反相高效液相色谱分析牡丹皮中丹皮酚含量变化

苗方，孙思习，安云，王卫华，彭婷婷

（菏泽医学专科学校，山东 菏泽 274000）

反相高效液相色谱分析牡丹皮中丹皮酚含量变化

苗方，孙思习，安云，王卫华，彭婷婷

（菏泽医学专科学校，山东 菏泽 274000）

目的 利用反相高效液相色谱法（RP-PLC）对菏泽产地牡丹皮中丹皮酚含量进行分析。方法色谱条件C10色谱柱；丹皮酚测定所用流动相为甲醇-磷酸（60∶40），检测波长为274 nm。结果丹皮酚的线性范围在0.10～0.50 μg，平均回收率98.06%，RSD=1.68%。结论所选牡丹皮的丹皮酚含量为1.62%。本方法简便、快捷、重现性好，适用于丹皮酚的含量测定，可作为其质量控制方法。菏泽牡丹皮中丹皮酚含量较高，有较好的药用价值。

丹皮酚；反相高效液相色谱法；含量测定

牡丹皮为毛茛科植物牡丹的干燥根皮，具有清热凉血、活血化瘀之功效。牡丹皮是我国传统常用中药材，应用历史悠久，为国内外药材市场的重要商品，为《中华人民共和国药典》收载药物。牡丹根及根皮中含有丹皮酚、丹皮酚苷、丹皮酚原苷、丹皮酚新苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷、氧化芍药苷等［1］。丹皮酚是丹皮中重要的有效成分，具有镇静、催眠、抗菌、抗炎、抗氧化、降血压等作用。因此，丹皮酚的含量测定是牡丹皮复方制剂质量控制的主要指标之一。山东菏泽是牡丹的主产区之一。已形成以牡丹园、百花园、古今园三大园圃为主体，全市种植面积达3万多亩、600多个品种的种植规模。本文对山东菏泽观赏牡丹进行系统的含量测定研究，为牡丹皮的合理开发利用，提供依据，为其质量控制提供有效的方法。

1 材料与方法

1.1 物理性质 丹皮酚，又称牡丹酚，主要是从萝摩科植物徐长卿干燥根或全草和毛茛科芍药属植物牡丹芍药的根皮中提取分离出来的一种活性成分，是一种小分子的酚类化合物。呈白色或微黄色有光泽的针状结晶，无色针状结晶（乙醇）。其分子量为166.17，分子式为C9H10O3，熔点49～51℃，气味特殊，味微辣，易溶于乙醇和甲醇中，溶于乙醚、丙酮、苯、氯仿及二硫化碳中，稍溶于水，在热水中溶解，不溶于冷水，能随水蒸汽挥发。丹皮酚可随水蒸气蒸馏，且在紫外光区有强烈吸收［2］。

1.2 仪器和材料 HypersilODS填料色谱柱（ID 4.6 ×250 mm）；日本岛津10Avp高效液相色谱仪（LC—10ATvp双泵，SPD—M10Avp二极管阵列检测器，SL—10ADvp自动进样器，CTO—10Avp柱温箱）；丹皮酚对照品由中国药品生物制品检定所提供为含量测定；甲醇为色谱纯；水为重蒸水并经0.45μm水系滤膜过滤；其余试剂均为分析纯实验材料：样品采于菏泽牡丹园，定点于同一棵植物，采集后晒干，粉碎成细粉，装于棕色玻璃瓶中备用

1.3 方法

1.3.1 色谱条件与系统适应性试验：色谱柱为十烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇0.5%-磷酸（60：40）为流动相；检测波长为274 nm；柱温为室温；流速1.0 ml/min；此条件下丹皮酚与其它组分均能达到基线分离。

1.3.2 对照品溶液的制备：取丹皮酚对照品2 mg，置100 ml的量瓶中，加甲醇稀释到刻度，摇匀，作为对照品溶液。

1.3.3 供试品溶液的制备：取本品粗品约0.5 g精密称定，置50 ml的量瓶中，加入甲醇25ml，称定重量，超声提取30 min，放冷，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液2 ml。，置25 ml的量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。

2 结果

测定法：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定见图1。

图1 丹皮酚含量测定的HPLC色谱图a丹皮酚对照品；b牡丹皮样品

2.1 丹皮酚的测定结果

2.1.1 丹皮酚线性范围：精密吸取丹皮酚对照品溶液5，10，15，20，25 μl按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为横坐标、丹皮酚量为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程：Y=24585+3427947X，C= 0.9998，表明丹皮酚在0.10 μg～0.50 μg范围内具有良好的线性关系。

2.1.2 丹皮酚稳定性试验：取丹皮酚对照品溶液，于配制后的0。、2、4、8、12、20、24和48 h测定，结果表明在48 h内稳定，峰面积的相对标准偏差RSD为1.01%。

2.1.3 重现性试验：取同一批样品，按含量测定样品溶液丹皮酚的含量。结果2.375%、2.326%、2.348%，平均为2.349%，RSD为2.24%。

2.1.4 回收率试验：精密称取8份丹皮药材样品0.5 g，分别加入相当于含丹皮酚0.75 mg、0.25 mg的对照品溶液4份，按“样品供试液”的制备方法提取后，进行分析，测得丹皮酚的回收率分别为97.61%、98.51%，RSD为1.54%、1.83%。进行加样法测定回收率，平均回收率98.06%，RSD=1.68%。

2.1.5 样品分析：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 μl，按上述色谱条件测定丹皮酚的峰面积，以外标法计算丹皮酚的含量，每批样品测定丹皮酚含量，测定结果见表1。

2.2 牡丹皮中丹皮酚含量测定结果 样品1：丹皮酚含量为1.604%，RSD为1.33%。样品2：丹皮酚含量为1.722%，RSD为1.40%。样品3：丹皮酚含量为1.474%，RSD为1.73%。

3 讨论

通过各种实验条件的优化，应用该色谱技术，建立了测定牡丹皮中丹皮酚的分析方法，具有良好的精密度和分析结果的重现性。通过对菏泽产地的样品进行分析，结果表明：该地牡丹皮药材中丹皮酚的含量结果均符合中国药典2005年版一部牡丹皮药材项下不得少于1.2%（即12 mg/g）的有关规定。建立了牡丹皮药材定量分析质量控制方法，为药材真伪鉴定、确保牡丹皮药材质量和提高中药制剂疗效提供了依据。

据有关文献证明：影响牡丹皮复方制剂中丹皮酚含量的因素主要有：牡丹皮药材的产地、采收季节、贮存时间。牡丹皮在不同的采收期丹皮酚的含量也不相同［3］。以牡丹开花期含量最高，以后逐渐减少，7月后又开始逐渐回升，9月份出现一个高峰，然后又逐渐下降。丹皮酚在9和10月含量较高，《中国药典》规定秋季采收。牡丹的不同药用部位丹皮酚含量也有差异［4］经过采用高效液相色谱法对牡丹中不同部位丹皮酚含量进行分析，结果表明丹皮中以皮层含量最高，其中细根皮＞根皮＞细根＞茎皮＞叶。贮存时间及加工方法：牡丹皮贮存时间延长，则会因丹皮酚挥发而含量降低［5］。

综上所述该实验材料，样品采于菏泽牡丹园，定点于同一棵植物，采集后晒干，粉碎成细粉，装于棕色玻璃瓶中备有。经过紫外扫描法丹皮酚在274 nm有最大吸收，所以该检测波长选择为274 nm。

[1] 中华人们共和国药典（一部）[S].北京：化学工业出版社，2005年.

[2] 庄明蕊，林晓，崔丽华，等.牡丹皮质量评价分析[J].食品与药品，2006，8（9）：56-58.

[3] 张留记，屠万倩，屈凌波，等.不同产地牡丹皮中丹皮酚和芍药苷含量的HPLC法测定[J].信阳师范学院学报，2007，20（2）：223-225.

[4] 柳淑玉，张彤，柳晨.丹皮酚的分析方法[J].时珍国医国药，2005，16（1）：63-64.

[5] 李海燕，陈小坚，牡丹皮中丹皮酚含量动态变化研究[J].时珍国医国药，2001，12（5）：412-413.

HPLC analysis of content of paeonol moutan

Miao Fang，Sun Sixi，An Yun，Wang Weihua，Peng Tingting
（Heze Medical College，Heze 274000）

ObjectiveRP-HPLC of Heze Paeonol moutan origin were analyzed.Chromatographic conditions：C10 column；paeonol mobile phase used for determination of methanol-phosphate（60：40）as mobile phase，detection wavelength 274 nm.Results：The linear range of paeonol 0.10～0.50 μg the average recovery 98.06%，RSD=1.68%；conclusions paeonol moutan selected content is 1.62%.Conclusionthis method is simple，fast，and reproducible.Paeonol for the determination of its quality control methods can be used.This method was the origin of Heze Paeonol moutan were determined，the results showed that the content of Heze higher Paeonol moutan has some medicinal value.

paeonol；determination；RP-HPLC

O657.7+1;O625.31+5

A

1008-4118（2011）03-0001-02

10.3969/j.issn.1008-4118.2011.03.01

2011-03-05