血管紧张素转换酶基因多态性对肥胖儿童脂质代谢的影响

郎 琼，刘长云，朱海玲，李 梅，陈 雪

(潍坊医学院临床学院，山东潍坊 261031)

2000年肥胖症被 WHO定义为全球范围的流行病。众多学者认为，与肥胖有关的代谢紊乱、心血管疾病的早期改变可能从儿童时期就已经开始[1]。2009年 8月 ～2010年 7月，我们观察了肥胖儿童血管紧张素转换酶(ACE)基因的多态性及其与脂质代谢的关系，旨在进一步探讨儿童肥胖症的发病机制。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择 2009年 8月 ～2010年7月在我院儿科就诊、住院及学生体检时发现的 6～14岁肥胖儿童 116例(观察组，男 68例，女 48例)及健康儿童 78例(对照组，男 42例，女 361例)。临床均排除与遗传、内分泌、代谢及中枢神经系统有关的肥胖及肥胖综合征，血脂异常所致的全身性疾病。采用WHO推荐的儿童标准身高、体质量值为参照人群。凡体质量超过按身高计算的平均标准体质量 20%者定为肥胖。

1.2 方法

1.2.1 血脂水平测定 受试者禁食 12 h，抽取外周静脉血 7 ml，其中 2 ml应用日本产 AU600 Olympus自动生化分析仪测定 TC、TG、LDL-C及 HDL-C。另外 5 ml用于提取 DNA。

1.2.2 ACE基因检测 ACE基因序列引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。抽取静脉血5 ml，0.5%EDTA-Na21 ml抗凝。常规方法提取基因组 DNA，并用岛津 UA-150可见紫外分光光度计检测基因组 DNA的浓度和纯度。反应体系包括:10×Buffer 5 μl，2 mmol/L dNTP 5 μl，引物各 1 μl，TaqDNA多聚酶 0.125 μl，25 mmol/L MgCl23 μl，模板 DNA 1μl，加 ddH2O至 50μl。混匀并轻轻震荡后放入 PCR扩增仪(9600型扩增仪)，94℃预变性5 min，94℃变性 1 min，58℃变性 1 min，72℃延伸1 min，30个周期的循环，最后 72℃延伸 5 min。PCR产物检测用 2%的琼脂凝胶电泳鉴定提取物，用 DL2000Marker做核酸相对分子质量标准，EB染色，将扩增产物和 Marker放入不同凝胶孔并在恒压120 V电泳 20 min。然后在波长紫外灯下观察目的条带，将所需条带拍照。DNA序列分析根据电泳结果，取 ACE基因的 3种基因型样本的 PCR产物各100μl作为测序标本，在 ABI-377测序仪上进行，由上海生工生物工程技术服务有限公司完成 。

1.3 统计学方法 采用 SPSS13.0统计软件。组间计数资料比较采用 χ2检验，计量资料采用 t检验或F检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血脂水平 两组血脂水平比较见表1。

表1 两组血脂水平比较(mmol/L，±s)

表1 两组血脂水平比较(mmol/L，±s)

注:与对照组比较，*P＜0.01，△P＜0.05

观察组1161.58±0.47*3.89±0.63△ 1.20±0.45*2.03±0.42△对照组 781.36±0.52 3.68±0.49 1.42±0.43 1.89±0.36

2.2 ACE基因及其多态性 PCR扩增后的产物经酶切后发现有 2个基因片段，分别为 190 bp(D)和490 bp(I)。构成 3种基因型 ，分别为 DD、DI、II。详见表2。

2.3 不同 ACE基因型肥胖儿童的血脂水平 见表3。

表2 两组ACE基因型及基因频率(%)

表3 不同ACE基因型肥胖儿童血脂水平(mmol/L，±s)

表3 不同ACE基因型肥胖儿童血脂水平(mmol/L，±s)

注:与 II型比较，*P＜0.01，△P＜0.05

基因分型 n TG TC HDL-C LDL-C DD型 45 1.73±0.53* 4.09±0.51* 1.09±0.46* 2.17±0.48*DI型 37 1.67±0.59* 3.92±0.48△ 1.16±0.47△ 2.13±0.41*II型 34 1.32±0.55 3.65±0.53 1.42±0.50 1.67±0.51

3 讨论

高脂血症是高血压、冠心病等心脑血管疾病的独立危险因素[2]。本研究发现肥胖儿童较健康儿童 TC、TG、LDL-C水平明显升高，HDL-C水平降低，与国外众多研究一致[3，4]。提示肥胖儿童已有明显脂质代谢紊乱。

人类 ACE基因位于 17q23，全长 21 kb，含 26个外显子和 25个内含子。近年研究发现 ACE基因存在多态性，其中具有生物学意义的是第16内含子 I/D多态性。ACE是一种哺乳动物组织中普遍存在的 Zn2+依赖型羧基二肽酶，为膜整合单链蛋白，分子量为 13～16万。传统观点认为 ACE基因多态性影响高血压、冠心病等心脑血管疾病发生率的可能机制为 ACE基因多态性导致血清 ACE水平不同，ACE是肾素—血管紧张素系统和缓激肽系统的关键酶，可将 AngⅠ转化为 AngⅡ，使缓激肽失活从而导致血管收缩，加压作用增强，局部组织的血流减少;心肌和血管平滑肌内的蛋白合成增多、增生肥厚，进而促使动脉粥样硬化的发生。另外，可直接作用于肾上腺皮质，促进醛固酮的分泌，进而影响肾小管和集合管对 Na+的重吸收，促进对 K+的分泌，调节水盐代谢。在心血管疾病的发病中起关键作用[5]。多项研究证明，ACE基因 I/D多态性与血清ACE水平显著相关，基因型为 DD者血清 ACE含量显著高于 II基因型者，基因型为 DI者介于二者之间[6]。

本研究结果显示，ACE不同基因型者的血脂水平存在差异，表现为 DD型肥胖儿童具有较高的血脂水平，与张赛丹等[7]研究结果一致，提示 ACE不同基因型影响心血管疾病的发生率可能是通过调节血脂水平进行的。对 D等位基因的肥胖患儿的血脂水平应尽早干预。

[1]聂景蓉，高清源，谭章喜，等.常德市少年儿童肥胖症及相关疾病的流行病学调查[J].卫生职业教育，2010，28(7):110-112.

[2]周海歌.单纯性肥胖症对儿童健康的损害[J].中国临床康复，2006，10(12):157-159.

[3]Park KS，Lee YS，Park HW，et al.Factors associated or related to pathological severity of nonalcoholic fatty liver disease[J].Korean J Intern Med，2004，19(1):19-26.

[4]Rita KA，Andre T，Khosrow A.Emergence of the metabolic syndrome in children an epidemiological overview and mechanistic link to dyslipdemia[J].Clin Biochem，2003，36(4):413-420.

[5]Kim K.Association of angiotensin-converting enzyme insertion/deletion polymorphism with obesity，cardiovascular risk factor and exercise-mediated changes in Korean women[J].Eur J Appl Physiol，2009，105(6):879-887.

[6]刘丽华，徐波，徐应军，等.血管紧张素转换酶基因多态性与血管紧张素转换酶和血管紧张素Ⅱ水平的关系[J].中国医药，2007，2(4):195-197.

[7]张赛丹，桂庆军，裴志芳，等.血管紧张素转换酶基因多态性对血管紧张素转换酶水平及血脂的影响[J].中国动脉硬化杂志，2004，12(3):343-346.