不同粒度甘草超微粉甘草酸溶出情况的比较

何 昱， 钟 涛， 陈 龙， 何晓玮

(1.浙江中医药大学，浙江杭州 310053;2.浙江大学医学院附属邵逸夫医院，浙江杭州 310016;3.浙江东邦药业有限公司，浙江临海 317016)

中药材超微粉碎曾经一度是近年来研究的热点，它从改变药物的物理状态着手，尝试提高生物机体对药物的吸收，增加药物的生理效应［1-3］。中药经超微粉碎后所得到的颗粒，粒径可达到1～75 μm，表现出一般颗粒所不具有的一些特殊理化性质:如良好的溶解性、分散性、吸附性、化学反应活性等，这使得超微粉碎在中药制药行业显示出特有的优势［4］。

但是，随着药材粒度的减小，所含成分的溶解度和溶解速率并不会无限制的增大。在一定条件下，随着比表面积的增大，表面能的因素不仅会使吸附作用加强，有效成分扩散速度受到影响;而且其表面更易吸附空气和带有电荷，影响有效成分的溶出［5］。

因此，对于中药的超微粉化不能一概而论，应根据特定中药的性质，以有效成分的溶出速度和溶出量最佳、不良反应最小为前提，来决定适宜的药材粉碎粒度。

本实验选择在临床上广泛使用的中药材甘草，通过测定不同粒度甘草超微粉中甘草酸的溶出量来比较它们的溶出情况。溶出的介质除了水之外，还以人工胃液和人工肠液来模拟体内环境，为甘草药材的粉碎提供更有说服力的依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1200高效液相色谱仪;DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌机(河南巩义市英峪予华仪器厂);万分之一电子天平［梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司］;PHS-3C(001级)PH酸度计(上海精科);AnkeTGL-16B离心机(上海安亭科学仪器厂)。

1.2 对照品 甘草酸单铵盐(中国药品生物制品检定所，批号110731-200614)。

1.3 试剂 色谱级甲醇(天津市四友精密化学品有限公司)，胃蛋白酶(上海伯奥生物科技有限公司)，胰蛋白酶(国药集团化学试剂有限公司)，冰醋酸(杭州化学试剂有限公司)，水为实验室自行制备的双蒸水。

1.4 甘草样品 均由上海中医药大学洪筱坤教授提供，包括宁夏甘草中粉，以及经YSNM-1500-0005(台式小型超细加工设备)处理所得到的1次处理粒径(18.90±19.0)μm，用Y表示、5次处理粒径(11.2±9.75)μm，用W表示、10次处理粒径(9.51±7.98)μm，用S表示的宁夏甘草超微粉。

2 方法与结果

2.1 甘草酸测定的色谱条件 色谱柱:Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm ×150 mm，5 μm)，流动相:甲醇-0.2 mol/L 醋酸铵溶液-冰醋酸(66 ∶33 ∶1)，流速:1.0 mL/min，检测波长:250 nm，柱温:25 ℃，进样量 :10 μL［6］。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取经干燥的甘草酸单铵盐标准品5.3 mg，置于25 mL量瓶中，加入流动相溶解后定容，即得浓度为0.212 mg/mL的对照品溶液。

2.2.2 人工胃液、人工肠液的制备 按中国药典2005版二部附录项下进行。

2.2.3 供试品溶液的制备 精密称取宁夏甘草中粉约20 g以及经1次处理(Y)、5次处理(W)、10次处理(S)的超微粉样品各约0.15 g，放入50 mL烧杯中，分别加双蒸水、人工胃液和人工肠液25 mL，置于恒温磁力搅拌器中(37±1)℃搅拌浸出，在 15、30、60、120、240 min 后取样，所取样品液5 000 r/min离心10 min，取上清液过0.45 μm微孔滤膜，即得各供试品溶液［7］。

2.3 各样品液中甘草酸的测定 用2.1项下的色谱条件分析对照品溶液、空白人工胃液、空白人工肠液以及以上各时间点所取的供试品溶液，空白人工胃液和空白人工肠液在甘草酸色谱峰对应的保留时间处无吸收，不干扰甘草酸的测定;且各样品液中甘草酸色谱峰的分离度都在2.0以上，因而可以用此条件进行含量测定。S样品在不同介质中第一次取样(15 min)分析所得的色谱图见图1、2。

2.4 用外标法计算各供试品溶液中甘草酸的含量，具体测定结果详见表1～3。

图1 对照品溶液色谱图

图2 S样品在不同介质中第一次取样(15 min)分析时的色谱图

表1 不同粒度甘草粉末在双蒸水中的溶出量(n=2)

表2 不同粒度甘草粉末在人工肠液中的溶出量

表3 不同粒度甘草粉末在人工胃液中的溶出量

3 讨论

3.1 中国药典2005版收载的甘草药材中甘草酸的含量测定是取甘草中粉加流动相超声提取后进样［6］。因本试验中人工胃液、人工肠液均以水为介质，所以分别用水和流动相对甘草中粉样品进行了超声提取，对比两种溶剂对甘草酸的提取效果:结果用流动相提取的甘草酸含量为0.049 mg/mL/g，水提取的甘草酸含量为0.041 mg/mL/g，差别不明显。

3.2 从表1、2、3可以看出:各粒度超微粉样品的甘草酸溶出量均远远大于中粉，说明超微粉碎可有效增加药材中成分的溶出。此外，3种介质中，人工胃液中甘草酸的溶出量最低，而在水和人工肠液中溶出量较高，这与甘草酸结构中具有羧基呈酸性，在酸性环境中溶出较小的特性是一致的。

3.3 由表1、2可见:双蒸水和人工肠液中，甘草酸的溶出量以5次处理的W样品最小，低于经1次处理的Y样品和经10次处理的S样品，提示可能此粒径大小的药材颗粒吸附性最强，导致甘草酸溶出量的降低，因此甘草在超微粉碎时应避免相应的(11.2±9.75)μm粒度范围。同时这一实验结果也再次证实了中药材超微粉碎应当选择其适宜的粒径。

3.4 本实验仅对甘草超微粉中甘草酸单一成分的溶出情况进行了研究，而对于中药材而言，药效的发挥与其含有的众多成分相关，今后可结合全面的成分分析如指纹图谱和药效学实验对甘草的超微粉碎进行更深层次的探讨。

致谢:实验仪器和试剂均由浙江中医药大学东洲科技园提供。

［1］楼丹飞.中药超微粉碎研究进展［J］.河南中医，2008，28(8):102-105.

［2］关天增，雷敬卫，郑 艳.浅谈超微粉碎［J］.中国中药杂志，2002，27(7):499-500.

［3］黄一平，鞠建明，高美华，等.传统中成药超微粉碎前后粉末质量比较研究［J］.中成药，2007，29(1):135-137.

［4］陈开文，谭 涌.中药超微粉碎应用研究概况［J］.中国药业，2005，15(2):75-76.

［5］李晓明，王跃生，闫 寒，等.超微粉碎决明子对其大黄酚溶出量的影响［J］.中国实验方剂学杂志，2001，7(6):6-8.

［6］中国药典一部［S］.2005:59.

［7］迟文俊，吴爱学.五苓散在人工胃液中微量元素溶出率［J］.中国中药杂志，1990，15(11):31-33.