础统计量多少不等，不能完全说明真实状况，但是其影响其灵敏度的假阴性结果是确实存在的。当血液中的疟原虫密度>200/μl时，RDTs对恶性疟原虫诊断的灵敏度通常>90%，如果低于这个密度，RDTs的灵敏度会显著降低[2，3]。而且由于该统计样本来源多为联合国工作人员，部分长期服用预防量的抗疟药物，导致部分阳性血液样本中的疟原虫的密度偏低，影响快速检测试剂的灵敏度。同时，当地的高温湿热环境也可能对其灵敏度产生影响[4]，因此良好的试剂保存条件也是保证RDTs试剂检测效能的关键因素之一。虽然非恶性疟的阳性标本较少，不能完全反映万孚试剂的灵敏度，但有文献报道，非恶性疟相对恶性疟在RDTs的检测效能上都表现出较低的灵敏度[5]，可能与其检测抗原的不同或试剂所含抗体的不同有关。

由于采用免疫层析技术，并利用特异性抗体捕获疟原虫抗原，使万孚疟疾快速诊断试剂表现出很高的特异性（99.5%）。RDTs的特异性都能保持在较高的水平，多数保持在95%～100%[1,6]。表1中出现的1例假阳性样本，影响了该试剂的特异性。经询问病史得知，该患者2周前曾疟疾发作，并经过治疗好转。因此，出现假阳性可能由于患者血液中的游离疟原虫特异性乳酸脱氢酶未被完全清除所造成[7]；也可能是患者血液中疟原虫未被完全清除，而因药物的作用表现出很低的密度，并低于显微镜检出底线的缘故。

RDTs由于存在多种影响因素，在可能的情况下，应该对其结果的准确性做出专业评估，并进一步实施有效的验证方法。RDTs的阳性结果可信度较高，阴性结果不能排除疟疾感染的可能。RDTs在血液中的疟原虫密度>40 000/μl时可能会因前带现象而产生假阴性[8]。因此在出现临床症状而RDTs结果阴性的情况下，可适当稀释血液样本进行重新检测，并尽可能的通过其它检测方法得到确认诊断，避免对致命性疟疾发作患者的治疗延误。

综上所述，虽然万孚疟疾快速检测试剂在苏丹瓦乌维和任务区的现场应用中存在一定的假阳性和假阴性，但仍保持了较好的敏感性和很高的特异性，以及良好的稳定性和重复性，可以为显微镜检查提供有用的信息。国内外文献也报道了数种商品试剂，在现场试验中检测效能都表现优秀[3,9,10]。再者，由于我国部分维和官兵分散在多个地点长期执行任务，而当地缺乏实验室条件和技术人员，这给疟疾及时正确的诊断带来困难。疟疾快速诊断试剂因其操作简便，结果易于判断，可用于维和部队长期在外执行任务人员的现场检测，并结合临床症状作出初步诊断。

[1]刘 慧，康可人，李春富，等.万孚疟疾快速诊断试剂盒效果评价[J]，寄生虫病和感染性疾病，2008，4(19)：57-59.

[2]Moody A,Rapid diagnostic tests for malaria parasites.Clin Microbiol Rev,2002，15:66-78.

[3]J.P.Guthmann,A.Ruiz,G.Priotto,et al.Validity,reliability and ease of use in the field of five rapid tests for the diagnosis of Plasmodium falciparum malaria in Uganda.J Clin Microbiol,2002,96,254-257.

[4]Elizabeth A Ashley,Malek Touabi,Margareta Ahrer.Evaluation of three parasite lactate dehydrogenase-based rapid diagnostic tests for the diagnosis of falciparum and vivax malaria:Malaria Journal,2009,8(2):241.

[5]Mason DP,Kawamoto F,Lin K,et al.A comparison of two rapid field immunochromatographic tests to expert microscopy in the diagnosis of malaria.Acta Trop,2002,82(1):51-9.

[6]Reyburn H,Mbakilwa H,Mwangi R,et al.Rapid diagnostic tests compare with malaria microscopy for guiding outpatient treatment of febrile illness in Tanzania:randomised trial.BMJ,2007,334:403-409.

[7]Palmer CJ,Bonilla JA,Bruckner DA,et al.Multicenter study to evaluate the Optimal test for rapid diagnosis of malaria in U.S.hospitals.J Clin Microbiol,2003,41(11):5178-82.

[8]Meredith L McMorrow,M Irene Masanja,Salim M K Abdulla.Challenges in routine implementation and quality control of rapid diagnostic tests for Malaria-Rufiji District,Tanzania.Am J Trop Med Hyg,2008,79(3):385-390.

[9]VanderJagt TA,Ikeh EI,Ujah IO,et al.Comparison of the optimal rapid test and microscopy for detection of malaria in pregnant women in Nigeria.Trop Med Int Health,2005,10(1):39-41.

[10]孙晓东，邓 艳，张再兴.艾康恶性疟/间日疟免疫层析检测试剂盒效果评价[J].中国热带医学，2007，7(1)：28-29.