痛风舒浸膏粉对大鼠痛风性关节炎的治疗作用

曾祥永，周锡国，裴太蓉

1.重庆市南岸区中医院骨科，重庆 400060；2.重庆市中药研究院，重庆 400065

痛风性关节炎是一种常见的代谢性疾病，临床以关节红、肿、热、痛，血清尿酸盐增高为特点。近年来，随着生活水平的提高，发病率有明显增加，已成为当今世界中老年男性的常见病。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 雄性Wistar大鼠40只，体重140～160 g。普通饲料喂养，自由饮水。

1.1.2 主要试剂 痛风舒浸膏粉（1 g浸膏粉相当于5 g生药；批号：000306，由重庆南岸区中医院骨科提供）临用前用生理盐水配制成所需浓度；双氯芬酸钠肠溶片，25mg/片，由大连百利天华制药有限公司生产。5-羟色胺 （5-HT）、钾离子（K+）、多巴胺（DA）、去甲肾上腺素（NE）标准品及尿酸钠结晶均购自Sigma公司。

1.2 实验方法

1.2.1 尿酸钠溶液的制备 取194 ml蒸馏水加6 ml NaOH（1 mol/L）。 煮沸后加 1 g尿酸，用 1 mol/L HCl，调 pH 至 7.2，搅拌冷却，贮存于4℃冰箱中24 h，去上清液，用滤纸将沉淀物水分吸干，干燥即可得尿酸钠结晶。取1 250 mg尿酸钠结晶，加入45 ml生理盐水，同时加入5 ml吐温80，加热搅拌，配成50 ml尿酸钠溶液备用。

1.2.2 模型制作 参照Coderre等[1]的经典造模方法略作改进。用6号注射针在受试大鼠右侧踝关节背侧从45°方向插入胫骨肌肌腱内侧，将0.2 ml尿酸钠溶液（浓度为2.5 g/100 ml）注入踝关节腔。正常组动物用生理盐水代替尿酸钠溶液。

1.2.3 动物分组 将动物随机分成4组（10只/组）：正常组、模型组、双氯芬酸组、痛风舒浸膏粉组。各组连续灌胃给药5 d，每日1次，正常组和模型组给予生理盐水灌胃，双氯芬酸组给予双氯芬酸3 mg/kg，痛风舒浸膏粉组给予痛风舒浸膏粉1.2 g/kg（为60 kg体重成人临床日用量的4倍）。给药体积均为1 ml/100 g体重。

1.3 观察指标

1.3.1 关节肿胀度测量 各组大鼠在造模后3 h（用药前），及用药后5 d，分别在受试踝关节相同部位，用无弹性软尺测量其周径，观察造模大鼠治疗前后各组受试关节周径的变化。

1.3.2 受试关节关节腔滑液的涂片观察 各组大鼠用药5 d后处死，取受试踝关节，清洗干净，用手术刀剖开关节腔，取关节滑液涂于载玻片上，瑞氏染色，显微镜下观察各组大鼠关节滑液的白细胞，观察5个100倍视野，计算白细胞平均数。

1.3.3 致痛物质K+、DA、5-HT含量的测定 各组大鼠处死后，取受试关节周围软组织，制成匀浆，比色法检测K+，荧光分光光度法检测DA、5-HT的含量。

1.4 统计学处理

数据以均数±标准差（x±s）表示，采用SPSS 13.0统计软件进行方差分析及t检验，各组数据行单因素方差分析，组间变量行两两比较的SNK法分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 药物对关节周径的影响

见表1。

表1 用药前后受试关节周径的变化（x±s，cm）

由表1可知，用药前正常组大鼠关节周径显著小于其他各组（P＜0.05），其他各组间无明显差异（P＞0.05）。 用药后正常组大鼠关节周径仍显著小于其他各组（P＜0.05），模型组关节周径显著大于双氯芬酸组和痛风舒浸膏粉组（P＜0.05）。正常组和模型组用药前后关节周径无明显差异（P＞0.05），双氯芬酸组和痛风舒浸膏粉组用药后关节周径缩小（P＜0.05）。

2.2 药物对受试关节滑液涂片白细胞计数的影响

见表2。

表2 各组治疗后关节滑液中白细胞计数（x±s，个/HP）

由表2可知，与正常组比较，其他各组关节滑液中白细胞数均有显著升高（P＜0.05）。与模型组比较，双氯芬酸组和痛风舒浸膏粉组治疗后关节滑液中白细胞数均有显著降低（P＜0.05），而双氯芬酸组和痛风舒浸膏粉组间无明显差异（P＞0.05）。

2.3 关节周围软组织中疼痛介质的含量

见表3。由表3可知，模型组受试关节周围软组织中致痛物质 K＋、DA、5-HT 的含量均显著高于其他三组（P＜0.05），氯芬酸组和痛风舒浸膏粉组受试关节周围软组织中K＋含量显著高于正常组（P＜0.05）。

3 讨论

大量研究表明，痛风性关节炎是炎症介质尿酸钠沉积于局部关节组织引起的炎症反应[1-3]。故直接注射尿酸钠溶液于模型动物的关节腔内造成痛风性关节炎是最直接的方法。本实验采用Coderre等[1]设计的尿酸钠局部关节注射的经典造模方法，采用0.2 ml尿酸钠溶液注入大鼠右侧踝关节腔造成急性痛风性关节炎模型，观察到治疗前正常组大鼠受试关节周径显著小于其他各组（P＜0.05），说明痛风性关节炎造模成功。本方法具有操作简便、成功率高的特点。

表3 受试关节周围软组织中疼痛介质的含量（x±s）

痛风性关节炎是因体内嘌呤代谢物紊乱，血中尿酸合成增多和（或）排出减少致血中尿酸浓度增高，尿酸钠针状微结晶体沉积在关节囊及其周围组织所致。祖国医学认为痛风属风寒湿三气杂致，后期久病入络，瘀血凝滞，关节肥厚，活动受限[4]。中医治疗在急性期以清热利湿、祛风通络为主，后期治疗除利湿通络外，佐以活血化瘀[5]。

痛风舒浸膏粉是由牛膝、忍冬藤、黄柏、赤芍等成分组成的中药复方制剂，具有利尿、改善血瘀模型大鼠的血液黏滞性及活血化瘀的作用。本实验研究其对痛风性关节炎的治疗作用及机制。实验结果显示痛风舒浸膏粉能明显缩小受试关节周径，减少关节滑液中白细胞数量，说明痛风舒浸膏粉能抑制尿酸钠所致大鼠关节肿胀和局部炎症反应。

关节疼痛是痛风性关节炎的主要表现。引起痛风关节疼痛的内源性致痛物质主要有：无机离子，如K＋、H＋等；某些单胺类神经递质，如5-HT、NE、组织胺等；肽类，如P物质、前列腺素、缓激肽等。这些物质在体内产生过多，通过刺激局部感受神经末梢外周感受器产生很强的致痛效应。本实验显示造模后受试关节周围软组织中K＋、DA、5-HT浓度均明显升高，而应用痛风舒浸膏粉能明显降低K＋、DA、5-HT的浓度，说明痛风舒浸膏粉对急性痛风性关节炎具有镇痛的作用。

[1]Coderre TJ,Wall PD.Ankle joint urate arthritis(AJUA)in rats:an alternative animal model of arthritis to that produced by Freund's adjuvant[J].Pain,1987,28(12):379-393.

[2]时乐,徐立.痛风性关节炎动物模型的研究现状与展望[J].中国实验动物学报,2006,14(1):71-74.

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[4]张莉梅,李佩臣.痛风性关节炎中医治疗新进展[J].中医药信息,2000,17(5):16-17.

[5]杨保林,丁岗.痛风性关节炎中医论治浅析[J].中国中医药现代远程教育,2010,8(8):201-202.