Triton WR-1339诱发小鼠高脂血症模型的研究

翟羽佳，陈邦添，李善兵，李怡芳，谢 果，何蓉蓉，栗原博

(暨南大学中药及天然药物研究所，广东广州 510632)

由于高脂血症可诱发心脑血管等多种相关疾病，因此人们十分关注对其治疗药物的研发和药效评价方法的建立。表面活性剂Triton WR-1339(tyloxapol)诱发动物高脂血症模型，具有操作简便且药效评价快速等特点而被广泛运用。本实验从基因水平探讨Triton WR-1339诱发高脂血症的机制，旨在为该模型用于降血脂药物筛选和药效评价提供有益的实验依据。

1 材料与方法

1.1材料7周龄♂清洁级昆明种小鼠购自广东省医学实验动物中心，许可证号:SCXK(粤)2008-0002。Triton WR-1339购自美国 Sigma公司，TC、TG、LDL-C、LPL、HTGL 及考马斯亮蓝蛋白试剂盒均购于南京建成生物科技有限公司(批 号分 别 为:20100527、20100527、20100517、20100719、20100705)，引物由美国Invitrogen(上海)英骏生物技术有限公司合成。

1.2Triton WR-1339诱发小鼠高脂血症将小鼠随机分为正常对照组与Triton WR-1339模型组，每组10只。模型组300 mg·kg－1剂量尾静脉注射Triton WR-1339造模，对照组注射等量生理盐水。造模18 h后，小鼠乙醚麻醉下经心脏取血并加肝素抗凝，同时取出小鼠肝脏后冷藏备用。

1.3血浆TG、TC及LDL-C水平测定全血于4℃，2 000 r·min－1离心10 min分离血浆，按试剂盒说明书检测血浆TG、TC及LDL-C的水平。

1.4肝组织LPL、HTGL活性及mRNA表达水平的测定将肝脏用生理盐水制成10%的组织匀浆液，3 000 r·min－1离心10 min后，取上清按试剂盒说明书测定肝组织LPL及HTGL的活性。用TRIzol法提取肝组织总 RNA，取1 μg总RNA合成cDNA后进行PCR反应。LPL引物序列为(F)5'-CTAACTGCCACTTCAACC-3'和(R)5'-CAGACTTCCTGCTACGC-3'，扩增片段320 bp。HTGL引物序列为(F)5'-TGGACGGGAAGAACAAG-3'和(R)5'-GGAGTCAATGAAGAGGTGC-3'，扩增片段 326 bp。18S引物序列为(F)5'-GGGAGAGCGGGTAAGAGA-3'和(R)5'-ACAGGACTAGGCGGAACA-3'，扩增片段241 bp。取6 μl PCR反应产物进行1%琼脂糖凝胶电泳分离，采用Quantity One图像分析软件分析数据，以目的条带与18S的灰度比值进行半定量分析。

1.5统计学处理实验数据均以±s表示，使用SPSS 13.0软件进行分析和处理，两组间比较采用t检验。

2 结果

2.1Triton WR-1339对小鼠血浆TC、TG及LDL-C水平的影响如Tab 1所示，与正常对照组相比，小鼠尾静脉注射Triton WR-1339可以升高血浆中TC，TG及LDL-C水平(P＜0.01)。

Tab 1 Effect of Triton WR-1339 on the levels of TC，TG，LDL-C in plasma of mice(±s，n=10)

Tab 1 Effect of Triton WR-1339 on the levels of TC，TG，LDL-C in plasma of mice(±s，n=10)

＊＊P＜0.01 vs normal control group

＊＊

2.2Triton WR-1339对小鼠肝中LPL、HTGL活性及mRNA表达的影响如Tab 2所示，与正常对照组相比，小鼠尾静脉注射Triton WR-1339可以降低肝脏组织中LPL、HTGL活性及其mRNA的表达(P＜0.05，P＜0.01)。

3 讨论

表面活性剂Triton WR-1339静脉负荷小鼠后血浆TG、TC及LDL-C水平明显升高［1］，诱发急性高脂血症。Schurr等［2］的早期研究提示该模型的产生机制主要与抑制脂蛋白酶活性有关，但是对具体脂蛋白酶活性及基因表达的研究报道甚少。LPL与HTGL是两种重要的脂蛋白酶，可以催化CM和VLDL等血浆脂蛋白中TG分解为脂肪酸和单酸甘油酯，以提供组织氧化和贮存［3－5］。我们的研究结果显示，Triton WR-1339负荷抑制小鼠肝脏组织中LPL及HTGL活性的同时，也抑制了这些酶的mRNA表达。本研究结果表明尾静脉注射Triton WR-1339诱发小鼠高脂血症机制可能与其抑制LPL、HTGL活性及mRNA表达相关，研究结果为该模型用于降血脂药物筛选和药效评价提供有益的实验依据。

Tab 2 Effect of Triton WR-1339 on the levels and mRNA expressions of LPL and HTGL in liver of mice(±s，n=10)

Tab 2 Effect of Triton WR-1339 on the levels and mRNA expressions of LPL and HTGL in liver of mice(±s，n=10)

*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01 vs normal control group.

Group LPL/kU·g－1Pro HTGL/kU·g－1Pro LPL/18S HTGL/18S Normal control 2.60 ±0.36 1.42 ±0.16 0.53 ±0.090.45 ±0.11 Triton WR-1339 1.85 ±0.31＊＊ 1.05 ±0.17＊＊ 0.15 ±0.05＊＊ 0.37 ±0.08*

［1］余艳辉，文 军，郭兆贵.Triton WR-1339对小鼠血脂水平的影响［J］.中国药理学通报，2002，18(5):599 －600.

［1］Yu Y H，Wen J，Guo Z G.Effects of Triton WR-1339 on bloodlipids of mice［J］.Chin Pharmacol Bull，2002，18(5):599 －600.

［2］Schurr P E，Schultz J R，Parkinson T M.Triton-induced hyperlipidemia in rats as an animal model for screening hypolipidemic drugs［J］.Lipids，1972，7(1):68 － 74.

［3］Yokota T，Nagashima M，Ghazizadeh M，Kawanami O.Increased effect of fucoidan on lipoprotein lipase secretion in adipocytes［J］.Life Sci，2009，84(15 －16):523 －9.

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