铁氰化钾比色法测定小儿生血糖浆中亚铁离子含量

2011-06-01宗海燕吕勤薛顺国

医药导报 2011年8期

宗海燕，吕勤，薛顺国

(1.华中科技大学同济医学院继续教育部，武汉 430030;2.武汉市江岸区二七社区卫生服务中心，430012;3.湖北省襄阳市药品检验所，441021)

小儿生血糖浆收入《部颁中药成方制剂》第14册，标准编号WS3-B-2654-97，功能主治为健脾养胃、补血生津，用于小儿缺铁性贫血和营养不良性贫血。该药的标准中无含量测定项。亚铁离子(Fe2+)测定有铈量法［1］和邻二氮菲比色法［2］。由于小儿生血糖浆中含有中药成分，干扰铈量法测定，故有学者采用邻二氮菲比色法测定小儿生血糖浆中Fe2+的含量。因底色干扰较大(A=0.083)，重复性差，笔者在本实验中采用Fe2+与铁氰化钾生成藤氏兰，在700 nm波长处测定吸光度，消除了底色干扰，收到良好效果。

1 仪器与试药

UV-1200紫外分光光度计(北京瑞利仪器公司)，硫酸亚铁对照品(中国药品生物制品检定所，批号:111613-200301)，小儿生血糖浆 (珠海正太制药有限公司，批号:20060801，20060802，20060803)，铁氰化钾、硫酸等均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 测定波长的确定取硫酸亚铁对照品适量，精密称定，加水制成每毫升含硫酸亚铁0.12 mg的溶液。精密量取对照品溶液5 mL置于25 mL棕色量瓶，加0.5 mg· mL-1铁氰化钾溶液2 mL，稀硫酸溶液4 mL，加水稀释至刻度，摇匀，在暗处放置30 min;以相应的试剂为空白。照紫外-可见分光光度法(《中华人民共和国药典》2010年版附录ⅣA)，在400～800 nm波长范围内测定吸光度，结果在700 nm波长处有最大吸收。

2.2 阴性对照实验阴性样品的制备:除硫酸亚铁外按小儿生血糖浆处方制备。测定方法:取阴性样品5 mL，置25 mL棕色量瓶中，加0.5 mg· mL-1铁氰化钾溶液2 mL，稀硫酸溶液4 mL，加水稀释至刻度，摇匀，在暗处放置30 min;以相应的试剂为空白。照紫外-可见分光光度法(《中华人民共和国药典》2010年版附录ⅣA)，在400～800 nm波长范围内测定吸光度。结果阴性对照试液在700 nm波长处吸光度为0.003，几乎无干扰。

2.3 显色剂用量对吸光度的影响精密量取对照品溶液 5mL，置 25mL棕色量瓶中，分别加0.5 mg·mL-1铁氰化钾溶液 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分别加稀硫酸溶液4 mL，加水稀释至刻度，摇匀，在暗处放置30 min;以相应的试剂为空白。照紫外-可见分光光度法(《中华人民共和国药典》2010年版二部附录ⅣA)，在700 nm波长处测定吸光度。结果显示，随着显色剂用量的增加，吸光度亦随之增加，当显色剂用量在4.0 mL时吸光度最大，故显色剂的用量选择4.0 mL。

2.4 显示时间对吸光度的影响精密量取对照品溶液5 mL，置25 mL棕色量瓶中，加0.5 mg·mL-1铁氰化钾溶和稀硫酸溶液各4 mL，以水稀释至刻度，摇匀，在暗处放置10～120 min;以相应的试剂为空白。照紫外-可见分光光度法(《中华人民共和国药典》2010年版二部附录ⅣA)，在700 nm波长处测定吸光度。结果显示的时间在10～30 min，随着时间的延长吸光度增加，30～120 min吸光度几乎不随时间改变，故显色时间选为30 min。

2.5 酸度对吸光度的影响精密量取对照品溶液5 mL，置25 mL棕色量瓶中，加0.5 mg·mL-1铁氰化钾溶液 4 mL，分别加稀硫酸溶液 0.0，0.1，0.3，0.5，0.7，0.9，1.0，2.0，3.0，4.0 mL，加水稀释至刻度，摇匀，在暗处放置30 min;以相应的试剂为空白。照紫外-可见分光光度法(《中华人民共和国药典》2010年版二部附录ⅣA)，在700 nm波长处测定吸光度。结果显示，当加稀硫酸的量为0.3 mL时，吸光度最大，故选择酸度为0.3 mL。

2.6 含量测定方法

2.6.1 对照品溶液的制备取硫酸亚铁对照品适量，精密称定，加水制成每毫升含硫酸亚铁0.12 mg的溶液。

2.6.2 供试品溶液的制备精密量取本品5 mL，置于500 mL棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。

2.6.3 测定法精密量取对照品溶液和供试品溶液各 5mL，分别置于 25mL棕色量瓶中，加0.5 mg·mL-1铁氰化钾溶液 4 mL，稀硫酸溶液0.3 mL，加水稀释至刻度，摇匀，在暗处放置30 min，以相应的试剂为空白。照紫外-可见分光光度法(《中华人民共和国药典》2010年版二部附录ⅣA)，在700 nm波长处测定吸光度。

2.7 加样回收率实验精密量取本品2 mL，按1∶1加入硫酸亚铁对照品溶液，照含量测定项下操作，测定硫酸亚铁的含量，计算回收率，结果见表1。平均加样回收率100.2%，RSD=0.39%。

表1 硫酸亚铁加样回收率实验结果 mg

2.8 重复性实验精密量取本品5 mL，照含量测定项下操作，取6份测其吸光度，结果显示平均吸光度为0.680，RSD=0.26%，说明精密度符合要求。

2.9 稳定性取含量测定项下的样品溶液，隔一定时间测一次吸光度，观察其溶液的稳定性，结果显示样品溶液在6 h内稳定。

2.10 线性范围考察精密称取硫酸亚铁对照品，用水制成每毫升含硫酸亚铁12 mg的溶液，取此溶液3.00，4.00，5.00，6.00，7.00，8.00 mL，照含量测定项下操作，结果本品在50.64～135.04 μg·mL-1浓度范围内呈线性。回归方程为:C=5.585 6A+0.001 6，r=0.999 8(n=6)。

2.11 样品的测试结果按样品照含量测定方法，对珠海正太制药有限公司生产的小儿生血糖浆进行检测，批号为 20060801，20060802，20060803 的样品，硫酸亚铁含量分别为 12.54，12.48，12.44 mg·mL-1，均符合测定要求。