蝇蛆壳聚糖降血脂作用机制探讨

覃容贵，吴建伟，国 果，付 萍

(贵阳医学院 1.药学院 药用植物学与生药学教研室，2.基础医学院寄生虫学教研室，贵州 贵阳 550004)

近年研究表明，壳聚糖具有降血压、降血脂、降血糖、增强免疫力、保护胃黏膜、抗肿瘤及延缓衰老等生物学作用[1-3]。现有降脂机理的研究主要集中在壳聚糖的化学结构、对机体脂质过氧化等方面[4-9]。而胆固醇在人体的合成和代谢过程是一个复杂的过程，调节血脂是在整体水平上根据不同脂蛋白的功能进行调控，其中涉及很多酶、相关蛋白及血管活性物质。为了进一步探讨蝇蛆壳聚糖调血脂作用机理，我们采用高脂血症大鼠模型，观察蝇蛆壳聚糖对实验性高脂血症模型大鼠载脂蛋白AI(ApoAI)、载脂蛋白B(ApoB)、卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、血清脂质过氧化代谢产物丙二醛(MDA)水平、血清一氧化氮(NO)及C反应蛋白(CRP)的影响，从而较为广泛地探讨蝇蛆壳聚糖降血脂作用机理。

1 材料

蝇蛆皮由琨恩生物技术有限公司提供;蝇蛆壳聚糖，自制，脱乙酰度为82.3%;虾蟹壳聚糖，购自济南海得贝生物工程有限公司，脱乙酰度为95.3%;均以0.1%醋酸配制成所需浓度。

基础饲料由贵阳医学院实验动物中心提供;高脂饲料:用1%胆固醇、5%猪油、10%蛋黄粉及85%基础饲料配制而成。

ApoAI、ApoB测定试剂盒购自上海荣盛生物技术有限公司;游离胆固醇(FC)测定试剂盒购自保定长城临床试剂公司;CRP、MDA测定试剂盒、SOD测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

OLYMPUS-AU400全自动生化分析仪，日本OLYMPUS公司;μ-Quant扫描酶标分光光度仪，美国Bio-Tek公司。

SD大鼠，雄性，100只，体重180～205 g，由贵阳医学院实验动物中心提供，动物合格证号:SCXK(黔)2002-0001。

2 方法

2.1 分组及造模指标测定

用高脂饲料造模的同时给予蝇蛆壳聚糖预防高脂血症的产生。用基础饲料适应性喂养大鼠5 d后，随机分为5组，每组10只，分别为正常对照组:以基础饲料喂养;高脂模型组:以高脂饲料喂养;壳聚糖低、中、高剂量组:给高脂饲料的同时分别灌胃蝇蛆壳聚糖300，600，900 mg/kg;阳性对照组:给高脂饲料的同时灌胃虾蟹壳聚糖600 mg/kg，1次/d，连续给药4周，动物自由进水。正常对照组和高脂模型组分别给等量蒸馏水。于第4周末次给药后，大鼠禁食12 h，股动脉取血处死，并分离血清。

2.2 检测指标及测定方法

ApoAI、ApoB的测定应用免疫透射比浊法，按两酶系统测定LCAT作用前后一定量血清中FC的含量，以FC的减少量计算LCAT活性。FC的测定应用胆固醇氧化酶－过氧化物酶法按试剂盒说明书进行。血清SOD的测定采用黄嘌呤氧化酶法，血清MDA的测定采用硫代巴比妥酸法。血清NO的测定采用硝酸还原酶法。CRP的测定应用免疫比浊法。

2.3 统计分析

3 结果

3.1 蝇蛆壳聚糖对大鼠血清ApoAI、ApoB水平的影响

见表1。中、高剂量蝇蛆壳聚糖能提高大鼠血清 ApoAI水平(P ＜0.05～0.01);高剂量能降低ApoB水平(P＜0.05);中、高剂量能提高 ApoAI/ApoB 水平(P ＜0.05 ～0.01)。

表1 蝇蛆壳聚糖对大鼠血清apoAI、apoB水平的影响(n=10，)Tab.1 The effects of housefly maggot chitosan on ApoAI and ApoB of rats(n=10，)

表1 蝇蛆壳聚糖对大鼠血清apoAI、apoB水平的影响(n=10，)Tab.1 The effects of housefly maggot chitosan on ApoAI and ApoB of rats(n=10，)

与正常对照组相比:1P ＜0.05，2P ＜0.01;与模型组相比:3P ＜0.05，4P ＜0.01Compared with control group:1P ＜0.05，2P ＜0.01;Compared with model group:3P ＜0.05，4P ＜0.01

组 别 剂量/(mg/kg) ApoAI/(g/L) ApoB/(g/L)ApoAI/ApoB正常对照组 －0.10 ±0.02 0.16 ±0.04 0.63 ±0.19高脂模型组 － 0.06±0.022 0.20±0.031 0.33±0.122低剂量组 300 0.07 ±0.02 0.19 ±0.03 0.38 ±0.08中剂量组 600 0.08 ±0.013 0.18 ±0.03 0.48 ±0.143高剂量组 900 0.09 ±0.024 0.17 ±0.033 0.52 ±0.094阳性对照组 600 0.10 ±0.024 0.17 ±0.033 0.61 ±0.214

3.2 蝇蛆壳聚糖对大鼠血清LCAT、NO、CRP水平的影响

见表2。中、高剂量蝇蛆壳聚糖能提高大鼠血清LCAT活性(P＜0.01)，各剂量均能提高大鼠血清NO水平(P＜0.01)，各剂量组大鼠CRP含量与高脂模型组无显著性差异。

3.3 蝇蛆壳聚糖对大鼠血清SOD活性、MDA水平的影响

见表3。中、高剂量蝇蛆壳聚糖能提高大鼠血清 SOD 活性(P ＜0.05，P ＜0.01)，降低 MDA 含量(P ＜0.01)。

4 讨论

研究发现，ApoAI和ApoB较其他血脂指标更加敏感，可以作为更好的动脉粥样硬化预测因子。本实验结果表明，蝇蛆壳聚糖能很明显地升高血清ApoAI含量和ApoAI/ApoB，有效改善了给药组动物脂类代谢的异常。蝇蛆壳聚糖有显著升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的作用，这可能与提高ApoAI作用密切相关;壳聚糖有显著的降低低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)作用[10-11]，这可能与蝇蛆壳聚糖降低ApoB的作用有一定关系。蝇蛆壳聚糖能提高ApoAI，降低 ApoB，提高 ApoAI/ApoB比值，通过提高ApoAI促进HDL的合成，激活LCAT，促进胆固醇的逆向转运，从而起到调节血脂的作用。

表2 蝇蛆壳聚糖对大鼠血清LCAT、NO、CRP水平的影响(n=10，)Tab.2 The effects of housefly maggot chitosan on LCAT，NO and CRP of rats(n=10，)

表2 蝇蛆壳聚糖对大鼠血清LCAT、NO、CRP水平的影响(n=10，)Tab.2 The effects of housefly maggot chitosan on LCAT，NO and CRP of rats(n=10，)

与正常对照组相比:1P ＜0.01;与模型组相比:2P ＜0.05，3P ＜0.01Compared with control group:1P ＜0.01;Compared with model group:2P ＜0.05，3P ＜0.01

组 别 剂量/(mg/kg)LCAT/[(nmol/(mL·h))]NO/(μmol/L) CRP/(mg/L)正常对照组 －118.5 ±11.7 63.30 ±2.05 2.45 ±0.91高脂模型组 － 56.7±15.41 33.64±2.571 4.50±1.411低剂量组 300 73.3 ±18.92 64.09 ±2.033 4.07 ±1.16中剂量组 600 86.0 ±15.53 66.24 ±3.433 4.57 ±1.26高剂量组 900 95.2 ±24.03 74.74 ±9.003 4.15 ±1.56阳性对照组 600 91.0 ±18.03 71.80 ±8.1233.70 ±1.26

表3 蝇蛆壳聚糖对大鼠血清MDA、SOD水平的影响(n=10，)Tab.3 The effects of housefly maggot chitosan on MDA and SOD of rats(n=10，)

表3 蝇蛆壳聚糖对大鼠血清MDA、SOD水平的影响(n=10，)Tab.3 The effects of housefly maggot chitosan on MDA and SOD of rats(n=10，)

与正常对照组相比:1P ＜0.01;与模型组相比:2P ＜0.05，3P ＜0.01Compared with control group:1P ＜0.01;Compared with model group:2P ＜0.05，3P ＜0.01

组 别 剂量/(mg/kg) MDA/(nmol/L) SOD/(U/mL)正常对照组 －3.14 ±0.51 808.7 ±57.6高脂模型组 － 7.52±0.541 585.0±55.41低剂量组 300 7.08 ±0.76 626.9 ±61.9中剂量组 600 5.31 ±0.563 651.5 ±46.52高剂量组 900 4.01 ±0.653 794.0 ±56.03阳性对照组 600 3.83 ±0.793 802.1 ±50.33

本研究结果表明，高脂模型组LCAT活性明显下降。蝇蛆壳聚糖有显著降低总胆固醇的作用[10-11]，中、高剂量蝇蛆壳聚糖可显著升高LCAT活性，说明蝇蛆壳聚糖通过提高LCAT活性，使胆固醇的酯化率升高，胆固醇的清除增加，移除胆固醇，使总胆固醇显著降低。中、高剂量蝇蛆壳聚糖能明显提高SOD活性，降低MDA含量。蝇蛆壳聚糖降低MDA作用随剂量的增加而增强。说明蝇蛆壳聚糖具有提高血清SOD活力的作用，可抑制高脂血症大鼠血清中异常升高的脂质过氧化物含量和减少氧自由基损伤，具有抗氧化作用。蝇蛆壳聚糖能明显升高NO水平，说明它可能通过改善血管内皮的功能，促进NO的生成和释放，降低血管张力，达到保护内皮细胞的作用。另外，喂饲高脂饲料造成的高脂血症模型CRP含量可发生改变。蝇蛆壳聚糖对血清CRP含量没有影响，说明其调节血脂的作用可能与CRP没有关系。

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