习惯性流产患者绒毛组织中IL-6的表达及意义

励银智 宋月轻 王健

习惯性流产(recurrent spontaneous abortion，RSA)是指连续发生两次或两次以上的自然流产，其病因复杂，50%的患者病因不明。Th1/Th2细胞因子学说已成为近年研究热点。Th2细胞因子诱导母体产生免疫耐受，有利于妊娠的建立及维持，本研究通过免疫组化方法检测白介素-6(IL-6)在正常早孕及习惯性流产患者绒毛组织中IL-6的表达，探讨的表达情况与习惯性流产发生的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 研究组:为2009年10月至2010年10月就诊于门诊的习惯性流产患者17例，平均年龄(24.4±2.0)岁;平均孕(7.4±2.6)周;流产2次10例，流产3次4例，3次以上3例;除外染色体、解剖、内分泌异常、感染及内生殖器解剖异常等因素，经临床病史、体征、B超、血人绒毛膜促性腺激素(HCG)检测确定已经发生难免流产或稽留流产者。对照组:为同期在门诊就诊的要求进行人工流产的正常女性20例，平均年龄(22.8 ±2.6)岁;平均孕(7.0 ±1.9)周;B 超示有胚胎心血管搏动，无不良妊娠史。2组一般资料有均衡性。

1.2 主要试剂来源 试剂一抗兔抗人IL-6多克隆抗体购自武汉博士得生物工程公司，免疫组化SP试剂盒，DAB显色剂均购自北京中山生物技术有限公司。

1.3 标本采集及制备 2组于人工流产术或清宫术后留取绒毛组织，0.9%氯化钠溶液冲洗干净后，用10%中性甲醛40℃固定24 h以上，进行常规脱水处理后，二甲苯透明，浸腊，制成石蜡包块。

1.4 免疫组化测定绒毛组织中IL-6的表达，严格按照SP试剂盒说明进行染色。用已知阳性标本做阳性对照，用PBS代替一抗做阴性对照。

1.5 实验结果判定 以细胞浆内出现棕黄色颗粒视为阳性表达。阳性表达水平以综合计分法进行半定量分析:(1)每张切片在400倍镜下随机选取5个视野，计数阳性细胞总数的百分比并计分:0分=无阳性细胞;1分=阳性细胞占1%～25%;2分=阳性细胞占26%～49%;3分=阳性细胞占≥50%。(2)根据细胞的着色强度进行强度计分:0分=无着色，与背景色一致;1分=浅棕色;2分=棕褐色;3分=深棕褐色。(3)阳性细胞百分比记分和强度记分相加，两者之和作为最后检测结果:0～1分为阴性;2分为(+);3～4分为(++);5～6分为(+++)。

1.6 统计学分析 应用SPSS 11.5统计软件，等级资料比较采用Ridit分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

IL-6在对照组绒毛组织中均呈阳性表达，主要定位于绒毛滋养细胞胞浆染色较明显，研究组绒毛组织中IL-6染色强度较对照组明显减弱，差异有统计学意义(u=4.4714，P ＜0.01)。

表1 两组IL-6在绒毛组织中表达结果的比较 例

3 讨论

在妊娠过程中，母体与胎儿之间存在着复杂而特殊的关系。生殖免疫学观点认为正常妊娠有赖于免疫耐受，主要反应在母胎界面-蜕膜免疫反应。母胎界面免疫微环境由免疫细胞及其分泌的细胞因子组成，按其功能细胞因子分为两大类，TH1型细胞因子INF-γ、IL-2、IL-12等可直接损害胎盘或激活NK细胞等细胞毒作用，促进对胚胎的排斥而对妊娠有害，TH2型因子IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等抑制Th1应答，促进免疫耐受而有利于妊娠的建立及维持。正常妊娠是以Th2细胞因子(IL-4，IL-5，IL-6，IL-10 等)为主的生理现象。Bennett等［1］研究亦发现Th2型细胞因子IL-6、IL-10mRNA在早孕绒毛组织中均有中到高水平表达。居中亮等［2］研究结果显示正常妊娠女性的Th2型细胞因子分泌增多，Th1型细胞因子分泌减少。

IL-6作为Th2型细胞因子在母胎界面中，特别是在胚胎植入期表达占优势，下调细胞介导的免疫反应，抑制母体排斥反应，促进黏附分子生成，促进胚胎植入并有利于母胎耐受及维持妊娠。在正常妊娠时，子宫内膜间质细胞和绒毛滋养细胞均可产生IL-6参与胚胎的着床过程，对胚胎植入起到重要的调节作用。已有研究表明，IL-6可能参与激活母体界面早期蜕膜反应及妊娠维持，激活基质金属蛋白酶(MMP)-2，9，溶解了子宫内膜基质胶原纤维，促进囊胚着床，并通过机动蛋白细肌丝重排及内皮细胞形状的改变使通透性增加，而增加蛋白质的转运，从而促进囊胚发育［3］。Raghupathy等［4］研究发现正常妊娠妇女Th2细胞因子IL-6、IL-10明显高于反复自然流产，而反复自然流产Th1细胞因子IFN-C明显高于正常妊娠者。

我们采用免疫组化染色测定IL-6在正常早孕绒毛组织中均有较强阳性表达，亦提示了IL-6对促进胚胎植入及妊娠维持起着重要作用。许多作者研究发现:习惯性流产患者Th2细胞因子(IL-4，-6和-10)明显降低，Th1细胞因子明显升高，Th1细胞因子与Th2细胞因子间比例失调［2，5，6］。我们的研究结果亦显示习惯性流产组绒毛组织中IL-6染色强度较正常早孕组明显减弱。这与郭畅等［7］研究结果一致。

综上所述，依据已有的研究和我们的实验结果，我们推测IL-6作为Th2细胞因子可能通过在绒毛组织中发挥作用，从而引起母胎界面免疫微环境的改变，诱导母胎界面Th1/Th2平衡向Th1偏移，从而使胚胎遭受免疫攻击导致RSA的发生。但两型因子间的平衡受多种因素的调控，人们能否通过加入TH2型细胞因子或抗TH1型因子及利用各种调节机制纠正RSA患者的失衡状态，用于临床治疗，还有待进一步探索。

1 Bennett WA，Lagoo-Deenadayalan S，Whitworth NS，et al.First-trimester human chorionic villi express both immunoregulatory and inflammatory cytokines:a role for interleukin-10 in regulating the cytokine network of pregnancy.Am J Reprod Immunol，1999，41:70.

2 居中亮，范丽安，陆丽华，等.T细胞辅助因子与正常妊娠及习惯性流产关系的初步探讨.中华妇产科杂志，2000，35:473.

3 Schafer-Somis.Cytokines during early pregnancy of mammals:a review.Anim Reprod Sci，2003，75:73.

4 Raghupathy R，Makhseed M，Azizieh F，et al.Cytokine production by maternal lymphocytes during nomal human pregnancy and in unexplained recurrent spontaneous abortion.Hnm Reprod，2000，15:713.

5 Hossein H，Mahroo M，Abbas A，et al.Cytokine production by peripheral blood mononuclear cells in recurrent miscarriage.Cytokine，2004，28:83.6 Daher S，de-Arruda-Geraldes-Denardi K，Blotta MH，et al.Cytokines in recurrent pregnancy loss.J Reprod Immunol，2004，62:151.

7 郭畅，韩宝生，陆冬梅，等.IL-2受体和IL-6在复发性自然流产患者胚胎组织中的表达.中国妇幼保健.2009，27:3873.