青藤碱精制工艺的优化

臧玲玲，李永吉，孙 凌，郭玉岩，管庆霞，杨志欣，侯 佳

(黑龙江中医药大学药学院，哈尔滨 150040)

青风藤为防己科植物青藤和毛青藤的干燥藤茎，临床常用于治疗风湿、类风湿性关节炎及心率失常等［1－2］.药效物质基础为青藤碱，青藤碱的有效提取，直接影响青风藤的药效发挥，因此，本文通过对不同的提取纯化方法的比较，优选出青风藤的最佳精制工艺，为工艺放大生产提供参考，现将研究结果报道如下.

1 试药与仪器

青风藤药材(购自哈尔滨药材市场).青藤碱对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号0775—200105).甲醇(色谱纯，DIKMA TECHNOLOG INC)，实验所用其他试剂均为分析纯.

Waters高效液相色谱仪，含有在线脱气、高压四元梯度泵、恒温自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器(DAD)、Empower色谱工作站(美国);分析天平(Sartorius CP225D);酸度计(梅特勒－托利多DELTA 320).

2 实验方法

2.1 青风藤药材的提取方法

取400 g青风藤药材，用8倍量的70%乙醇，连续回流提取2次，每次1 h，合并提取液，滤过，滤液浓缩至250mL，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得.

2.2 青风藤药材精制方法优选

1)方法 1［3］:精密量取 30mL 药液蒸干，用2%盐酸25mL溶解，滤过，滤液加氨试液调pH值至10，用氯仿萃取2次，每次20mL，合并氯仿层，氯仿液蒸干，得青藤碱精提物.2)方法2:精密量取30mL药液蒸干，用2%盐酸25mL溶解，滤过，滤液加氨试液调pH值至10，用氯仿萃取2次，每次20mL，合并氯仿层;取氯仿萃取液，加2%盐酸水溶液萃取2次，每次40mL，收集盐酸水溶液层，加氨试液调pH值至10后，再加氯仿萃取2次，每次80mL，收集氯仿液，蒸干，得青藤碱精提物.3)方法3:精密量取30mL药液蒸干，用2%盐酸25mL溶解，滤过，滤液加氨试液调pH值至10，用氯仿萃取2次，每次20mL，合并氯仿层;取氯仿萃取液，加2%盐酸水溶液萃取2次，每次40mL，收集盐酸水溶液层，加氨试液调pH值至10后，再加氯仿萃取2次，每次80mL，收集氯仿液，再加2%盐酸水溶液萃取2次，每次160mL，收集盐酸水溶液层，加氨试液调pH值至10后，再加氯仿萃取2次，每次320mL，收集氯仿液，蒸干，得青藤碱精提物.

3 质量浓度测定

3.1 色谱条件

DIKMA Diamonsil ODS C18色谱柱(250×4.6 mm，5 μm);流动相为磷酸盐缓冲液(0.01 mol/L磷酸氢二钾溶液加1‰三乙胺，用磷酸调pH值至3.0)∶甲醇(80∶20);流速为 1.0mL/min;检测波长265 nm;柱温25℃:进样量10μL.理论塔板数按青藤碱计算应不低于2000.

3.2 对照品溶液制备

取干燥至恒重的青藤碱对照品2.82mg，精密称定，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得.

3.3 供试品溶液制备

精密吸取上述“2.2”项下的各方法精制样品适量.甲醇溶解，定容至1000mL量瓶中，滤过，进样.

3.4 系统适用性试验

精密吸取已制备好的对照品和“2.2.3”项下的样品，照“3.1”项下色谱条件，各进样 10μL，色谱图见图1.结果表明，样品与对照品溶液均在相同保留时间内出现青藤碱吸收峰，说明本试验条件下青藤碱峰与其他组分峰分离完全.

图1 青藤碱HPLC图谱

3.5 线性关系考察

取青藤碱对照品精密称定为4.46mg，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度作为储备液(质量浓度为 0.446mg/mL).精密吸取 1、2、7、8mL置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得质量浓度为 0.0446、0.0892、0.3122、0.3568mg/mL 的对照品溶液及质量浓度为0.446mg/mL的储备液，分别进样10μL，测定峰面积，以对照品质量浓度(C)对峰面积(A)进行线性回归，得回归方程为:Y=9E+06X+102803(R=0.9999).结果表明，青藤碱在0.0446～0.446mg/mL质量浓度范围内，线性关系良好.

3.6 进样精密度试验

精密吸取对照品溶液5份，按“3.2”项下条件测定，计算质量浓度及相对标准偏差.结果RSD=1.25%(n=5)，表明测定精密度良好.

3.7 稳定性试验

精密吸取按方法3项下条件制备溶液，分别放置 2、4、8、10、12 h，测定其峰面积，计算相对标准偏差.结果RSD=0.58%，表明样品在放置12 h内稳定.

3.8 加样回收率试验

精密称取对照品10.34mg，置10mL量瓶中，用甲醇溶解，作为储备液.精密移取储备液各1mL，分别置9个25mL量瓶中，分别称取按方法3制备下样品加甲醇溶解，定容至刻度，使体积分数成测定体积比的80%、100%、120%，各3份.进样测定，计算测得量及回收率，平均回收率为99.5%，RSD为0.45%.

3.9 青藤碱的百分含量和转移率的结果

分别称取青风藤药材，各5 g，按“2”项下方法平行制成供试品溶液各2份，测定样品中青藤碱的质量分数和转移率.结果见表1.

表1 青藤碱的质量分数和转移率的结果

4 讨论

本文参考相关文献［3］，单纯用氯仿萃取(方法1)，得到结果质量分数 35.38%，转移率11.32%，得到青藤碱的质量分数和转移率均较低，效果不佳;为了提高青藤碱的质量分数和转移率，笔者在原有工艺的基础上进行了改进和优化，选用在氯仿萃取基础上，增加盐酸水溶液的萃取(方法2)，得到结果质量分数76.05% ，转移率67.19%，结果有明显改善，但仍不能达到较纯精制;继续增加氯仿、盐酸水溶液的交替萃取(方法3)，得到结果质量分数91.36%，转移率79.78%，青藤碱的质量分数和转移率都有了较大的提高.结果表明，随着氯仿、盐酸水溶液交替萃取次数的增加，青藤碱的质量分数逐渐上升，转移率有所提高，因此，选用方法3为最佳的青藤碱精制工艺，该方法可行、可靠、可控，为青风藤及相关制剂的精制提供依据，为制药新工艺的推广和应用提供了科学方法.

采用高效液相色谱法建立了青风藤中青藤碱含量的测定方法，通过对方法的精密度、线性关系、回收率、稳定性等考察，验证本法精密、准确，为青藤碱的质量标准研究提供了参考依据.

［1］刘 强，周莉玲，李 锐.青藤碱的研究概况［J］.中草药，1997，28(4):247.

［2］中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典(Ⅰ部)［S］.北京:化学工业出版社，2005:135.

［3］刘超英，乔 明，范卫峰.青风藤中青藤碱的提取分离方法比较研究［J］.湖北中医学院学报，2005，7(1):49－50.