复方罗红霉素片多剂量给药在健康志愿者体内的药动学

任秀华，申玲玲，向道春，刘宇，陈倩，张冬林，方淑贤，刘东，杜光

(华中科技大学同济医学院附属同济医院药学部，武汉 430030)

罗红霉素是半合成、长效、对酸稳定的大环内酯类抗菌药物，可有效杀死引起呼吸道感染的各种致病菌;氨溴索为黏痰溶解药，是目前临床上最有效、安全的镇咳祛痰药，能使黏液溶解、促进肺表面活性物质合成及激活黏液纤毛痰净化等功能，尚有降低痰液与纤毛的黏着力，使痰液易于咳出的作用，可有效缓解呼吸道疾病的临床症状，还可增加抗菌药物在肺组织及其分泌物中的浓度，提高抗菌疗效。临床上常将两种药物合用。复方罗红霉素片为罗红霉素和氨溴索组成的复方制剂。笔者曾研究了单剂量给予复方罗红霉素片体内药动学特征，分析复方罗红霉素片与罗红霉素合用氨溴索片相比，主要药动学参数无明显差异。为进一步了解多剂量给予复方罗红霉素片后两主药的药动学性质，笔者在本试验中采用随机对照平行试验的方法，测定健康受试者分别多次口服试验药复方罗红霉素片与市售对照药罗红霉素片加氨溴索片后不同时间血浆罗红霉素与氨溴索的浓度，分别评价罗红霉素与氨溴索药动学参数的差异，为临床应用复方罗红霉素片提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 受试者 24例健康受试者，男女各半。年龄20～26岁，平均(22.00±1.44)岁;身高155～176 cm，平均(167.00±6.68)cm;体质量 48～70 kg，平均(59.00±6.15)kg。受试者肝肾功能和血、尿常规及心电图均正常，皮肤变态反应试验阴性。试验前3个月未献血或作为受试者被采样，近2周内未服用过任何药物，无药物致变态反应史和烟酒嗜好。签署知情同意书，并经伦理委员会批准后进行试验。

1.2 试药与仪器

1.2.1 试药 复方罗红霉素片(每片含罗红霉素150 mg、氨溴索30 mg，扬子江药业集团有限公司生产，批号:08103001)，对照药罗红霉素片(赛诺菲安万特公司生产，含罗红霉素150 mg，批号:8D29A)，盐酸氨溴索片(勃林格殷格翰公司生产，含盐酸氨溴索30 mg，批号:884291)，罗红霉素对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号:130557-200502，纯度:94.1%)，克拉霉素对照品(中国药品生物制品检定所，批号:130558-200501，纯度:97.5%)，氨溴索对照品(中国药品生物制品检定所，批号:100599-200502)，西替利嗪对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号:100266-200101)，甲醇、乙腈均为色谱纯(购自Tedia公司)，实验用水均为双蒸水，其余试剂均为分析纯。

1.2.2 仪器 液相色谱系统:岛津LC-20AD型高效液相色谱仪，SIL-20ACHT自动进样器，CTO-20AC柱温箱;MS/MS系统:美国API3200型质谱仪，配电喷雾离子化源(electrospray ionization，ESI);数据采集:API3200 Analysis软件(美国AB公司);分析天平:AB-265S型精密天平(日本梅特勒公司);混合器:WH-1微型漩涡混合仪(上海沪西分析仪器厂);TL80-2型医用离心机，姜堰市天力医疗器械有限公司。

1.3 试验方法 受试者24例，男女各半，随机分为两组。一组受试者服用试验药复方罗红霉素片，另一组受试者服用罗红霉素片和氨溴索片。一次服用罗红霉素150 mg+氨溴索30 mg，每日服药2次，每隔12 h服药一次，连续4 d，于第7～9次服药前采血5 mL作为稳态浓度，第5天晨间服药(即第9次服药)后20，40 min，1，1.5，2，3，4，6，8，10，12，24，36，48 h 肘静脉采血5 mL。血样置于肝素化试管中，离心分离血浆，-80℃冷冻贮存待分析。试验期间忌烟酒，禁饮含咖啡和碳酸的饮料，避免剧烈运动，亦不得长时间卧床。

整个试验过程中，依照试验方案进行样品采集，医生、护士对受试者进行各项监护，观察和记录受试者各项生命体征及可能发生的任何不良反应，并及时处理。

1.4 色谱/质谱条件 罗红霉素:色谱柱为Waters ODS C18柱(2.1 mm×50 mm，3.5 μm);流动相为甲醇∶5 mmol·L-1乙酸铵(含0.03%甲酸)=55∶45;流速:0.2 mL·min-1;自动进样器温度:15℃;柱温:40℃;进样量:5 μL。采用 ESI+多反应离子监测(multiple reaction monitoring，MRM)方式监测;毛细管电压:5.5 kV;源温度:450℃;锥孔气体流速:25 L·h-1;去溶剂气体流速25 L·h-1;气帘气流速25 L·h-1;入口电压(entrance potential，EP)5.0 eV。罗红霉素质谱条件:检测离子对837.6/679.5;DP 57;CE 30;CXP 11;克拉霉素质谱条件:检测离子对748.6/590.4;DP 56;CE 30;CXP 11。

氨溴索:色谱柱为 Waters ODS C18柱(2.1 mm×50 mm，3.5 μm);流动相为甲醇∶5 mmol·L-1乙酸铵=14.5∶5.5;流速:0.2 mL·min-1;自动进样器温度:15℃;柱温:40℃;进样量:10 μL。采用ESI+MRM方式监测;毛细管电压:5.5 kV;源温度:450℃;锥孔气体流速:20 L·h-1;去溶剂气体流速15 L·h-1;气帘气流速30 L·h-1;EP 5.0 eV。氨溴索质谱条件:检测离子对379.2/263.9;DP46;CE 28;CXP 3.0;西替利嗪条件:检测离子对389.2/201.1;DP 38;CE 26;CXP 4.0。

1.5 血浆样品的处理 罗红霉素:取1.5 mL EP管，加入血浆样品 200 μL，加入 9.3 μg·mL-1内标克拉霉素 20 μL，混匀，加入乙腈 600 μL，涡旋震荡 1 min，16 600 r·min-1离心 10 min，上清液 5 μL 进样。氨溴索:取 1.5 mL EP 管，加入血浆样品 200 μL，加入414 ng·mL-1内标西替利嗪 20 μL，混匀，加入乙腈400 μL，涡旋震荡 1 min，16 600 r·min-1离心 10 min，上清液10 μL进样。

1.6 统计学方法 采用DAS2.1程序分别计算各受试者的有关药动学参数。峰浓度(Cmax)和达峰时间(tmax)均为实测值，血药浓度-时间曲线下面积(area under the curve，AUC)按梯形面积法计算。用 SPSS 11.5对主要药动学参数进行t检验，对试验药与两对照药合用的药动学作出评价。

2 结果

2.1 方法学评价

2.1.1 血浆中罗红霉素浓度的LC/MS/MS测定方法

方法学研究线性回归方程为As/Ai=0.748×10-3C+3.03×10-3，r=0.999 0;线性范围为 20.25～13 500 ng·mL-1，最低定量下限为20.25 ng·mL-1;低、中、高浓度日内、日间相对标准差＜5%;绝对回收率分别为(113.46±7.61)%，(107.56±1.14)% 和(105.30±1.03)%，内标绝对回收率为(111.92±6.56)%;基质效应分别为85.02%，85.02%和85.02%，内标基质效应为86.04%;稳定性考察试验表明血浆样品在预处理后室温放置24 h稳定，未处理血浆样品室温放置24 h稳定，经历4和6次冷冻-解冻循环稳定、在-80℃冷冻放置4个月稳定。

2.1.2 血浆中氨溴索浓度的LC/MS/MS测定方法方法学研究线性回归方程为As/Ai=0.013 2C+0.019 1，r=0.994 5;线性范围为1.99 ～398 ng·mL-1，定量下限为1.99 ng·mL-1;低、中、高浓度日内、日间相对标准差＜10%;绝对回收率分别为(83.20±5.11)%，(90.66±4.84)%和(89.06±1.68)%，内标绝对回收率为(103.65±6.35)%;基质效应分别为88.98%，82.09%和77.50%，内标基质效应为88.51%;稳定性考察试验表明样品在-80℃冷冻24 h室温放置4 h、处理后血浆样本在LC/MS中放置24 h、经历4次冷冻-解冻循环稳定、在-80℃冷冻放置3个月稳定。

2.2 复方罗红霉素片多剂量给药后罗红霉素的药动学

2.2.1 罗红霉素血药浓度-时间曲线 24例健康受试者分别多次口服复方罗红霉素片、罗红霉素与盐酸氨溴索片合用后的平均血药浓度-时间曲线见图1。

2.2.2 罗红霉素药动学参数 用DAS 2.1药动学软件中的药动学模块计算程序对数据进行处理，计算受试者用药后的药动学参数，其中Cmax、tmax以实测值计算，AUC按梯形面积法计算，得到罗红霉素各主要药动学参数分别见表1。结果表明，复方罗红霉素片组与两单药合用组相比，罗红霉素的人体药动学参数差异无统计学意义。

表1 罗红霉素药动学参数Tab．1 The pharmacokinetic parameters of roxithromycin ±s

表1 罗红霉素药动学参数Tab．1 The pharmacokinetic parameters of roxithromycin ±s

制剂AUCss AUC(0-t) AUC(0-∞)μg·L-1·h MRT(0-t) MRT(0-∞) t 1/2z h受试制剂 47 767.15±16 097.92 96 055.25±38 428.39 110 516.76±53 249.06 14.17±3.04 20.43±9.61 14.70±8.91参比制剂 53 976.14±16 884.55 106 172.64±30 887.39 117 745.23±36 263.59 14.52±1.38 19.68±4.18 14.64±3.79制剂tmax/h CLz/F/(L·h-1)Vz/F/L Cmax Cmin Cav μg·L-1 DF受试制剂 2.71±1.45 1.84±1.30 30.96±12.17 6 261.67±2 111.12 3 435.00±1 328.93 3 980.60±1 341.49 0.71±0.35参比制剂 2.33±1.12 1.48±0.84 29.46±11.58 7 645.83±2 662.46 3 647.50±1 319.83 4 498.01±1 407.05 0.86±0.27

2.3 复方罗红霉素片多剂量给药后氨溴索药动学

2.3.1 氨溴索血药浓度-时间曲线 24例健康受试者分别单次口服复方罗红霉素片、罗红霉素与盐酸氨溴索片合用后的平均稳态血药浓度-时间曲线见图2。

2.3.2 氨溴索药动学参数 用DAS 2.1药动学软件中的药动学模块计算程序对数据进行处理，计算受试者用药后的药动学参数，其中Cmax、tmax以实测值计算，AUC按梯形面积法计算，得到氨溴索各主要药动学参数分别见表2。复方罗红霉素片组与两单药合用组相比，氨溴索的人体药动学参数差异无统计学意义。

3 讨论

罗红霉素血药浓度测定方法有微生物法、液相色谱法或液相色谱串联质谱法［1-2］。盐酸氨溴索的体内分析方法有薄层色谱法、毛细管电泳法、气相色谱法及气相色谱联合质谱法、高效液相色谱法及高效液相联合质谱法［3］。有文献报道采用液相色谱串联质谱法同时测定罗红霉素和氨溴索的血药浓度［4］。笔者曾尝试用等度洗脱法甲醇-醋酸铵系统分离罗红霉素和氨溴索，但罗红霉素的峰形较宽，需加0.03%甲酸峰形才变锐，而氨溴索的峰形加甲酸后变差。也曾尝试用梯度洗脱法分离罗红霉素和氨溴索，但血浆样本中罗红霉素浓度较高，而氨溴索浓度较低，同时分析时，在罗红霉素出峰处偶尔有干扰。因此，最终选择等度洗脱法分别分析罗红霉素和氨溴索的血药浓度。

表2 氨溴索药动学参数Tab．2 The pharmacokinetic parameters of ambroxol ±s

表2 氨溴索药动学参数Tab．2 The pharmacokinetic parameters of ambroxol ±s

制剂AUCss AUC(0-t) AUC(0-∞)μg·L-1·h MRT(0-t) MRT(0-∞) t 1/2z h受试制剂 372.53±119.18 679.86±183.90 725.34±190.2412.38±1.67 15.18±2.49 10.19±1.94参比制剂 469.23±207.69 814.25±365.98 922.00±515.6212.03±1.83 16.99±6.86 12.64±6.38制剂tmax/h CLz/F/(L·h-1)Vz/F/L Cmax Cmin Cav μg·L-1 DF受试制剂 2.83±1.51 88.84±26.02 1 327.17±558.50 51.42±19.83 28.66±8.44 31.04±9.93 0.66±0.55参比制剂 1.90±1.18 77.20±27.26 1 241.59±324.79 67.37±26.66 28.26±11.56 39.10±17.31 1.00±0.25

24例健康受试者在服用复方罗红霉素片试验各组后的生命体征均未出现异常，未见主诉不适症状。文献报道氨溴索和罗红霉素体内可能没有相互作用［4-5］。本试验研究表明，多剂量给予复方罗红霉素片后，其罗红霉素和氨溴索的药动学参数与对照药罗红霉素片合用氨溴索片的两主药的药动学参数相比，罗红霉素和氨溴索的药动学参数均无明显差异，因此在临床上应用复方罗红霉素片可替代两单药合用，以简化给药方案，提高患者的顺应性。

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