添加维生素B12对西门塔尔牛冷冻精液品质影响的初步观察

2011-06-06郭学东张丽娟冯立国

黑龙江动物繁殖 2011年6期

关键词：顶体稀释液公牛

郭学东,张丽娟,冯立国

(吉林省梨树县畜牧总站 136500)

添加维生素B12对西门塔尔牛冷冻精液品质影响的初步观察

郭学东,张丽娟,冯立国

(吉林省梨树县畜牧总站 136500)

为观察稀释液中添加VB12对西门塔尔牛精液品质的影响，进行了对比试验。结果表明:添加VB12的试验组冻精解冻后精子活力、顶体完整率比对照组有极显著提高 ( P ＜ 0.01)，精子畸形率与GOT活性均明显下降，精子存活时间延长。说明VB12在牛精液冷冻中对牛精子形态结构具有一定保护作用。

牛精液；冷冻；维生素B12；精子质量

自20世纪50年代初，牛精液冷冻技术由Smith和Polge研究成功后，已在全世界范围内应用，并进入了生产过程。据有关报道，VB12可以提高精子活力和受胎率[1]。本试验在牛的精液冷冻稀释液中添加VB12，观察解冻后牛精子某些生理生化指标的变化,以期为生产实践提供参考。

1 材料和方法

1.1 稀释液的配制

用天平称取Tris(三羟甲基氨基甲烷)12.12 g、葡萄糖5.5 g、柠檬酸6.76 g，放入1000 mL的三角烧杯中，加入重蒸馏水344.12 g，待充分溶解后用滤纸(用酒精灯烧掉绒毛)过滤后，放入水浴锅中煮沸消毒30 min，加入甘油32 mL，然后放入4～5℃的冰箱中。

在采精前取出稀释液，每500 mL加入青霉素80万单位、链霉素50万单位，然后放入水浴锅中加温至32℃，加入卵黄100 mL充分振荡，使卵黄充分溶解。然后加入河南润弘生物制药厂生产的VB12注射液2.5 mL(1 ml含VB120.5 mg,其化学成份含有微量元素钴)为试验稀释液。

对照组稀释液除不含VB12外,其他成分及剂量均与试验组稀释液相同。

1.2 精液的冷冻

试验所用公牛为四平市兴牛牧业服务有限公司种公牛站中挑选的相近年龄和体重的4头西门塔尔种公牛(XM09297、XM09223、XM09315、XM09139)。用假阴道采精，原精活力都在0.6以上。本实验用20个采精日完成。

将1次采精取得的精液分为2等份，1份用试验组稀释液稀释，另一份用对照组稀释液稀释，稀释剂量两组相同。经2 h缓慢降温至5℃后，放入5℃平衡柜中平衡2 h，然后在冷冻仪中冷冻。

1.3 冷冻精液的解冻

预先把水浴锅水温加热至38～40℃，细管冻精用镊子分别取出迅速放入盛有38℃水的容器中解冻，解冻时间为10～15 s，待溶解后立即取出，用吸水纸或纱布擦干水滴，再用细管剪剪去超声波封口端1 cm，滴一小滴精液于显微镜载玻片上镜检即可。

1.4 精液品质测定

精子活力测定：采用常规方法, 按百分制评定精子活力。每个样品重复2次，取其平均数。

精子顶体完整率和畸形率的测定：每个样品用姬姆萨染色法涂片2张，每张在油镜下分别数500个精子，计算顶体完整率和畸形率。

GOT 活性的测定：精液的样品经1500 r/min离心5 min，取其精清按常规方法[2]测定GOT(谷氨酸草酰乙酸转氨酶)活性。

精子存活时间测定：解冻后的精液放在39℃恒温箱中，定时检查精子活力，直至精子全部死亡为止。

2 结果与分析

由表1可以看出，试验组比对照组精子活力有极显著提高(P＜0.01)，顶体完整率有极显著提高(P＜0.01)；精子畸形率和GOT活性均明显下降，精子存活时间延长。试验结果表明，在牛的精液冷冻中添加维生素稀释液对精子具有一定保护作用。

试验组冻精解冻后的精子形态结构损伤程度较对照组小，GOT外渗量少，精子活力高。因为精子前进运动主要动力来自尾部，GOT是精子尾部线粒体上的主要酶之一，当精子尾部受到损伤时，线粒体上GOT向精清中释放，而使精清中酶的活性增强，但精子活力却减弱。目前只知道VB12是一种辅酶，含有微量元素钴，具有促进血细胞成熟，参与机体代谢作用，是否与它含的微量元素钴有关，还需要进一步探索。

试验所用公牛头数较少，只是初步结果，其它一些影响因素还有待进一步深入探讨。