浅谈口蹄疫疫苗生产过程中消毒和消毒剂的应用

2011-05-18吴必武

云南畜牧兽医 2011年4期

吴必武

(云南省保山疫苗厂，云南保山 678000)

口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)感染引起的偶蹄动物共患的一种急性、烈性、接触性传染病。口蹄疫病毒对酸碱都特别敏感，在pH 7.2～7.6时稳定性较强;在低温下十分稳定，但对热敏感;经紫外线照射后，其病毒RNA的尿嘧啶形成二聚物，致使FMDV迅速被灭活;电离辐射也可使病毒灭活;FMDV不含有囊膜，所以对脂溶剂(氯仿、丙酮等)有抵抗力。目前控制和扑灭口蹄疫最有效和最经济的手段是接种安全有效的疫苗。我国主要应用于预防接种的是常规(细胞培养)灭活疫苗。

在疫苗生产过程中消毒与灭菌的方法是否得当，效果是否可靠，是疫苗生产能否顺利进行的重要影响因素。现对口蹄疫疫苗生产过程中消毒与消毒剂的应用、种类及影响因素等方面进行探讨，这对口蹄疫疫苗的规范生产和质量控制具有实用意义。

1 口蹄疫疫苗生产过程常用消毒方法

为了保证细胞培养与病毒接种的正常进行，疫苗生产过程中所用的大量玻璃器皿、橡胶制品、各种溶液、金属器械及洁净工作服均需要消毒灭菌。其中无菌间等生产车间、人员手部以及各种金属器械一般用化学方法或紫外线辐射进行消毒。

1.1 紫外线消毒

紫外线的杀菌波长范围是265～268 nm，它可以引起DNA中形成胸腺嘧啶二聚体，干扰DNA复制，从而导致细菌变异或死亡。紫外线消毒对被消毒物品的损伤小，无残留毒性，且经济方便，对设备要求不高，使用范围广，安全可靠，但紫外线的穿透能力弱，不能通过普通玻璃、尘埃，只能用于消毒物体表面、空气及无菌操作室，也可用于不耐热物品表面消毒。

1.1.1 对空气消毒

对空气消毒的最好方法之一是使用空气过滤和紫外线照射相结合。一般每10～15 m2面积安装30 W紫外线灯管1支，灯管安装于距地面2.0～2.5 m高处，由于空气能自由流动，所以一般都能得到消毒。在室温20～40℃，相对湿度不高于60%时，照射30 min即可达到消毒要求。

1.1.2 对水的消毒

用紫外线消毒水的优点是水中不必添加其它消毒剂或提高温度。紫外线消毒水时，照射剂量要在90 000μW·s/cm2以上，且水层不宜超过2 cm。紫外线在水中穿透力，随深度的增加而降低，如表1。

表1 蒸馏水深度对紫外线穿透的影响

1.1.3 对污染表面的消毒

在无菌间，紫外线等一般安装在层流罩下，灯管功率不少于2W/m2，照射时间为30 min，消毒的有效范围在1.5～2.0 m处，照射剂量要在10 000μW·s/cm2以上。在开始工作和工作完毕后，打开紫外灯，使工作台面完全暴露，照射30 min，可达到消毒目的。使用时应注意要保证足够的辐射强度和足够的照射时间，以确保消毒的效果。

1.2 化学消毒

消毒剂对一切细胞原生质均有毒性，其作用机制有:使菌体蛋白凝固变性;干扰细菌酶的活性，抑制细菌代谢和生长;损害细胞膜的结构，改变其通透性，破坏其生理功能等，从而起到消毒灭菌作用。生产车间常用的化学消毒剂有甲醛、氢氧化钠、新洁尔灭、甲酚皂等。

1.2.1 对无菌间的消毒

每次使用无菌间后，必须用0.2%新洁尔灭溶液、5%甲酚皂溶液擦拭台面及各种器皿，并用上述溶液擦拭地面。新洁尔灭溶液和甲酚皂溶液应交替使用，以防细菌产生抗药性。除此之外，还应定期或不定期的用化学熏蒸法进行消毒，一般每月1次。对无菌间的熏蒸消毒一般采用甲醛熏蒸和过氧乙酸熏蒸，但这两种方法所需熏蒸时间长，均在12～24 h，并且由于熏蒸后消毒剂残留严重，对人体影响较大，消毒后无菌间不能立即使用，影响生产的正常进行，所以在疫苗生产中不常使用，只有在更换病毒血清型时才用。目前通常采用臭氧熏蒸法，该法具有杀菌消毒谱广、杀菌消毒率高、杀毒速度快(比甲醛熏蒸缩短6倍)、安全无残毒等优点，在消毒完毕30 min后，人员即可进入，不影响正常生产。

根据《消毒技术规范》和实践应用数据，在GMP制药车间的洁净区，洁净级别十万级消毒需要保持臭氧浓度为10 mg/m3，万级为30 mg/m3。在消毒过程中湿度要控制在70% ～80%，低于45%时消毒效果就会受到很大影响。

1.2.2 对物品的消毒

进入万级洁净区的物品，除用热力灭菌之外，其余物品如血清瓶、消毒液等，均需用0.2%新洁尔灭或5%甲酚皂擦拭容器外壁消毒。病毒区使用过的细胞瓶在装入灭菌柜之前要用4%NaOH 500 mL涮洗内壁，冻破的病毒液瓶应浸泡在4%NaOH中24 h以上。各种设备、金属仪器如干燥箱、高压柜、显微镜等应定期用消毒液擦拭，一般每3天1次。在细胞的传代过程中，操作人员的手每接触一次细胞瓶口，都要用酒精棉球擦拭手及瓶口。