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唾液生长激素释放肽在腮腺、颌下腺、舌下腺中的表达

2011-06-05

海军医学杂志 2011年6期
关键词:颌下腺唾液腺性腺

马 颖

自1999年唾液生长激素释放肽(Ghrelin)被发现以来[1],许多研究表明Ghrelin主要由胃黏膜X/A样细胞分泌,其次来源于肠道、胰、肾、胎盘、垂体及下丘脑。而最新的研究显示,在人的唾液中也有Ghrelin的表达[2],但是唾液 Ghrelin的来源尚不明了。唾液腺组织中是否有Ghrelin存在尚有待了解。本研究拟采用免疫组织化学的方法检测Ghrelin在腮腺、颌下腺、舌下腺中的表达,探讨唾液腺与唾液Ghrelin表达的关系。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 兔抗人Ghrelin抗体(美国Phoenix公司),3%过氧化氢,正常羊血清封闭液(北京中山公司),DAB显色液(北京中山公司),苏木精稀释液,二抗原液(辣根过氧化物酶标记的兔Ig抗体,北京中山公司)。

1.2 标本制取 选择口腔颌面部恶性肿瘤患者颈部检查淋巴结阴性、行选择性颈清扫、病理证实为正常的颌下腺标本7例,腮腺标本3例,以及口底肿物扩大切除时舌下腺标本3例,切取部分腺体组织作为检测腺体Ghrelin表达的标本。

1.3 免疫组织化学方法 (1)石蜡切片脱蜡至水,将切片放于60℃烧烤箱烘烤20 min以防止掉片。取出后马上放入二甲苯中进行脱蜡。二甲苯10 min,无水乙醇和95%、85%、80%、70%乙醇各5 min,水洗5 min。(2)3%H2O2室温孵育 5~10 min,以消除内源性过氧化物酶的活性。(3)蒸馏水冲洗,PBS浸泡5 min。(4)正常山羊血清封闭,室温孵育20 min,去血清,勿洗,滴加适当比例稀释的一抗,37℃孵育2 h或4℃过夜。(5)PBS冲洗3次,3 min/次。(6)滴加适当比例稀释的二抗,室温孵育20 min。(7)PBS冲洗3次,3 min/次。(8)DAB显色。(9)苏木精复染,清水冲洗5~10 min。(10)脱水透明,封片。(11)用图像分析仪进行细胞学定位,观察Ghrelin在唾液腺中的表达。

2 结果

在腮腺、颌下腺及舌下腺染色的标本切片中,可以明显观察到腺体部分区域显示深棕色颗粒(图1~3)。正常腮腺的切片中可见Ghrelin在纹管细胞浆呈强阳性表达,浆液性腺胞胞浆有少量表达,见图1。颌下腺的切片中可见:Ghrelin在纹管细胞呈强阳性表达,浆液性腺细胞浆少量表达,黏液性腺胞胞浆阴性表达,见图2。舌下腺的切片中可见Ghrelin纹状管和闰管细胞呈强阳性表达,黏液性腺细胞胞浆呈阴性表达,见图3。阳性显色主要位于导管细胞的胞浆,且纹管和闰管细胞的胞浆均可观察到Ghrelin阳性表达,浆液性腺胞细胞的胞浆中有少量存在阳性表达,而黏液性腺胞胞浆则无Ghrelin的表达。上述3大腺体均有Ghrelin阳性表达,不同部位未见明显差异。

图1 Ghrelin在正常腮腺中的表达(DAB×200)

3 讨论

Ghrelin主要由胃黏膜X/A样细胞分泌,其次来源于肠道、胰、肾、胎盘、垂体及下丘脑等部位。在胃肠道中,胃底部的Ghrelin含量最高,其次为十二指肠和回肠,结肠最低。血浆和组织中的Ghrelin含量不同,正常人血浆中Ghrelin的浓度100~120 pmol/L,胃和小肠中的浓度为肾的140倍,内肾组织中的浓度又高于血浆浓度数倍[3-4],提示这些组织可能通过自分泌和旁分泌在局部发挥作用。本研究通过免疫组织化学的方法,观察到在正常唾液腺组织中均有Ghrelin表达,主要分布部位在导管细胞的胞浆,浆液性腺胞胞浆也有微弱表达,而黏液性腺胞无表达。

唾液腺组织不仅是外分泌器官,也具有内分泌功能。己知唾液腺合成分泌入血的肽类物质达30种以上,常见的激素样物质或调节肽有表皮生长因子、神经生长因子、腮腺激素、高血糖素、胃泌素、紧张素、促红细胞生成素、心房肽(心钠素)、大活动蛋白、S-100蛋白、神经元特异丙烯醇化酶、抑生长素、突触泡蛋白、降钙素等。本研究结果提示,唾液腺组织可以合成、分泌Ghrelin,唾液腺是除肠道、胰、胃、肾、胎盘、垂体及下丘脑等部位以外的又一个Ghrelin分泌器官,唾液中的Ghrelin可能来自唾液腺的组织。

虽然多数内分泌多肽可由不同的唾液腺合成、存储、分泌,但绝大多数分泌入血的肽类是由颌下腺合成分泌,舌下腺也有类似的功能。只有少数动物的腮腺导管系统中可见到某些肽类,如猪的腮腺可合成高血糖素和胃泌素,而狗的腮腺可合成胃泌素。本研究中,腮腺、颌下腺及舌下腺均有明显的Ghrelin表达,其间无明显差异,说明这3大唾液腺均可合成和分泌Ghrelin。

唾液腺内分泌物质的合成几乎全部在导管系统。导管系统的颗粒导管细胞及纹管细胞是合成并储存这些多肽物质的主要场所。人类唾液腺内没有颗粒导管系统,因而内分泌物质可能会存在于纹管细胞内。本研究结果显示,Ghrelin在纹管及闰管细胞均呈强阳性表达,提示人体唾液腺组织合成和分泌Ghrelin的主要部位在纹管细胞和闰管细胞。

Ghrelin分泌机制尚不清楚。唾液腺组织中Ghrelin的表达与唾液中Ghrelin的浓度有何关系,以及进食前后唾液腺组织中的Ghrelin表达是否有差异尚待进一步研究。

[1] Date Y,KojimaM,Hosoda H,etal.Ghrelin,a novelgrowth hormone-releasin G acylated peptide,is synthesized in a distinctendocrine cell type in the gastrointestinal tractsof ratsand humans[J].Endocrinology,2000,141:4255-4261.

[2] Teber F,Grau M,Mena MP,etal.Epidermal growth factor secreted from submandibular salivary glands interfereswith the lipolytic effect of adrenaline in mice[J].Endocrinology,2000,141:876-882.

[3] Rindi G,Necchi V,Savio A,et al.Characterrisation of gastric Ghrelin cells inman and othermammals:syudies in adultand fetal tissues[J].Histochem Cell Biol,2002,117:511 -519.

[4] Matsumoto M,Hosoda H,Kitajima Y,etal.Structureactivity relationship ofGhrelin:pharmacological study ofGhrelin peptides[J].Biochem Biophys Res Commun,2001,287:142-146.

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