乳腺癌中 β-catenin、cyclinD1、c-myc表达及意义

何艳姣 乔 超 刘朝霞 俞 进 李 光

(首都医科大学附属北京天坛医院病理科，北京 100050)

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，发病率在我国逐年增高并逐渐趋于年轻化，严重威胁妇女生命健康。从信号转导途径治疗肿瘤是目前生物治疗的新兴领域。Wnt信号通路是目前已知的胚胎发育所必需的信号通路，经典Wnt信号转导通路致癌的关键是该途径任何一个信号分子异常导致β-catenin在细胞质/核内累积，研究［1-2］表明，在多种人类肿瘤均发现 βcatenin异常表达和β-catenin基因突变，并与肿瘤发生相关，cyclinD1、c-myc是Wnt信号转导通路非常重要的靶基因，本研究拟通过检测正常乳腺组织、乳腺增生症和乳腺癌中β-catenin、cyclinD1、c-myc的表达情况，评价它们的异常表达与临床病理指标的关系，同时做β-catenin异常表达与cyclinD1、c-myc过表达相关性研究，旨在初步探讨Wnt信号转导通路中重要因子β-catenin及其靶基因cyclinD1、c-myc与乳腺癌发生发展的作用。

1 材料和方法

1.1 材料

取自首都医科大学附属北京天坛医院病理科40例正常乳腺组织、72例乳腺增生症及119例乳腺癌标本及临床资料，所有病例均经病理证实。常规10%中性甲醛固定、石蜡包埋。切片厚度4 μm，常规HE染色。

1.2 免疫组化染色

石蜡切片常规脱蜡至水，染色方法按S-P试剂盒说明书步骤进行，0.01 mol/L枸橼酸缓冲液(pH 6.0)微波修复18 min行抗原修复，第一抗体(鼠抗人β-catenin、cyclinD1、c-myc单克隆即用型抗体均购自北京中杉金桥公司)4℃过夜。经DAB显色后，苏木素复染，中性树胶封片。阴性对照采用0.01 mol/L PBS(pH=7.4)液体代替一抗，其他步骤不变。S-P及DAB试剂盒均购自北京中杉金桥公司。

1.3 结果判定标准

在正常情况下β-catenin阳性染色定位于细胞膜，即连续的细胞膜染色。染色结果判断标准按Maruyama K等［3］的方法，分别从细胞膜、细胞质、细胞核3方面判断β-catenin在细胞内的分布:细胞膜＞70%细胞阳性为正常表达，反之为表达缺失;细胞质或细胞核＞10%细胞阳性为胞质或胞核阳性表达，胞质或胞核表达为异位表达。异位表达和表达缺失统归为异常表达。

cyclinD1表达于细胞核，c-myc在细胞核和细胞质均可出现阳性，随机选取10个高倍视野，每个视野计数100个瘤细胞，计数阳性细胞百分比，＞10%为过度表达。

1.4 统计学方法

采用SPSS 11.0统计分析软件进行分析，采用卡方检验和确切概率法，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 乳腺癌、乳腺增生症及正常乳腺组织中β-catenin、cyclinD1、c-myc的表达情况

119例乳腺癌中26例 β-catenin正常表达(图1A)，正常表达率为21.85%。93例β-catenin异常表达(图1B)，异常表达率为78.15%;69例cyclinD1阳性表达(图1C)，阳性表达率为57.98%;67例 c-myc阳性表达(图1D)，阳性表达率为56.30%。

图1 乳腺浸润性导管癌组织SP法免疫组化染色结果Fig.1 Breast infiltrating ductal cancer by immunohistochemistry SP method(200×)

72例乳腺增生症中β-catenin的异常表达率为44.44%(32/72)，cyclinD1 的阳性表达率为 33.33%(24/72)，c-myc的阳性表达率为 27.78%(20/72)。

40例正常乳腺组织中β-catenin在细胞膜中强表达，cyclinD1及c-myc阴性表达。乳腺癌β-catenin异常表达率明显高于乳腺增生症，组间比较差异有统计学意义(P＜0.01)，乳腺癌cyclinD1阳性表达率高于乳腺增生症，组间比较差异有统计学意义(P=0.001)，乳腺癌c-myc阳性表达率高于乳腺增生症，组间比较差异有统计学意义(P＜0.01)。

2.2 β-catenin、cyclinD1、c-myc的表达与乳腺癌临床病理资料相关性

β-catenin、cyclinD1的表达与淋巴结转移相关(P=0.031，P=0.003)，与年龄、部位、肿瘤大小、组织学类型无关，c-myc的表达与肿瘤大小和淋巴结转移相关(P均=0.041)，与年龄、部位、组织学类型无关，见表1。

表1 β-catenin、cyclinD1、c-myc的表达与乳腺癌临床病理资料相关性Tab.1 The relationship between β-catenin，cyclinD1，c-myc and clinicopathological index in breast carcinoma n(%)

2.3 乳腺癌中 β-catenin的异常表达与cyclinD1、cmyc的表达相关性

β-catenin的异常表达与 cyclinD1的表达相关(P=0.006)，与 c-myc的表达无关，见表2。

表2 乳腺癌中β-catenin的异常表达与cyclinD1、c-myc的表达相关性Tab.2 The relationship between expression of β-catenin and cyclinD1，c-myc in breast carcinoma

3 讨论

经典Wnt信号转导通路致癌的关键是该途径任何一个信号分子异常致β-catenin在细胞质/核内累积。β-catenin是一种多功能细胞质内的可溶性蛋白，由于它在细胞黏附和增生过程中的双重作用，已成为肿瘤发生发展机制研究中的热点。近来研究［4］表明，β-catenin在细胞质和核内的累积是恶性肿瘤中的常见事件之一，在结直肠腺瘤和癌等多种肿瘤中均发现β-catenin异常表达并与肿瘤发生相关，但在乳腺癌中的报道结果不一致。Bankfalvi A等［5］发现从乳腺正常组织到浸润癌的发展过程中β-catenin膜表达下调，认为β-catenin的改变是乳腺癌发生过程中的早期事件。Lin S Y等［6］、Lim S C 等［7］、López-Knowles E 等［8］报道了乳腺癌中β-catenin的异常表达与预后不良有关，可以作为乳腺癌的独立预后因子。而Chung G G等［9］研究表明β-catenin异常表达与预后无关，只有同时存在β-catenin异常表达和p53高表达时才与预后不良有关，因此，βcatenin不能作为乳腺癌的独立预后因子。王珂等［10］研究表明β-catenin异常表达与Her2阳性表达有关，二者异常表达协同促进乳腺癌细胞的淋巴结转移。本研究发现乳腺癌β-catenin异常表达率明显高于乳腺增生症，组间比较差异有统计学意义，表明β-catenin异常表达在乳腺癌发生发展过程中起重要作用。同时发现βcatenin的异常表达与淋巴结转移相关，表明其可以用于评价乳腺癌的预后。

CyclinD1和c-myc作为原癌基因，参与细胞的增生、分化与凋亡，并且与多种肿瘤发生发展有关。近来研究［1-2］显示，cyclinD1、c-myc是Wnt信号转导通路非常重要的靶基因，免疫组化研究证实在多种肿瘤中cyclinD1、c-myc过表达与β-catenin异常表达和Wnt突变有关。在乳腺癌中，仅有少数研究报道了β-catenin异常表达与cyclinD1、c-myc过表达的相关性，且意见不一致，如 Ozaki S等［11］研究显示β-catenin异常表达与 cyclinD1、c-myc过表达有关，Roh M S 等［12］研究显示β-catenin异常表达可上调c-myc表达，Lin S Y等［6］证实β-catenin异常表达与cyclinD1高表达相关，Lim S C等［7］研究显示 β-catenin异常表达与 cyclinD1过表达无关。本研究显示cyclinD1、c-myc的过表达与淋巴结转移相关，表明它们也可以作为评价乳腺癌转移、预后的重要因子。同时β-catenin异常表达与cyclinD1过表达相关，而与c-myc过表达无关，表明β-catenin在乳腺癌发生过程中的作用可能是通过上调cyclinD1的表达，导致细胞外基质降解和细胞增生分化失控而实现的。

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