保山透心绿蚕豆异黄酮的提取

王红霞 李永萍 王旭霞

(1.大理学院临床医学院;2.大理学院附属医院血液肿瘤科;3.大理学院药学院 云南大理 671000)

近年来大量研究表明,异黄酮(isoflavone)是一种天然植物雌激素,具有防治癌症、心血管疾病和骨质疏松症、抗氧化和减轻妇女更年期综合症、预防早老性痴呆症、改善经期不适、美容、延缓衰老等重要生理功能,且对人体无明显毒副作用[1]。异黄酮,主要存在于豆科植物中。目前,国内提取异黄酮的主要来源是大豆。

保山透心绿蚕豆富含氨基酸、维生素,以及人体所需微量元素,属豆科植物蚕豆中的稀有名贵品种,被誉为“云南高原特种绿蚕豆”。本研究是国内首次以保山透心绿蚕豆作为原料,在一定的工艺条件下提取异黄酮,并以染料木素(genistein)标准品进行含量测定,为今后异黄酮的大量工业生产提供一定理论依据,并可促进保山透心绿蚕豆的开发利用和云南保山地区的经济发展。

1 资料与方法

1.1 一般资料

保山透心绿蚕豆:市售;金雀异黄素标准品:美国sigma公司≥98%(HPLC);无水乙醇、95%乙醇、石油醚(60～90℃)、乙酸乙酯:国产分析纯。

集热式恒温磁力搅拌器搅拌器:巩义市予华仪器有限责任公司;恒温水浴锅:金坛市大地自动化仪器厂;旋转蒸发器:上海亚荣生化厂;电子分析天平(d=0.00001g):梅特勒-托利多仪器有限公司;可调移液器:芬兰百德公司,紫外可见分光光度计:北京普析通用仪器有限责任公司。

表1 金雀异黄素标准品溶液体积、质量与吸光度

1.2 方法[2]

1.2.1 工艺路线 保山透心绿蚕豆→豆粉→石油醚脱脂→过60目筛→70%乙醇醇提→乙酸乙酯萃取→异黄酮。

1.2.2 具体方法 选取籽粒饱满的干燥保山透心绿蚕豆,粉碎机粉碎。准确称取50g豆粉,加入100mL石油醚,微沸下(60℃)回流脱脂1h,样品豆粉减压抽滤后晾干。准确称取干燥样品30g,置于蒸馏瓶中,加入70%乙醇水溶液600mL(料液比1:20),磁力搅拌器搅拌,80℃下提取2次各2h。将醇提后的混合物减压抽滤,得到澄清滤液。合并2次滤液减压蒸馏,温度控制在60℃左右。将蒸馏后粗品的水分散液100mL,以每次100mL乙酸乙酯萃取(至乙酸乙酯无色为止),异黄酮被富集于乙酸乙酯中,合并乙酸乙酯萃取液,减压蒸馏去乙酸乙酯,得到异黄酮0.168g。

1.3 保山透心绿蚕豆总异黄酮的测定[3]

表2 金雀异黄素标准曲线

1.3.1 方法提要 查阅文献得知,异黄酮和染料木素的最大吸收峰都在259nm,且最大吸收峰周围干扰较少。因此,选用金雀异黄素作为标准品,利用紫外分光光度法测定总异黄酮的含量[3]。

1.3.2 异黄酮标准曲线的建立 精确称取染料木素标准品1mg溶于95%乙醇溶液,于10mL容量瓶中定容,摇匀。再分别取0.1、0.3、0.5、0.7、1.0、1.5mL标准品溶液用95%乙醇稀释并定容至10mL。在紫外分光光度计上259nm处测定吸光度。

得到金雀异黄素标准曲线y=11.566x+0.0221,相关系数r＝0.9997。

1.3.3 提取样品含量的测定 准确称取51.4mg样品置于50mL容量瓶中,加入95%乙醇定容,摇匀。再取1mL样品溶液用95%乙醇稀释并定容到10mL。用紫外可见分光光度计测其吸光度A为1.159。根据标准曲线和稀释倍数,计算出样品中总异黄酮纯度及提取率。

2 结果

样品中异黄酮的纯度为:95.6%。

异黄酮提取率为:0.535%。

3 结语

使用70%乙醇,料液比为1∶20(w/v),提取温度80℃,提取2次各2h,经乙酸乙酯萃取,得到异黄酮的纯度为95.6%,异黄酮提取率为0.535%,与文献中报道[4-6]的大豆异黄酮提取率0.2%～0.6%相一致。所以,保山透心绿蚕豆也可作为异黄酮的提取来源。

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