宫腔内人工授精助孕患者精子制备方法的选择策略

蒋丽 卓英梅

(沈阳市妇婴医院 沈阳 110014)

人工授精是通过非性交的方式将精子注入女性生殖道内而使其获得妊娠的助孕技术,IUI是人工授精中成功率较高且最常用的方法。其原理是为了减少妨碍精子前进的因素,如阴道的酸性环境和宫颈粘液的干扰,并通过浓缩的、活力高、形态正常的精子尽可能接近卵子,从而易于受孕。IUI应用于临床已有200多年的历史,随着体外受精-胚胎移植(IVF-ET)技术发展而来的各种精子制备方法带来了IUI的复兴。目前IUI已成为输卵管通畅的不孕妇女助孕治疗的首选方法。本研究主要通过比较不同精子处理方法对精子参数及妊娠率的影响,从而为自然周期IUI助孕患者选择最佳精子处理方案。

1 资料与方法

1.1 一般资料

研究对象为2006年至2010年4月于本生殖中心行自然周期IUI助孕治疗的第一周期患者共200例,所有患者丈夫精液均正常[1]。采用区组随机分组的方法分为4组,每组50例,按照精子制备方法分别为标准上游组,直接上游组,密度梯度离心组和密度梯度离心加直接上游组[2]。研究对象平均年龄为(26.4±3.7)(21～35)岁,平均不孕年限为(4.5±1.7)(2～14)年;病因分类,特发性不孕185例(92.5%),宫颈因素6例(3.0%),免疫性不孕6人(3.0%),其它因素3例(1.5%)。所有患者均通过测定血清或尿LH峰及超声监测卵泡的生长及破裂来确定IUI的时间,必要时需肌注hCG10000IU。

1.2 方法

精子的计数应用Mak1er计数板。精子形态学分析应用伊红-苏木精染色法[1],妊娠结果的判定:IUI 28d后行超声监测到胎囊及胎心。所用试剂为IVF培养液,SpermGrad-30及SpermRinse洗精液(均来自Vitro1ife,瑞典)。

1.3 统计学分析

结果采用SSPS 16.0软件进行分析,定量数据应用单向方差分析,定性数据采用c2检验,P＜0.05有统计学差异。

2 结果

4组患者的一般情况,包括年龄、不孕年限及病因分类无差异。4组患者的妊娠率、活产率及流产率无差异。密度梯度离心组的精子处理时间最少(13.5分),标准上游组时间最长(56.4分)。密度梯度离组的a＋b级精子回收率最高(42.5±15.7)%,直接上游组最低(18.6±6.3)%。密度梯度离组a＋b级精子总回收数最高(55.3±25.7)百万,直接上游组最低(27.9±12.6)百万。回收精子畸型率密度梯度离心组(26.5±11.6)%和密度梯度离心加上游组(24.7±12.8)%低于标准上游组及组,具体统计数据见表1。

表1 各组患者妊娠率、活产率、流产率及精子参数的比较()

表1 各组患者妊娠率、活产率、流产率及精子参数的比较()

注:a:1例输卵管妊娠于孕4周终止妊娠;b:1例因腹部意外受伤流产;c:1例双胎妊娠,妊娠数及活产数均按1计数;*P＜0.05

分组 标准上游组 直接上游组 密度梯度离心组 密度梯度离心加直接上游组 P年龄(岁) 25.9±4.1 27.4±5.4 26.9±4.6 25.3±6.3 ＞0.05精子处理时间(分) 56.4±7.8 41.5±5.7 (13.5±2.3)* 31.3±6.4 ＜0.05妊娠数/妊娠率(%) 9/18.0 8/16.0 11/22.0 (10/20.0)c ＞0.05活产数/活产率(%) 8/16.0 (7/16.0)a (8/16.0)b (8/16.0)c ＞0.05流产数/流产率(%) 1/11.1 0/0 3/27.3 2/20.0 ＞0.05 a＋b级精子回收率(%) 23.5±7.1 18.6±6.3 (42.5±15.7)* (39.7±13.8)* ＜0.05 a＋b级精子总回收数(百万) 32.7±13.8 27.9±12.6 (55.3±25.7)* (48.9±20.3)* ＜0.05回收精子畸型率(%) 47.3±21.8 44.7±20.1 (26.5±11.6)* (24.7±12.8)* ＜0.05

3 结语

对于丈夫精液正常行自然周期IUI助孕治疗的第一周期年龄＜35岁的患者,精子制备方法首选直接上游法。

4 讨论

影响IUI成功的因素主要包括不孕的病因;夫妇的年龄;不孕的年限;治疗的周期数及精子的参数。女性年龄＞35岁,由于卵子质量下降及子宫内膜容受性降低,其生殖能力开始下降[3],这部分患者更倾向于IVF治疗,因此被排除。丈夫精子轻度异常的患者也会由于IVF的高妊娠率而选择后者治疗,该部分患者也被排除。精子处理的过程实际上就是体外精子的优选过程,目前应用于临床的精子处理方法有多种,如精子上游法、精子下游法、玻璃纤维滤过法、高速离心法及密度梯度离心法等,各有优缺点[4]。由于本研究对象丈夫精子正常,因此,选择了上游法和密度梯度离心法作为精子制备的方法。

精子的活力分级和正常形态精子的百分比是关于生殖预后的2个最重要的参数[5]。尽管密度梯度离心法在处理时间、精子回收率及回收精子畸型率均优于上游法[6],对于正常精液患者,上游法还是能够回收足够正常的a＋b级精子来完成IUI助孕治疗的。而且上游法在整个处理过程中除了培养液,不含其它化学物质[7],这不仅节约了成本,而其会去除密度梯度液可能对精子的影响,这是上游法的最大优点。直接上游法离心时间(200g,5分)低于标准上游法(300g,20分),处理方法也比标准上游法简便,更适用于临床操作。

任何一个行IUI助孕治疗的夫妇最关心的不是精子处理时间、精子回收率和临床妊娠率,而是活产率。本研究显示直接上游法的流产率有低于密度梯度离心法的趋势,尽管无统计学差异,这可能是因为病例较少造成的。密度梯度离心法的优点是获得活动精子数最多,其畸型精子比例降低,但该方法精子需承受较高的离心力(400～500g,10～15分),尤其是后者,会使活性氧急剧升高[8],导致精子细胞膜流动性降低或丧失,这可能会影响胚胎发育的潜能。

研究结果显示,年龄＜35岁且丈夫精液正常的患者,直接上游法是行自然周期IUI第一周期助孕治疗的首选方案。该方法不仅能提供足够的正常的a＋b级精子,而且能去除密度梯度液及离心时对精子的影响,另外,该操作也是最简单和成本最低的。

[1]谷翊群,陈振文,于和鸣,等.WHO人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册[M].第4版.北京:人民卫生出版社,2001:5～64.

[2]庄广伦.现代辅助生育技术[M].北京:人民卫生出版社,2005:226～229.