中药增效抗菌复方对小鼠免疫功能的影响

王 新，崔一吉吉，邵 红，张秀英

(1.东北农业大学动物医学学院，黑龙江 哈尔滨 150030；2.黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江 大庆 163319)

中药增效抗菌复方，是指在经典验方“白头翁汤”的基础上进行加减，以黄芩、秦皮、苦参和白头翁为主药，同时添加对中药有抗菌增效作用的甲氧苄啶而组成。经体外抗菌试验和小鼠体内抗菌试验证实，中药增效抗菌复方对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌均有较强的抗菌能力[1]。中药的抗感染作用不仅是对病原菌的直接抑制作用，更重要的是中药对机体免疫功能的调节作用。因此，研究中药增效抗菌复方对机体免疫功能的影响，可以进一步揭示药物在动物体内发挥抗感染作用的机制。本研究通过分析中药增效抗菌复方对小鼠免疫功能的影响，研究该药物在动物体内抗感染作用的机制，为开发高效的中西药复方抗菌制剂提供实验依据。

1 材料和方法

1.1 实验动物 体质量为20 g左右的昆明种小鼠300只。

1.2 主要试剂和仪器 甲氧苄啶购自太原市康瑞宝兽药制造有限公司；秦皮、苦参、白头翁和黄芩均购自大庆福瑞邦医药有限公司；溶菌酶试剂盒购自南京建成生物工程研究所；刀豆蛋白A和MTT试剂盒购自江苏碧云天生物技术有限公司；Coulter JT血细胞分析仪为美国贝克曼库尔特有限公司产品；DG5033A酶联免疫检测仪为南京华东电子集团医疗装备有限责任公司产品。

1.3 药物的配制 采用水提醇沉淀法将各中药材分别制成生药含量1 g/mL的药液，将黄芩、秦皮、白头翁和苦参药液按照1∶4∶1∶2的比例混合，再按5 mg/g的剂量加入甲氧苄啶，制成中药增效抗菌复方。100℃流通蒸汽灭菌20 min，4℃保存备用。

1.4 试验动物分组及处理 将40只小鼠随机分为4组，每组10只，雌雄各半，隔笼饲养。对照组每只小鼠腹腔注射生理盐水0.5 mL；其他3组小鼠分别按照低剂量(1 g/kg)、中剂量(5 g/kg)、高剂量(10 g/kg)进行腹腔注射中药增效抗菌复方0.5 mL。均为每日1次，连续15 d。

1.5 指标测定 给药后，对小鼠血液学指标和免疫器官指数进行测定，分别按照文献[2]中的半体内法、乳酸脱氢酶释放法和MTT法测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、NK细胞活性和脾淋巴细胞增殖功能。按照文献[3]的方法测定血清溶血素。

1.6 数据处理 试验数据采用SPSS13.0软件处理，数据以平均值()±标准差(SD)表示。

2 结果与讨论

2.1 中药增效抗菌复方对小鼠血液学指标的影响中药增效抗菌复方的高剂量组和中剂量组的血液学指标与对照组相比(淋巴细胞除外)，差异均显著(p<0.05)，而低剂量组与对照组相比，差异不显著(p>0.05)(表1)。结果表明，中药增效抗菌复方可以对小鼠血液学指标产生明显的影响。

表1 小鼠血液学指标结果(±SD)Table 1 The results of hematological indices in mice(±SD)

表1 小鼠血液学指标结果(±SD)Table 1 The results of hematological indices in mice(±SD)

注：同列进行比较，含有相同字母者差异不显著(p>0.05)，含有不同字母者差异显著(p<0.05)，以下各表相同。Note:Comparison between the same column,with the same letter are not significantly different(p>0.05),with different letters were significantly different(p<0.05),the same as the following table.

2.2 对小鼠免疫器官指数的影响 胸腺和脾脏指数可以反映免疫器官的发育和免疫细胞的功能状况，间接反映了机体的免疫水平[4]。中药增效抗菌复方可以明显提高胸腺和脾脏指数，与对照组比较差异显著(p<0.05)(表 2)。

2.3 对巨噬细胞的吞噬功能和NK细胞活性的影响巨噬细胞的吞噬能力是衡量机体非特异性免疫功能的指标之一，而NK细胞属于非特异性免疫细胞，在机体抗肿瘤和早期抗病毒和细胞内寄生菌感染的免疫过程中起重要作用。中药增效抗菌复方可以提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能和NK细胞活性，并且随剂量增加而增强。与对照组相比差异显著(p<0.05)(表3)。但当剂量增加到一定程度后，其作用效果不再增强(中剂量组和高剂量组之间的差异不显著，p>0.05)。试验结果表明中药增效抗菌复方可增强小鼠非特异性免疫功能。

2.4 对小鼠脾淋巴细胞增殖功能和血清溶血素水平的影响 血清溶血素是反映体液免疫功能的重要指标，淋巴细胞增殖能力可直接反映细胞免疫功能状态。中药增效抗菌复方中剂量组、高剂量组与对照组比较，可显著提高血清溶血素水平和小鼠脾淋巴细胞增殖功能(p<0.05)；但低剂量组与对照组相比，差异不显著(p>0.05)(表4)。试验结果表明中药增效抗菌复方可明显增强小鼠的特异性免疫功能。

表2 对小鼠免疫器官脏器指数的影响()Table 2 Effects of viscera index of immune organs in mice()

表2 对小鼠免疫器官脏器指数的影响()Table 2 Effects of viscera index of immune organs in mice()

组别 脾脏指数 胸腺指数GroupsSpleen index(mg/g)Thymus index(mg/g)低剂量组Low dose group4.87±0.82b3.86±0.51b中剂量组Middle dose group5.56±0.53c4.77±0.39c高剂量组High dose group6.44±0.37d4.98±0.37d对照组Control group4.00±0.69a3.47±0.42a

表3 对小鼠巨噬细胞的吞噬功能和NK细胞活性的影响()Table 3 Effects of macrophage phagocytosis and NK cells activity in mice()

表3 对小鼠巨噬细胞的吞噬功能和NK细胞活性的影响()Table 3 Effects of macrophage phagocytosis and NK cells activity in mice()

组别 吞噬率 吞噬指数NK细胞活性GroupsPhagocytic percentage(%)Phagocytic indexNK cell activity(%)低剂量组Low dose group30.10±3.38a39.20±3.16a28.41±5.45a中剂量组Middle dose group37.30±4.50b47.90±4.20b38.92±8.62b高剂量组High dose group36.20±4.80b50.10±3.93b40.76±7.91b对照组Control group31.90±4.33a40.90±6.64a26.57±6.87a

表4 对小鼠脾淋巴细胞增殖功能和血清溶血素水平的影响()Table 4 Effects of spleen lymphocyte proliferation and the level of serum hemolysin in mice()

表4 对小鼠脾淋巴细胞增殖功能和血清溶血素水平的影响()Table 4 Effects of spleen lymphocyte proliferation and the level of serum hemolysin in mice()

在确定中药增效抗菌复方抗菌作用的基础上，进一步探索其对机体免疫功能的影响，从而较全面的揭示其在机体内发挥抗感染作用的机制。中药增效抗菌复方中含有黄芩苷、白头翁糖蛋白和苦参碱等调节机体免疫功能的成分[5-7]。因此，其对小鼠免疫功能的增强作用不是单一药物的单独作用，而是方中药物综合作用的结果，详细机制有待于进一步研究。

[1]王新，崔一吉吉，韩铁锁.中药抗菌复方Ⅰ的筛选及甲氧苄啶对其抗菌增效的研究[J].中华中医药杂志，2009，24(7)：969-972.

[2]付俊鹤，余宙，胡居吾，等.精制蜂胶对小鼠免疫功能的影响[J].食品科学，2009，30(19)：286-290.

[3]张建华，姚素波，刘洁，等.绿原酸对小鼠免疫功能的影响[J].华西药学杂志，2009，24(4)：343-344.

[4]陈冬金，黄志坚，陈强.复方黄芩颗粒剂对小鼠免疫功能的影响[J].江西农业大学学报，2007，29(5)：809-812.

[5]戴玲，王华，陈彦.白头翁糖蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞免疫的增强作用[J].中国生化药物杂志，2000，25，(5)：230-231.

[6]呙爱秀，黄兴国，雷黎明.苦参碱对免疫功能低下小鼠免疫功能的影响[J].中国现代药物杂志，2008，2(11)：7-9.

[7]雷芳.黄芩苷药理作用研究进展[J].中国药业，2010，19(15)：87-88.