紫外分光光度法测定甲基丁香酚含量方法的建立＊

白 波，江秀慧，付明哲，宋晓平

（西北农林科技大学动物医学院 中兽医药研究所，陕西杨陵 712100）

甲基丁香酚（methyleugenol）属苯丙素类化合物，主要存在于肉豆蔻、香茅和细辛等植物中，可作为桔小实蝇等农业害虫的引诱剂［1］，是潜在的植物源杀虫剂［2］。现代药理研究证明，甲基丁香酚具有显著的镇咳、祛痰、镇静、镇痛和抗菌作用［3－6］。本试验拟采用紫外分光光度法测定甲基丁香酚在原料药的含量，旨在为其质量控制提供参考资料。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂 甲基丁香酚为齐尔普医药化工有限公司产品，甲基丁香酚对照品为中国药品生物制品检定所提供，无水乙醇为西安三浦精细化工厂产品。

1.1.2 主要仪器 UV－3802H 紫外－可见分光光度计为尤尼柯仪器有限公司产品；BSA224S－CW型电子天平为赛多利斯科学仪器有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 对照品溶液的配制 用分析天平称取甲基丁香酚对照品5mg于小烧杯中，用无水乙醇稀释后加入到100mL容量瓶中，再加无水乙醇至刻度，摇匀，即得浓度为50mg／L的对照品溶液。再用移液管分别移取上述对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL置不同的10mL容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得浓度分别为1、2、3、4、5μg／mL的对照品溶液。

1.2.2 甲基丁香酚原料药溶液的配制 用分析天平称取甲基丁香酚原料药5mg于小烧杯中，用无水乙醇稀释后加入到100mL容量瓶中，再加无水乙醇至刻度，摇匀，即得浓度为50mg／L的原料药溶液。再用移液管移取上述溶液0.6mL置10mL容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，可得浓度为3 μg／mL的溶液。

1.2.3 测定波长的选择 采用紫外分光光度法进行扫描。取对照品溶液和原料药溶液，以无水乙醇为空白对照，在190nm～400nm波长范围内扫描，记录对照品溶液和原料药溶液的最大吸收波长，将其作为测定波长。

1.2.4 标准曲线的绘制 在最大吸收波长处测定浓度分别为1、2、3、4、5μg／mL的对照品溶液的吸光度，以无水乙醇溶液为空白对照，重复测定3次，取平均值。以吸光度（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标绘制标准曲线，得其回归方程。

1.2.5 加样回收率测定 取已知含量的原料药溶液0.1mL于10mL容量瓶中，分别向容量瓶中加入对照品溶液0.1、0.5、1mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，在测定波长处测定其吸光度，将测定的吸光度代入标准曲线方程中计算出测得值（C），根据回收率公式计算出回收率。

回收率＝（C－A）／B×100%

式中A为已知被测样品含量；B为加入对照品的量；C为实测值。

1.2.6 精密度试验 取浓度1、3、5μg／mL的甲基丁香酚对照品溶液，分别于1d内5次和1周内5次在测定波长处测定其吸光度，并根据标准曲线法计算其浓度，计算其日内及日间精密度（RSD）。

1.2.7 甲基丁香酚原料药含量的测定 在最大吸收波长处测浓度为3μg／mL原料药溶液的吸光度，重复测定3次，取平均值。用标准曲线法计算甲基丁香酚原料药的含量［7］。

2 结果

2.1 最大吸收波长的确定

由图1可见，甲基丁香酚对照品溶液在230nm处有最大吸收峰，故确定230nm为甲基丁香酚的测定波长。

2.2 标准曲线的绘制

以吸光度（A）对相应浓度（C）进行线性回归，得回归方程为 A＝0.025 1x－0.001 4，r＝0.996 6。由此可见，在0μg／mL～5μg／mL浓度范围内，甲基丁香酚浓度与吸光度的线性关系良好（图2）。

2.3 加样回收率测定结果

由表1可以看出，该方法的平均回收率为99.45%，RSD为1.03%，说明该方法稳定可靠，回收率高，可用于甲基丁香酚的含量测定。

2.4 精密度测定结果

由表2可知，日内、日间精密度的RSD均小于1.00%，这说明该检测方法可靠、稳定性好。

图1 甲基丁香酚对照品紫外扫描图谱Fig.1 UV spectrum of methyleugenol

图2 甲基丁香酚标准曲线Fig.2 The standard curve of methyleugenol

表1 回收率试验结果Table 1 The results of recovery experiment

表2 精密度测定结果Table 2 Results of precision determination

2.5 甲基丁香酚含量的测定

原料药溶液在230nm波长处测得3次吸光度分别为0.072 8、0.072 5、0.072 6，平均值0.072 6，代入标准曲线方程中计算其浓度相当于甲基丁香酚对照品溶液2.948 2μg／mL，即甲基丁香酚原料药的含量为98.27%。

3 讨论

利用紫外分光光度法测定原料药的含量，方法简单易行，成本低廉［8－10］，但需注意溶剂本身的吸收范围［11］。本试验以乙醇为溶剂溶解甲基丁香酚对照品和原料药，采用紫外分光光度法进行波长扫描，乙醇在210nm处有吸收，而甲基丁香酚对照品和原料药溶液在230nm处有特征吸收，因此选择230 nm为甲基丁香酚原料药含量测定的检测波长。本研究建立的紫外分光光度法测定甲基丁香酚含量的标准曲线为A＝0.025 1x－0.001 4（r＝0.996 6），平均回收率为99.45%，日内、日间精密度的RSD均小于1%。该方法简便、快速、重现性好且准确度较高，可用于甲基丁香酚原料药的含量测定和质量控制。

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