HPLC法测定复方盐酸伪麻黄碱缓释胶囊中主药的含量

苏 勍，徐光奇，莫宗琪，连素敏

盐酸伪麻黄碱具有选择性收缩血管作用，可收缩鼻腔、鼻窦及上呼吸道黏膜血管，消除组织水肿和充血，使呼吸道畅通[1]。萘普生钠为新型非甾体抗炎药，能抑制花生四烯酸代谢中的环加氧酶，减少前列腺素的合成，起到解热、镇痛、抗炎作用[2]。笔者以二者研制的复方盐酸伪麻黄碱缓释胶囊可有效控制流行性感冒引起的鼻塞、头痛、发热等症状。《中国药典》2005版中，盐酸伪麻黄碱和萘普生钠的含量测定均采用非水滴定法，操作较繁琐且无法同时检测，本文介绍以HPLC法同时测定二者含量，建立了一种分离度好、准确、简便、迅速的方法。

1 材 料

1.1 样品与试剂 复方盐酸伪麻黄碱缓释胶囊 （自制。规格：盐酸伪麻黄碱60 mg；萘普生钠110 mg/粒。批号：090320、090321、090322）；盐酸伪麻黄碱对照品（中国药品生物制品检定所）；萘普生钠对照品（中国药品生物制品检定所）；甲醇为色谱纯（天津四友生物医学技术有限公司）；磷酸、磷酸二氢钾、十二烷基硫酸钠均为市售分析纯试剂。

1.2 仪器 SP8800高效液相色谱仪 （美国Spectra-Physics公司），Spectra100紫外检测器 （美国Spectra-Physics公司），Echrom98色谱工作站 （大连依利特科学仪器有限公司），pHS-3C型酸度计（上海雷磁仪器厂）,PE Lambda2紫外-可见分光光度计（美国PE公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：KromasilC18色谱柱，250×4.6 mm，5 μ；流动相：磷酸盐缓冲液（0.05 mol/L磷酸二氢钾）—甲醇按照30∶70比例混合后，用磷酸调节pH值到3.0，每300 ml再加入十二烷基硫酸钠0.1 g即得；检测波长：215 nm；流速：1.0 ml/min。

2.2 系统适用性试验 在“2.1”条色谱条件下，各组分分离效果良好，分离度R=9.0，理论塔板数以萘普生钠计，不低于3000。

2.3 干扰试验 按处方比例称取辅料适量，以流动相配制成一定浓度的溶液，按上述色谱条件测定，可见辅料峰对测定无干扰。

2.4 标准曲线测定 分别精密称取萘普生钠和盐酸伪麻黄碱对照品约100.6、50.5 mg，置100 ml的量瓶中，加甲醇溶解，稀释至刻度，然后分别精密量取适量以甲醇稀释配制，得到萘普生钠和盐酸伪麻黄碱的系列浓度样品，各取10 μl进样，按“2.1”项下色谱条件以HPLC法测定。以对照品峰面积（A）为横坐标，对照品溶液浓度（C）为纵坐标，绘制标准曲线，结果萘普生钠和盐酸伪麻黄碱在质量浓度20.12～503.00 μg/ml和 10.10～252.50 μg/ml内呈较好的线性相关性。萘普生钠的回归方程为C=1.027×10-5A-14.633，r=0.99 9；盐酸伪麻黄碱的回归方程为C=6.133×10-5A-1.465，r=0.999 9。

2.5 最低检测限 参照中国药典2005年版二部附录XVIIIA中方法，以信噪比为3∶1的相应量确分别确定萘普生钠和盐酸伪麻黄碱的检测限，结果测得盐酸伪麻黄碱的最低检出量为0.6 ng，萘普生钠的最低检出量为0.11 ng。

2.6 精密度测定 配制萘普生钠约100 g/ml、盐酸伪麻黄碱约25 g/ml的对照品溶液，各取10 μl分别连续6次进样分析，记录峰面积，萘普生钠与盐酸伪麻黄碱平均值分别为11712306和421128，RSD分别为0.98%和1.17%，均<2.0%，符合要求。

2.7 稳定性试验 配制萘普生钠和盐酸伪麻黄碱浓度约为50、25 μg/ml的溶液，在室温下放置，分别于 0、2、4、6、8、12 h取样10 μl进HPLC分析，记录峰面积，2组分的含量测定结果与放置0 h时相比基本不变，萘普生钠与盐酸伪麻黄碱平均值分别为 4934262和 379547，RSD分别为 1.42%和1.08%，均<2.0%，符合要求。

2.8 回收率试验 精密称取萘普生钠、盐酸伪麻黄碱对照品适量，加甲醇制成每1 ml中约含萘普生钠、盐酸伪麻黄碱分别为110、60 μg的溶液作为对照品溶液。另精密称取萘普生钠样品适量，按照处方比例加入辅料，然后加甲醇配成约85、110、130 μg/ml的溶液各3份作为萘普生钠供试品溶液；取盐酸伪麻黄碱样品适量，按照处方比例加入辅料，然后加甲醇配制成约45、60、72 μg/ml的溶液各3份作为盐酸伪麻黄碱供试品溶液，分别取上述对照品溶液与供试品溶液各10 μl注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，按外标法计算回收率。结果见表1。

2.9 三批样品测定 取本品20粒，取内容物，精密称取适量 （约相当于盐酸伪麻黄碱60 mg，萘普生钠110 mg），置100 ml量瓶中，加甲醇振摇溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 ml，置10 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取减压干燥至恒重的盐酸伪麻黄碱对照品约60 mg，萘普生钠对照品约110 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度摇匀，精密量取1 ml，置10 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。结果见表2。

表 1 盐酸伪麻黄碱和萘普生钠含量测定回收率试验

表 2 三批样品的盐酸伪麻黄碱及萘普生钠含量（%）

3 讨 论

3.1 检测波长的选择 取盐酸伪麻黄碱和萘普生钠适量，分别以甲醇溶解，作紫外扫描，在紫外光谱吸收区域内，二者均以末端吸收为主，故将检测波长定为215 nm。

3.2 流动相的选择 在实验过程中，曾试用乙腈-磷酸盐缓冲液，甲醇-磷酸盐缓冲液等溶剂系统，并加入离子对试剂作比较，结果显示，使用乙腈-磷酸盐缓冲液系统虽结果灵敏，分离度好，但保留时间过长，故将流动相定为：磷酸盐缓冲液（0.05 mol/L磷酸二氢钾）-甲醇按照30∶70比例混合后，用磷酸调节pH值到3.0，每300 ml再加入十二烷基硫酸钠0.1 g。在调节pH值过程中，开始曾用2 mol/L磷酸调节，但因加入量较多，改变了流动相比例，导致测定结果产生变化，故改为用磷酸调节。在本条件下，两种组分的保留时间、峰形及分离度都较为理想，本方法操作简便，结果准确，可作为评价复方盐酸伪麻黄碱缓释胶囊质量的可靠方法。

[1]汤 光，李大魁.现代临床药物学[M].北京：化学工业出版社，2003.605.

[2]石方云，洪建衡.萘普生与泰诺林退热口服液退热疗效的对照观察[J].新疆医科大学学报，2002，25（1）：60.