金辛镇痛液对急性血瘀证大鼠血液流变学及内皮功能的影响*

周 利，祁 青，张红星，易艳东，林世和，黄国付，邹 燃，安 雪，唐 雷

（湖北省武汉市中西医结合医院针灸科，武汉 430022）

金辛镇痛液对急性血瘀证大鼠血液流变学及内皮功能的影响*

周 利，祁 青，张红星，易艳东，林世和，黄国付，邹 燃，安 雪，唐 雷

（湖北省武汉市中西医结合医院针灸科，武汉 430022）

[目的]观察金辛镇痛液对急性血瘀大鼠血液流变学、血浆内皮素-1（ET-1）和一氧化氮（NO）的影响，以探讨其活血化瘀作用。[方法]以皮下注射大剂量盐酸肾上腺素附加冰水浴造成大鼠急性血瘀模型，检测大鼠血液流变学指标、血浆ET-1和NO。[结果]模型对照组与正常对照组中血液流变学比较，（P＜0.01），差异有统计学意义，并结合大鼠表征证明造模成功。麝香舒活精组、金辛镇痛液低中高剂量组与模型组比较，能不同程度地降低大鼠血液流变学指标，并且大鼠血浆ET-1减少，而NO明显增多，P＜0.01或P＜0.05。[结论]金辛镇痛液对血瘀证模型大鼠有着明显的活血化瘀作用。

金辛镇痛液；急性血瘀模型；血液流变学；内皮素-1；一氧化氮

金辛镇痛液是本院中心实验室的中药外用制剂，主要成分由洋金花、细辛、乙醇等组成。其对动物急慢性炎症、疼痛模型有明显的抗炎、镇痛作用[1]。并且临床应用于痹症的关节、肌肉、筋骨疼痛等疗效确切[2]。为了探讨金辛镇痛液的活血化瘀作用，在此进行了急性血瘀模型大鼠血液流变学的研究，观察了该药对急性血瘀大鼠内皮功能的影响，现将结果报道如下。

1 材料

1.1 动物 SPF级SD大鼠，雌雄各半（180～220）g，由武汉大学动物实验中心提供，许可证号：SCXK（鄂）2008-0004，合格证号为00008546。

1.2 药物与试剂 金辛镇痛液由湖北省武汉市中西医结合医院实验中心提供，批号：051106；盐酸肾上腺素注射液（武汉远大制药集团有限公司，批号：H42021700）；麝香舒活精(黄石飞云制药有限公司，批号:050701)；肝素（万邦医药，批号：H32020612）；内皮素-1（ET-1）和一氧化氮（NO）试剂盒均由武汉华瑞康生物试剂有限公司提供。

2 方法

2.1 动物分组及给药 取大鼠60只，按体质量用随机数字表法分为6组，每组10只。A组为正常对照组，B组为模型对照组，C组麝香舒活精组，D、E、F组分别为金辛镇痛液低剂量组（100%金辛镇痛液）、中剂量组（200%金辛镇痛液）、高剂量组（400%金辛镇痛液）。各组大鼠在乙醚浅麻下常规方法背部脱毛，面积约8 cm2。第2天，于脱毛区涂以相应药物，每只大鼠用药5mL/kg，每日2次，连续给药5 d。

2.2 动物造模及采血 于第6天第1次给药后1 h，除A组外，其余各组均于皮下注射盐酸肾上腺素0.8mL/kg，共2次，两次间隔4 h。在第1次注射盐酸肾上腺素后2 h将大鼠浸入冰水中游泳5min，以造成急性血瘀模型[3]。造模后将所有大鼠禁食12h，次晨用10%六合氯醛0.3mL/kg腹腔注射麻醉，腹主动脉采血。

2.3 指标观察 血液流变学指标测定：取血5mL肝素抗凝，送至本院检验科测定，内容包括：全血黏度切变率（1.00，5.00，30.00，200.00）、血浆黏度、红细胞聚集指数、全血高切相对指数、全血低切相对指数。

血浆ET-1和NO测定：取血2mL，3 000 r/min，离心10min分离血浆，采用酶联免疫吸附法测定血浆ET-1含量，采用硝酸还原酶法测定血浆NO含量。全部样品测定均由专人负责，并严格按照试剂盒说明书所提供的方法操作。

2.4 统计学处理 本研究采用SPSS 17.0版软件对所得数据分析处理，以均数±标准差（±s）表示，P＜0.05表示具有统计学意义。计量资料组间差异比较采用ANOVA检验。

3 结果

3.1 对血瘀证模型大鼠血液流变学的影响 模型对照组与正常对照组比较，血液流变学变化有统计学意义（P＜0.01），并结合生物表征，血瘀模型成立。金辛镇痛液3个剂量组和阳性对照麝香舒活精组都能不同程度改善上述血液流变学的变化，与模型对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.01或 P＜0.05），提示金辛镇痛液有改善急性血瘀大鼠血液流变学的作用，降低血液高浓、黏、聚、凝状态。见表1，表2。

表1 对全血黏度的影响（±s）Tab.1 Effecton whole blood viscosity（±s）mPa/秒

表1 对全血黏度的影响（±s）Tab.1 Effecton whole blood viscosity（±s）mPa/秒

注：与正常对照组比较，*P＜0.01；与模型对照组比较，△P＜0.01或□P＜0.05。

全血黏度200/秒 30/秒 5/秒 1/秒正常对照组 5.03±0.42 7.09±0.55 13.10±1.21 32.16± 9.91模型对照组 7.76±0.89 9.43±0.94*18.16±1.85*46.28±18.33*麝香舒活精组 6.25±0.45△ 8.16±0.9△ 15.35±1.26△ 35.83± 6.80□金辛镇痛液低剂量组 6.23±0.62△ 7.82±0.79△ 15.08±1.53△ 35.84± 9.69□金辛镇痛液中剂量组 5.77±0.44△ 7.39±0.70△ 14.26±0.95△ 34.32±10.86△金辛镇痛液高剂量组 5.14±0.41△ 7.20±0.60△ 13.78±1.21△ 32.93± 9.85△组别

表2 对血浆黏度、红细胞聚集指数、全血高低相对指数的影响（±s）Tab.2 Effecton plasma viscosity,erythrocyte aggregation index and wholeblood high or low relative index（±s）

表2 对血浆黏度、红细胞聚集指数、全血高低相对指数的影响（±s）Tab.2 Effecton plasma viscosity,erythrocyte aggregation index and wholeblood high or low relative index（±s）

注：与正常对照组比较，*P＜0.01；与模型对照组比较，△P＜0.01 或□P＜0.05。

全血低切相对指数正常对照组 1.37±0.08 7.09±0.93 3.16±0.64 17.91±2.04模型对照组 1.98±0.17*9.90±1.09* 4.36±0.72* 25.46±2.78麝香舒活精组 1.78±0.16□ 8.62±0.74△ 3.84±0.53□ 20.17±1.80△金辛镇痛液低剂量组 1.79±0.16□ 8.30±0.64△ 3.83±0.43□ 20.25±1.58△金辛镇痛液中剂量组 1.63±0.18△ 7.62±0.93△ 3.65±0.52△ 19.01±1.28△金辛镇痛液高剂量组 1.44±0.26△ 7.32±0.56△ 3.33±0.44△ 18.59±1.36△组别 血浆黏度（mPa/秒）红细胞聚集指数全血高切相对指数

3.2 对模型大鼠血浆ET-1和NO的影响 与正常对照组比较，模型对照组大鼠血浆ET-1的含量明显增加，并且NO含量明显减少，两者差异均有统计学意义。金辛镇痛液3个剂量组和阳性对照麝香舒活精组均能降低ET-1的含量，和提高NO的含量，与模型对照组比较，P＜0.01或P＜0.05，提示金辛镇痛液能调节ET-1/NO平衡，改善血瘀状态。见表3。

表3 对血瘀证模型大鼠血浆ET-1和NO的影响（±s）Tab.3 Effecton plasma ET-1 and NO in ratswith blood stasis（±s）

表3 对血瘀证模型大鼠血浆ET-1和NO的影响（±s）Tab.3 Effecton plasma ET-1 and NO in ratswith blood stasis（±s）

注：与正常对照组比较，*P＜0.01；与模型对照组比较，△P＜0.01 或□P＜0.05。

组别 ET-1（pg/L） NO(μmol/mL)正常对照组 128.31±23.59 43.02±14.41模型对照组组 189.00±27.19* 17.51±8.10*麝香舒活精组 157.47±38.83□ 32.43±17.20□金辛镇痛液低剂量组 159.44±35.89□ 32.56±17.92□金辛镇痛液中剂量组 149.24±31.23△ 34.82±22.56□金辛镇痛液高剂量组 138.11±32.71△ 38.21±22.56△

4 讨论

中医学认为，凡离经之血不能及时排出和消散，停留于体内，或因气虚、气滞、寒凝、热结、痰阻、湿浊、外伤、饮食、七情等病因所致血行不畅，停遏于经脉之内，及瘀积于脏腑组织器官的，均称为瘀血。《素问·调经论》曰：“寒独留则血凝泣，凝则脉不通。”“阳气虚衰则脉道拘急，血行不畅而寒凝血瘀。”根据此理论，拟冰水浴刺激造成血瘀证模型，另外结合皮下注射肾上腺素，因为肾上腺素为α、β受体兴奋剂，具有收缩外周血管和增加心脏收缩力的作用，通过与冰水浴相结合，可使外周血管强烈收缩，心脏后负荷增加，心肌耗氧代谢增加，心功能逐渐下降，从而使血液运行障碍，血液黏度增加，形成瘀血的病理改变[3]，从而建立急性血瘀模型。实验研究表明血瘀证与血液循环障碍和内皮功能、血液浓黏聚凝滞状态、血小板活化和黏附聚集、组织细胞代谢异常、免疫功能障碍等多种生理病理的改变有很大关联。血液流变学指标异常已作为诊断血瘀证的重要客观指标[4]，在研究中另结合动物表征，以证明造模成功及观察用药后血液流变学改善程度。

近年研究表明[5]，血管不仅是一个具有舒张功能的血液循环管道，而且是一个代谢活跃的内分泌器官，它可产生和分泌多种血管活性物质，以自分泌、旁分泌的方式构成一个复杂的功能单位以调节血管的舒缩及代谢功能。其中，内皮源性收缩因子，尤其是“内皮素”及内皮源性舒张因子,主要是NO，是目前研究较多的一对血管活性物质。NO和ET在血管壁中调节彼此的合成/释放及生物学行为，ET促进内皮细胞NO的合成，NO又对ET诱发的血管收缩发挥反馈调节作用，而抑制内皮素的生物合成，这一对血管活性物质的平衡对于维持正常的血管张力起着主要作用。当血脉瘀滞时，气血运行不畅，引起微循环障碍，血管舒缩功能和血管内皮受损，其细胞分泌功能失调或紊乱，造成ET分泌增多，而NO分泌减少，引发ET、NO平衡失调，因而导致血管收缩，血液瘀滞，血管通透性增加，血细胞聚集，血液呈高凝状态等血瘀的表现[6]。因此，临床上常用ET/NO比值判断血瘀证的严重程度[7-8]。ET是现知最强的缩血管物质[9]，目前研究认为[10]，其对血管的强大收缩作用机制是这样产生的：ET-1与血管平滑肌细胞膜上的特异性受体结合，激活细胞内磷酸酯酶C，生成三磷酸肌醇（IP3），及二酰甘油，IP3使细胞内储存钙释放，细胞内钙水平升高，使血管持久收缩（第一时相）。另外，ET通过G蛋白间接激活电压依赖性Ca2+通道，使血管壁平滑肌细胞的外钙内流；ET也可能直接作用于血管壁平滑肌细胞膜上的双氢吡啶类敏感的钙通道上，产生胞内游离钙浓度的持久升高(即第二时相)。血管壁平滑肌细胞内游离钙浓度经过第一、二时相的持久升高则产生了血管的强烈、长久的收缩效应。由于ET-1具有普遍收缩微动脉、微静脉的作用，因此ET-1有使微循环血量减少、血流速度变慢，从而有利于血管内血栓形成的作用，在临床和基础实验中都观察到ET对血液凝固和纤维蛋白溶解系统有着密切的关系，可加强凝血过程。

研究结果显示麝香舒活精组、金辛镇痛液低中高剂量组与模型组比较，能不同程度地降低大鼠血液流变学指标，使大鼠血浆ET-1减少，NO明显增多，差异均有统计学意义。该结果提示金辛镇痛液对血瘀证模型大鼠有着明显的活血化瘀作用，其抗血瘀证形成作用可能与抑制血管内皮释放ET-1及促进N0分泌有关，但是其发挥作用的物质基础和深层机制有待于进一步研究。

[1]张红星，易艳东，刘 倩，等.金辛镇痛喷雾剂抗炎镇痛作用的实验研究[J].湖北中医杂志，2006,28（7）：10-11.

[2]张红星，邹 然，黄国付，等.中药离子渗透治疗腰椎间盘突出症疗效观察[J].湖北中医杂志，2009,31（1）：13-14.

[3]苗明三，朱飞鹏.常用医药研究动物模型[M].北京：人民卫生出版社，2007:438-439.

[4]中国中西医结合研究会.血瘀证的诊断标准[J].中国中西医结合杂志，1987，7（3）:129-130.

[5]姜 帆，姜 船.一氧化氮(NO)在临床医学中的意义[J].现代检验医学杂志,2008,22(6):63-65.

[6]李莎莎，肖 雪，王跃生，等.血瘀证与活血化瘀研究进展[J].河南中医学院学报，2009，24（1）：102-104.

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[8]余运贤，梁 晖，黄 健，等.急性脑梗死血瘀证与一氧化氮、内皮素相关性研究[J].中国中西医结合杂志，2000，20（7）：501－502.

[9]武哲丽，陈 群，徐志伟，等.肝病瘀血舌象患者与血瘀证各组ET/NO的临床实验研究[J].四川中医，2008，26(5):4-5.

[10]陈可冀，史载祥.实用血瘀证学[M].北京：人民卫生出版社，1999:75-80.

Effectsof Jinxin zhentong linimenton hemorheological changesand endothelial function in ratswith acuteblood stasis syndrome

ZHOU Li,QIQing,ZHANGHong-xing,etal
（DepartmentAcup-Moxibustion,Wuhan Intergrated TCM andWestern Medicine Hospital,Wuhan 430022,China）

[Objective]Through observing the effectsof Jinxin zhentong linimenton hemorheological changes,endothelin-1(ET-1)and Nitrogenmonoxid(NO)in ratswith acute blood stasis,its function of promoting blood circulation to remove blood stasiswas investigated.[Methods]The acute blood stasismodel in ratswere established with subcutaneous injection of high-dose adrenaline hydrochloride and being socked in ice-water.The indexes of hemorheological parameters,ET-1 and NO in rats with acute blood stasis were detected.[Results]Therewassignificantdeferenceofhemorheologicalchanges(P＜0.01)between themodelgroup and thenormalgroup.Combining with the appeared characteristics itwas demonstrated that the acute blood stasismodel in rats was successfully established.Shexiang Shuhuojing group and Jinxin zhentong liniment in low/middle/high doses could notonly decrease the hemorheological indexs in different degrees,butalso reduceplasma ET-1(P＜0.01 or P<0.05).Theexpression ofNOwas remarkably increased,(P＜0.01 or P＜0.05).[Conclusion]Jinxin zhentong linimentcan obviously promote blood circulation to remove blood stasis.

Jinxin zhentong liniment;acute blood stasismodel;hemorheology;endothelin-1;nitrogenmonoxide

R285.5

A

1672-1519(2011)03-0323-03

湖北省武汉市科技攻关计划项目（20065009138-05）。

周 利（1973-），女，硕士，副主任医师，主要从事针灸治疗临床研究工作。

张红星。

2011-03-05）