维吾尔药芝麻菜子质量标准研究

赵翡翠， 王国栋， 姜 林

(新疆医科大学附属中医医院药学部，新疆乌鲁木齐 830000)

维吾尔药芝麻菜子来源于十字花科植物芝麻菜Eruca sativaMill.的干燥成熟种子，维吾尔语称“扎浑欧日格”。本品在新疆地区资源较丰富，维吾尔民间应用广泛。据《中华本草·维吾尔药卷》［1］记载，芝麻菜子性二级干热，味辛。功能生干生热，祛寒壮阳，通尿通经，燥湿开胃，散气除胀，热肤除斑。主治湿寒性或黏液质性疾病，如寒性阳痿，小便不利，经水不下，湿性纳差，气结腹胀，雀斑，白癜风等。本品虽已收载于《中华本草·维吾尔药卷》、《中国医学百科全书·维吾尔医学》［2］等书籍，但目前尚无药材质量标准，很难保证其在临床使用中的安全性和有效性。因此，本实验对维吾尔药芝麻菜子的质量标准进行研究，并建立其质量标准草案。

1 仪器与试药

Waters2695高效液相色谱仪(美国 Waters公司);AG-135电子分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司);SK3300LH超声清洗器(上海科导超声仪器有限公司);Direct-QTM5超纯水仪(Millipore公司);YOKO-ZS紫外线分析摄影仪(武汉药科新技术开发公司);YOKO-DF薄层电动涂敷器(武汉药科新技术开发公司);ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)。芥子碱硫氰酸盐(中国药品生物制品检定所，批号111702-200501)

芝麻菜子样品于2009年—2010年分别采自新疆库尔勒、伊宁、鄯善、和田、吐鲁番、哈密、乌鲁木齐、库车、阿克苏、阿图什等不同产地，共10批，经新疆医科大学附属中医医院中药鉴定室李永和主任药师鉴定均为十字花科植物芝麻菜Eruca sativaMill.的干燥成熟种子。

2 方法与结果

2.1 形态特征 一年生草本，高20～90 cm。茎直立，通常上部分枝，疏生白色粗毛。基生叶与茎下部叶大头羽状分裂、羽状全裂或不裂，长5～10 cm，宽2～6 cm，裂片顶端圆，具钝齿或全缘，侧裂片向叶基部渐小，条状或披针形。叶表面光滑无毛，仅背面脉上疏生柔毛;叶柄长2～4 cm，上部叶无柄，叶渐小，近长椭圆形。总状花序生枝顶，花瓣4，黄色，有暗色脉纹，直径1～1.5 cm，雄蕊6，雌蕊1，子房细柱形，花柱不显，柱头头状。长角果圆柱形，长约2～3 cm，角果顶端具扁平剑形的喙，果梗短而粗，紧贴果轴生。种子每室2行，椭圆形，稍扁，灰黑色或棕黄色，长2～3 mm，宽1.5～2 mm。花期5～6月，果期7 ～8 月［3-5］。

2.2 性状 根据药材实际性状及参考文献［3-5］修订描述。本品呈椭圆形，稍扁，长2～3 mm，宽1.5～2 mm，表面灰黑色或棕黄色，有黑色小斑点，具细密的纹理和2条纵列的浅槽，有明显突起的种脐，突起部位附近有晶状附着物。种皮薄，破开后有绿白色的子叶，具油性。气微，味辛、苦。

2.3 鉴别

2.3.1 显微鉴别 分别采用不同的透化方法(水合氯醛、甘油醋酸)进行观察，经验证，以水合氯醛透化后的显微片效果较好，故根据药材实际显微粉末描述。本品粉末黄绿色。油滴和糊粉粒多见，种皮栅状细胞，淡黄色，类椭圆形。种皮表皮细胞，棕黄色，表面观呈多角形，外壁波状增厚。内胚乳细胞，壁厚，内含糊化淀粉粒;子叶细胞含脂肪油滴。

2.3.2 薄层鉴别

供试品溶液的制备 取本品粉末1 g，加甲醇50 mL，超声处理1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。

对照品溶液的制备另取芥子碱硫氰酸盐对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。

吸附剂 硅胶G薄层板。

展开剂 乙酸乙酯-甲酸-水(10∶2∶3)的上层溶液，展开，取出，晾干。

检视方式 (1)置紫外光灯(365 nm)下检视;(2)稀碘化铋钾显色。

用上述薄层色谱条件，检测不同产地的10批芝麻菜药材，薄层色谱图均一致，重现性好，见图1。

2.4 检查 杂质测定法、水分测定法、总灰分测定法、酸不溶性灰分、过氧化值测定参照《中国药典》2010 年版(一部)附录ⅨA、H、K、P［6］。

2.4.1 杂质 测定不同产地10批样品，结果见表1。根据测定结果，10批样品数值最高为1.23%，最低为0.88%，平均值为0.97%，并考虑到本次采集样品生长在不同地区，环境和采收加工的差异性，取本试验的最高值增加10%左右，将本品杂质限度定为不得过1.40%，纳入标准。

2.4.2 水分 测定不同产地10批样品，结果见表1。根据测定结果，10批样品数值最高为4.71%，最低为4.50%，平均值为4.60%，考虑到本次采集样品均为2009年以前的样品，新疆地区气候干燥，样品水分普遍偏低，综合评估，将本品水分限度定为不得过8.0%，纳入标准。

图1 芝麻菜子的薄层色谱图A.置紫外光灯(365 nm)下 B.稀碘化铋钾显色1.芥子碱硫氢酸盐对照品 2～11.10批芝麻菜子样品Fig.1 TLC of Eruca sativa seedA.UV lamp(365 nm) B.Dilute iodinated bismuth potassium show color 1.Sinapine cyanide sulfonafe 2 ～11.samples of 10 batches of Eruca sativa seed

2.4.3 总灰分 测定10批样品，结果见表1。根据测定结果，10批样品数值最高为7.11%，最低为5.08%，平均值为6.21%，考虑到植物生长在不同地区，环境和采收时间的差异性，取本试验的最高值增加10%左右，将本品总灰分限度定为不得过8.0%，纳入标准。

2.4.4 酸不溶性灰分 测定10批样品，结果见表1。根据测定结果，10批样品数值最高为2.37%，最低为0.37%，平均值为1.30%，考虑到植物生长在不同地区，环境和采收时间的差异性，取本试验的最高值增加10.0%左右，将本品酸不溶性灰分限度定为不得过2.6%，纳入标准。

2.4.5 过氧化值 测定10批样品，结果见表1。根据测定结果，10批样品数值最高为0.11，最低为0.06，平均值为0.08，考虑到植物生长在不同地区，环境和采收时间的差异性，取本试验的最高值增加10%左右，将本品过氧化值限度定为不得过0.12，纳入标准。

2.5 浸出物 参照《中国药典》2010年版(一部)附录Ⅹ A，分别采用50%、70%、90%醇溶性浸出物冷浸、热浸法测定，结果以50%醇溶性浸出物热浸法结果较好，故采用此法进行浸出物测定。结果见表1，根据检测结果，10批样品数值最高为19.43%，最低为15.39%，平均值为17.74%，考虑到植物生长在不同地区，环境和采收时间的差异性，取本试验的最低值下浮10%左右，暂定本品浸出物不得少于14.00%。结果见表1。

2.6 脂肪油 测定10批样品，取本品每批粗粉1 g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流提取(8 h)至脂肪油提尽，收集提取液，置已干燥至恒质量的蒸发皿中，在水浴上低温蒸干，在100℃干燥1 h，移置干燥器中，冷却30 min，精密称定，计算，结果见表1。根据测定结果，本品10个数值最高为28.93%，最低为18.55%，平均值为22.70%，取最低值减少10%左右，将本品脂肪油质量分数定为不得少于17.00%(mL/g)，纳入标准。结果见表1。

2.7 芥子碱硫氢酸盐

2.7.1 色谱条件与系统适用性试验 以苯基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-3%冰醋酸溶液(12∶88)为流动相;检测波长为326 nm。理论板数按芥子碱峰计算应不低于5 000。

2.7.2 对照品溶液制备 精密称取芥子碱硫氰酸盐对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，即得。

2.7.3 供溶液品溶液制备 取本品粉末(过三号筛)约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声处理(功率250 W，频率50 kHz)30 min，放冷，再称定质量，用70%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，置棕色瓶中，即得。

2.7.4 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.7.5 线性关系 精密吸取芥子碱硫氰酸盐对照品溶液(120 μg/mL)2、4、6、8、10、12 mL，分别置于25 mL量瓶中，用甲醇溶液稀释到刻度，摇匀，精密吸取各10 μL注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积的积分值为纵坐标(Y)，对照品溶液的质量浓度为横坐标(X)，绘制标准曲线。得到回归方程为Y=31 097X+53 340，r=0.999 0。结果表明，芥子碱硫氰酸盐在9.60～57.60 μg/mL与峰面积呈良好的线性关系。

2.7.6 精密度试验 精密称取本品(编号1)0.5 g按以上方法制成供试品溶液，连续进样6次，结果芥子碱硫氰酸盐峰面积的RSD为2.71%。

表1 杂质、水分、总灰分、酸不溶性灰分、过氧化值、浸出物、脂肪油的测定结果Tab.1 Determination of impurities，moisture，ash，peroxide value，extract and fatty oil

2.7.7 稳定性试验 精密吸取当日配制的供试品溶液(编号 1)于 0、2、4、8、12、24 h 依法测定，结果芥子碱硫氰酸盐峰面积的RSD为0.30%。

2.7.8 重复性试验 精密称取本品6份(编号1)，进行测定，RSD为0.86%，结果表明重复性良好。

2.7.9 回收率试验 采用加样回收法，称取已知量样品(编号1)，分别定量加入芥子碱硫氰酸盐对照品0.29 mg，精密加入70%甲醇50 mL，照供试品溶液制备方法处理后，色谱条件下进样，依法测定，计算加样平均回收率为100.18%，RSD为0.84%，表明本方法回收率较好，结果见表2。

表2 回收率测定结果Tab.2 Determination of recovery

2.7.10 定量测定结果 分别取不同时间、不同产地的样品制备供试品溶液，依法测定峰面积，根据标准曲线计算样品中芥子碱硫氰酸盐的量，定量测定结果见表3，HPLC色谱图见图2。

根据10批样品的测定结果，10批样品最低为0.19%，最高为 0.25%，平均值为 0.22%，考虑到植物生长在不同地区，环境和采收时间的差异性，取本试验的最低值下浮10%左右，暂定本品按干燥品计算，含芥子碱以芥子碱硫氰酸盐(C16H24NO5·SCN)计，不得少于0.17%。

图2 芝麻菜子的HPLC图Fig.2 HPLC of Eruca sativa seed

表3 芥子碱硫氰酸盐测定结果(n=2)Tab.3 Determination of sinapine cyanide sulfonafe(n=2)

3 讨论

3.1 由于芝麻菜与十字花科植物芥子、莱菔子植物有相近的成分［7-8］，所以在芝麻菜子薄层鉴别试验中参考了《中国药典》2010年版一部芥子、莱菔子鉴别项下的方法和展开条件［6］。并分别以(1)取本品粉末1 g，加甲醇50 mL，超声处理1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解;(2)取本品粉末1 g，加乙醚30 mL，加热回流1 h，弃去乙醚液，药渣挥干，加甲醇20 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解;两种方法制备供试品溶液。经试验，用(1)法制备的供试品溶液进行薄层色谱鉴别试验效果较好。又分别以(1)乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(3.5 ∶5 ∶1 ∶0.5);(2)乙酸乙酯-甲酸-水(10∶2∶3)的上层溶液为展开剂，结果以(2)为展开剂时，薄层色谱斑点分离清晰。检视方式分别为(1)置紫外光灯(365 nm)下检视;(2)稀碘化铋钾显色，结果2种方法均较好。

3.2 目前关于芝麻菜子的化学研究报道很少，仅有少数文献表明本品含脂肪油达30%左右［1］，同时经预试本品脂肪油质量分数较高，故本药材研究以脂肪油为测定指标。

3.3 芝麻菜子为十字花科植物，芥子碱为十字花科植物的专属性成分，且经薄层试验鉴别出含有芥子碱硫氢酸盐的成分，故本文参照《中国药典》2010年版一部中莱菔子、芥子，以及相关文献中芥子碱的测定方法［9-10］，采用HPLC法对芝麻菜子中芥子碱硫氢酸盐的成分进行测定，经方法学验证表明该法可行。

本实验研究暂定了芝麻菜子药材质量控制指标的标准值，制订了质量标准草案，该质量标准可用于评价维吾尔药芝麻菜子的质量，为保证芝麻菜子药材临床安全、可控应用提供了科学依据。

［1］国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草:维吾尔药卷［M］.上海:上海科学技术出版社，2005:76.

［2］中国医学百科全书编辑委员会.中国医学百科全书维吾尔医学分册［M］.上海:上海科学技术出版社，2005:254.

［3］米吉提·胡达拜尔地，徐建国.新疆高等植物检索表［M］.乌鲁木齐:新疆大学出版社，2000:386.

［4］中国科学院新疆生物土壤沙漠研究所.新疆药用植物志:第二卷第二分册［M］.乌鲁木齐:新疆人民出版社，1981:51，58，60.

［5］中国药科大学，中国医药科技出版社.中药辞海:第一卷［M］.北京:中国医药科技出版社，1993:1987.

［6］国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版一部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010.

［7］刘丽芳，王宇新，李海燕，等.常用十字花科药用植物中芥子碱的分布研究［J］.色谱，2006，24(1):49-51.

［8］柯木根，吴国欣，林燕妮，等.芥子碱的研究概况［J］.中草药，2007，38(9):1436-附 3.

［9］刘丽芳，王宇新，张新勇，等.莱菔子中芥子碱的含量测定［J］.中成药，2002，24(1):52-54.

［10］杜松云，李其兰，余 军.RP-HPLC法测定白芥子中芥子碱硫氰酸盐的含量［J］.中国药房，2007，18(27):2136-2138.