高效液相色谱法测定维C银翘片溶出度的研究

郭怀忠， 庞晓敏， 王进文， 姜文月， 张春梅

（1.河北大学药学院，河北保定071002；2.河北省药物质量分析控制重点实验室，河北保定 071002）

高效液相色谱法测定维C银翘片溶出度的研究

郭怀忠1，2， 庞晓敏1， 王进文1， 姜文月1， 张春梅1

（1.河北大学药学院，河北保定071002；2.河北省药物质量分析控制重点实验室，河北保定 071002）

目的 建立维C银翘片（金银花、连翘、维生素C、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏等）中维生素C、对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏3种西药成分的溶出度测定方法。方法 采用桨法，以0.1 mol/L HCl溶液为溶出介质，转速为75 r/min，90 min 取样。液相色谱柱为 Welchrom-C18柱（4.6 mm ×150 mm，5 μm），流动相为 A 0.05 mol/L 磷酸二氢钾（含0.5% 四丁基溴化铵，磷酸调pH至3.5）；B乙腈，梯度洗脱。体积流量为0.8 mL/min，检测波长为260 nm。结果 维生素 C、对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏分别在 19.8 ～118.8 μg/mL、42 ～252 μg/mL、0.42 ～2.52 μg/mL 范围内呈良好的线性关系，平均回收率均不低于98%。不同厂家维C银翘片的溶出度差异较大。结论 该方法简便快捷、结果准确可靠，可用于维C银翘片中3种西药成分的溶出度测定。

高效液相色谱法；维C银翘片；溶出度；维生素C；对乙酰氨基酚；马来酸氯苯那敏

维C银翘片是一种常用的中西药复方制剂，主要由金银花、连翘等中药成分与维生素C、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏3种西药成分制成。具有辛凉解表、清热解毒之功效，常用于缓解流行性感冒引起的发热头痛、咳嗽口干、咽喉疼痛等症。《中国药典》2010年版一部收载了维C银翘片［1］，采用高效液相色谱法（HPLC）分别测定3种西药成分的量，但对溶出度并未做出规定。目前中国药典对中药固体制剂没有溶出度的测定要求，这不仅影响中药制剂体内生物利用度的评价，不能保证临床用药的安全有效，也可能给生产带来一定盲目性。有文献报道［2-5］维C银翘片的溶出度测定，但只测定了单一组分对乙酰氨基酚，而未对其它成分进行测定。本实验建立了HPLC法同时测定维C银翘片中维生素C、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏3种西药成分的溶出度，并进行了方法学验证。实验考察了国内不同厂家11个批次的维C银翘片，为改进生产工艺，评价产品内在质量提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 P3000高效液相色谱仪（北京创新通恒科技有限公司）；溶出仪（D-800L型智能溶出仪，天津大学无线电厂制造）；超声波清洗器（QT系列，天津市瑞普电子仪器公司）；真空泵（SHD-Ⅲ型循环水式多用真空泵，保定高新区阳光科教仪器厂）；PHS-3C型酸度计（上海理达仪器厂）；电子天平（AG204，瑞士METTLER TOLEDO）。

1.2 试药 磷酸、盐酸、磷酸二氢钾和四丁基溴化铵均为分析纯；乙腈（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；蒸馏水；对乙酰氨基酚、维生素C、马来酸氯苯那敏对照品均由保定长天药业提供。

市售维C银翘片（规格：维生素C 49.5 mg、对乙酰氨基酚105 mg、马来酸氯苯那敏1.05 mg）：A厂（糖衣片，批号 090946）；B厂（糖衣片，批号09115353）；C厂（糖衣片，批号20090801）；D厂（糖衣片，批号091102）；E厂（糖衣片，批号20090301）；F厂（糖衣片，批号090837）；G厂（糖衣片，批号20091102）；H厂（糖衣片，批号100203）；I厂（糖衣片，批号091118）；J厂（薄膜衣片，批号091202）；K厂（薄膜衣夹心片，批号M00044）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Welchrom-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相为 A：0.05 mol/L 磷酸二氢钾（含0.5% 四丁基溴化铵，磷酸调pH至3.5）；B：乙腈。进样量为20 μL，柱温为室温。梯度洗脱程序见表1。

表1 梯度洗脱程序Tab.1 Gradient elution program

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取维生素C、对乙酰氨基酚与马来酸氯苯那敏对照品适量，精密称定，加0.1 mol/L HCl溶液溶解并稀释成每1 mL含维生素C 99 μg、对乙酰氨基酚210 μg与马来酸氯苯那敏2.10 μg 的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品20片，除去包衣，精密称定，研匀后精密称取细粉适量（约相当于一片量），置于100 mL量瓶中，加0.1 mol/L HCl溶液适量，超声使其溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品贮备液。精密量取供试品贮备液5 mL置于25 mL量瓶中，用0.1 mol/L HCl溶液稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。

2.3 系统适应性 分别取2.2项下的对照品溶液和供试品溶液，在2.1项色谱条件下进行色谱分析，HPLC谱图见图1，结果维生素C、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏三者的分离度均大于1.5，理论塔板数以对乙酰氨基酚计不低于5 000。

图1 对照品（A）、对照品局部放大（B）和样品局部放大（C）的HPLC色谱图Fig.1 Chromatograms of reference substance（A）、enlarged reference substance（B）and enlarged sample（C）

2.4 线性关系考察 取2.2项下对照品贮备液，分别 精密量取1、2、3、4、5、6mL分置于25mL量瓶中，用0.1mol/LHCl溶液稀释至刻度，摇匀，制成一系列不同质量浓度的溶液，按照2.1项下的色谱条件测定。结果表明，3种组分的峰面积与溶液质量浓度之间线性关系良好。见表2。

表2 3种组分的回归方程、相关系数和线性范围Tab.2 Regression equation，correlation coefficients and linear ranges of the three components

2.5 精密度试验 取2.2项下的对照品溶液，连续进样5次，计算维生素C、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏3种成分峰面积的 RSD分别为0.7%，0.3%，1.3%。表明精密度良好。

2.6 检测限与定量限 维生素C、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏三者的检测限分别为2.57 μg/L，1.98 μg/L，8.34 μg/L（S/N=3）；定量限分别为8.55 μg/L，6.59 μg/L，27.8 μg/L（S/N=10）。

2.7 稳定性试验 取2.2项下的供试品溶液，于4℃避光冷藏放置，分别于 0、0.5、1.0、2.5、4.5、6.5、8.0、10.0、12.0 h 进行测定，经计算在 12 h 时对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏峰面积的RSD分别为0.8%和0.7%，表明这两种成分在12 h内稳定。维生素C在0～12.0 h内峰面积的RSD呈递增趋势，6.5 h时 RSD 即为2.1%，降解率达5.3%，表明维生素C稳定性较差，待测溶液需在6 h内进样分析。

2.8 回收率试验 精密称取已测定的样品适量（约相当于对乙酰氨基酚10.5 mg）共5份，分别精密加入10 mL 2.2项下的对照品贮备液，置于100 mL量瓶中，用0.1 mol/L HCl溶液稀释至刻度，摇匀，滤过。按2.1项色谱条件测定，计算回收率。测定结果见表3。

表3 3种组分回收率测定结果 （n=5）Tab.3 Recovery results of three components （n=5）

2.9 溶出度实验条件的选择

2.9.1 转法的选择 《中国药典》2010年版二部附录中收载的溶出度测定方法有转篮法、桨法及小杯法［6］。维C银翘片中马来酸氯苯那敏规格虽小，但对乙酰氨基酚规格较大，不宜采用小杯法；转篮法和桨法，都可用于片剂，但考虑到本品含有大量中药成分，且含中药浸膏，在溶出过程中可能会使转篮筛网堵塞，故采用浆法。

2.9.2 转速的选择 浆法转速一般为50～75 r/min［7］，通过对比50 r/min 与 75 r/min 发现，转速为50 r/min时，片剂存在堆积现象，影响药物溶出，故采用转速75 r/min。

2.9.3 溶出介质的选择 常用的溶出介质［8］有：水、0.1 mol/L HCl溶液及磷酸盐缓冲液。通过参考文献［9-10］，且考虑到3组分的溶解性，采用500 mL 0.1 mol/L HCl溶液作为溶出介质。

2.9.4 溶出曲线的绘制 取本品，按照溶出度测定法（中国药典2010年版二部附录XC第二法），以0.1 mol/L HCl溶液500 mL为溶出介质，转速为75 r/min，分别在 15、30、45、60、75 和 90 min 定点取样5 mL，（同时补充相同温度下的溶出介质5 mL），用0.45 μm微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。同时取2.2项下的对照品溶液，按2.1项下色谱条件测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算各个时间点的累积溶出度，溶出曲线见图2。

图2 样品溶出度曲线Fig.2 Dissolution curves of sample

2.10 样品溶出度测定 取国内11个厂家的维C银翘片各一个批次，按2.9项下的方法测定各组分90 min时的溶出度，结果见表4。

表4 11批样品的溶出度测定结果 （n=6）Tab.4 Dissolution results of samples （n=6）

3 讨论

根据文献报道［11-12］，为保证检测灵敏度，采用规格最小的马来酸氯苯那敏的吸收波长为检测波长。马来酸氯苯那敏的最大吸收波长为219 nm和260 nm。经实验发现，在219 nm检测时，杂峰较多，干扰待测组分测定。故采用260 nm作为检测波长。

《中国药典》2010年版一部采用HPLC法分别测定维C银翘片中维生素C、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏3种西药成分的量，样品前处理复杂，且不适用于同时测定3种西药成分的溶出度。实验曾采用甲醇-乙腈-0.02% 磷酸（5 ∶10 ∶85）；甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶0.2）；0.05 mol/L磷酸二氢钾（含1% 三乙胺，pH 3.0）-乙腈（75∶25）等作为流动相，但维生素C与溶剂峰重叠。加入0.5%四丁基溴化铵，与维生素C形成离子对，可降低其极性，延长保留时间，使其避免受溶剂峰的干扰，而四丁基溴化铵对碱性化合物（氯苯那敏）作用很小或几乎无作用［13］。同时考察了不同pH值的磷酸盐缓冲液对各待测组分的影响，结果当pH值为3.5时，各组分峰形较好。此外，氯苯那敏极性弱，保留时间过长，故采用梯度洗脱，使三组分在15 min内全部出峰，不仅可以缩短分析时间，还可以改善峰形，提高柱效。

4 结论

本实验结果表明，同是糖衣片，不同厂家的维C银翘片溶出度存在明显差异；薄膜衣片比糖衣片的溶出要好；某些厂家可能考虑到维生素C易氧化和吸潮，做成薄膜夹心片，但工艺不成熟，片心的溶出缓慢。由此可知，不同厂家的生产工艺是影响药物溶出的重要因素。维C银翘片是中西药复方制剂，中药成分多，使其黏度较大，这势必会影响药物溶出情况，从而影响药物的吸收和临床疗效。因此，对维C银翘片进行溶出度研究具有重要意义，并为生产厂家改进生产工艺提供依据。利用本法测定维C银翘片的溶出度，简便易行，准确可靠，可用于维C银翘片的质量控制。

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Dissolution determination of Vitamin C Yinqiao Tablet by HPLC

GUO Huai-zhong1，2， PANG Xiao-min1， WANG Jin-wen1， JIANG Wen-yue1， ZHANG Chun-mei1

（1.College of Pharmacy，Hebei University，Baoding 071002，China；2.Hebei Provincial Key Laboratory of Drug Quality Research，Baoding 071002，China）

AIMTo establish a method for determining the dissolution of Vitamin C，paracetamol and chlorphenamine maleate in Vitamin C Yinqiao Tablet（Lonicerae japonicae Flos，Forsythiae Fructus，Vitamin C，paracetamol，chlorphenamine maleate，etc）.METHODSPaddle method was applied，and 0.1 mol/L HCl solution was used as the dissolvent，the rotation speed was kept at 75 r/min，90 min sampling time.HPLC conditions included Welchrom-C18column（4.6 mm × 150 mm，5 μm），mobile phase of A 0.05 mol/L potassium dehydrogenized phosphate（containing 0.5%tetra butyl ammonium bromide，phosphoric acid adjusted pH to 3.5）；B acetonitrile.Gradient elution was employed.The flow rate was 0.8 mL/min and the detection wavelength was set at 260 nm.RESULTSIt presented a good linearity of Vitamin C，paracetamol and chlorphenamine maleate in the ranges of 19.8-118.8 μg/mL、42-252 μg/mL、0.42-2.52 μg/mL，respectively.Their average recoveries were not less than 98%.Vitamin C Yinqiao Tablet from different pharmaceutical factories had different dissolution.CONCLUSIONThe method is rapid，simple and accurate，and it can be used for the determination of dissolution of Vitamin C Yinqiao Tablet.

HPLC；Vitamin C Yinqiao Tablet；dissolution；Vitamin C；paracetamol；chlorphenamine maleate

R927.2

A

1001-1528（2011）07-1178-05

2010-09-11

国家自然科学基金（20905019；21011140338）；河北省自然科学基金（B2010000209）；河北大学自然科学基金（2007-111）

郭怀忠（1968—），男，博士，主要从事中药质量控制及其药效学研究。Tel：（0312）5971107，E-mail：ghuaizh@yahoo.com.cn