永州黄姜提取物抗肿瘤效果研究

罗四维，周秦

黄姜学名盾叶薯蓣（Dioscorea Zingiberensis C.H.Wright），为薯蓣科薯蓣属（Dioscrea.L）草质缠绕性藤本植物[1]。黄姜提取物中主要活性成分为薯蓣皂苷（Diosgenin），又称薯蓣皂素。研究表明，薯蓣皂苷具有溶血、降血脂、抗菌、消炎、脱敏、修复病变组织、刺激肝素细胞生长及促进胆汁分泌等作用[2]。近年来国内外学者对薯蓣皂苷作为甾体激素药物和甾体避孕药的主要中间体的研究较多，但对其抗肿瘤的效果研究甚少，特别是对湖南省黄姜主要产区永州出产的黄姜暂无系统研究。本文以永州的黄姜为原材料，以其提取物进行体外抗肿瘤的实验。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞系及原料 肺癌细胞系（A549）、人宫腔癌细胞系（HeLa）、口腔鳞状上皮癌细胞系（KB）、乳腺癌细胞系（MCF-7）、胆管癌细胞系（QBC）均购自于中南大学药学院；黄姜原料采自湖南永州。

1.1.2 实验仪器 SW-CJ-1FD 超净工作台购自苏州安泰；CO2培养箱购自北京绿源旺业科技有限公司；DG5031 酶标免疫检测仪购于上海京工实业有限公司。

1.2 方法

1.2.1 薯蓣皂素提取 将黄姜置于烘箱中，60℃烘干，粉碎后过 40 目筛，置于索氏提取器中 90℃连续提取 12 h，提取产物用 HPLC 检查含量后置入旋转蒸发仪中挥干待用。

1.2.2 体外抗肿瘤实验 采用四氮唑盐（MTT）还原法进行测定，提取所得物以二甲基亚砜（DMSO）溶解后用细胞培养液稀释成 10、15、20、25、30、35、40、45 μmol/L。

取贴壁生长良好的肿瘤细胞进行消化处理，调整细胞浓度为1×108个/L 接种于 96 孔培养板，每孔 100 μl，于CO2培养箱中培养 24 h，实验组分别加入以上浓度的提取液，另设对照组（不加药）和空白组（只有培养基），阳性药为5-氟尿嘧啶（5-fu），阳性药物配制成同样浓度，加入96 孔板中，每组重复 4 孔。培养 24 h，加入 MTT（5 g/L）。继续培养 4 h 后弃上清，每孔加入 100 ml 的 DMSO，避光振荡 10min，用全自动酶联免疫检测仪于 405 nm 处测定吸光度值，计算细胞存活率。公式如下：

细胞存活率（%）=（实验组 OD 值 － 阴性组 OD值）/（空白 OD 值 － 阴性组 OD 值）×100%

2 结果

经 MTT 法进行还原，使用酶标免疫仪对其 OD 值进行测定，并与抑制肿瘤常用药物 5-fu 进行对比，所得结果如表1～2 所示。

表1 不同浓度黄姜提取物对不同肿瘤细胞存活率影响

表2 不同浓度 5-fu 对不同肿瘤细胞存活率的影响

表3 中结果所示，在 A549、HeLa、KB、QBC 四种细胞中，黄姜提取物的 LC50 低于 5-fu 的 LC50 值，而在 MCF-7 细胞中黄姜提取物的 LC50 值高于 5-fu 的LC50 值。

表3 黄姜提取物与 5-fu 对不同肿瘤细胞半致死浓度（LC50）分析

3 讨论

黄姜作为生物甾体激素药物的报道较多，但作为抗肿瘤药物的报道较少。尤其是湖南永州为黄姜产区，经查证从未对黄姜的抗肿瘤效果进行过科学的研究。作者基于黄姜的还原特性，结合清除自由基、抗氧化的特性，对其抗肿瘤效果进行了研究。

结合参照物常规抗肿瘤药物 5-fu 结果所示，当地产黄姜具有较好的抑制肿瘤效果，除对 HeLa 细胞的 LC50 值有较大差异外，其余四种细胞的 LC50 值比较接近。因此可以认为，黄姜提取物的抑制肿瘤效果接近 5-fu。但黄姜提取物为天然产物，对机体的伤害程度与 5-fu 相比较小，副作用更低。因此黄姜提取物作为抗肿瘤的药物，具有进一步开发与综合利用价值，拥有较高的经济价值与实用价值。

[1]Dong JZ, Yi ZL, Jiang JX.A summary of researches on Dioscorea Zingiberensis C.H.Wright.Hubei Agric Sci, 2004(2):84-88.(in Chinese)董静洲, 易自力, 蒋建雄.盾叶薯蓣综合研究概况.湖北农业科学,2004(2):84-88.

[2]Yang RF, Pan W, Zhang G, et al.The effect of dioscin on serum lipid level in patients with hyperlipemia.Chin J Cardiovasc Rev, 2005,3(10):776-777.(in Chinese)杨瑞丰, 潘伟, 张戈, 等.薯蓣皂甙对血脂紊乱治疗的临床研究.中国心血管病研究杂志, 2005, 3(10):776-777.