降脂胶囊质量标准研究

杨娟英 林玉红 谢 伟 陕西步长制药有限公司 (西安 710075)

随着人们生活水平的提高,饮食营养的改善,嗜食肥甘厚味,醇酒琼浆,营养过剩,体态肥胖,以及糖尿病、慢性肝炎等调治不当,或长期服用损肝药物,导致脂肪代谢紊乱,脂肪肝患者日益增多。目前治疗脂肪肝的上市药物还是以西药为主,但尚无理想的抗脂肪肝药品,且西药本身具有较大的副作用,降脂胶囊以传统中医药理论为指导,主要由龙胆、虎杖、茵陈、广藿香和陈皮等药材组成,具有清肝利胆、健脾化湿之功。对于脂肪肝出现的肝脏肿大、肝功异常、神疲体倦、脘腹痞满、两胁胀痛、食欲不振、恶心呕吐、大便不调等症,起到很好治疗康复作用。

本实验中对降脂胶囊制剂进行了质量标准研究,为有效控制该制剂的质量提供了重要的依据和方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters 2695高效液相色谱仪,Empower色谱工作站,2996二极管阵列检测器;SB3200DT超声波清洗机;GB203电子天平。

1.2 试药 龙胆苦苷对照品、龙胆对照药材、百秋李醇对照品、茵陈对照药材、虎杖对照药材(中国药品生物制品检定所提供),甲醇、乙腈均为色谱纯,其他试剂均为分析纯。降脂胶囊由陕西步长制药有限公司生产提供。

2 方法与结果

2.1 薄层层析定性鉴别[1]

2.1.1 龙胆的薄层鉴别分别取供试样品、龙胆对照药材及阴性样品内容物各约 0.5g,加甲醇 5mL,浸泡 4-5h,滤过,滤液浓缩至 2mL,作为供试品溶液、对照药材溶液及阴性样品溶液;照薄层色谱法(中国药典 2005年版一部附录Ⅵ B)试验,吸取供试品溶液、阴性样品溶液及对照药材溶液各 1～ 2 μL分别点于同一硅胶 GF254薄层板上,以醋酸乙酯-甲醇-水 (20∶ 2∶1)为展开剂,展开 ,取出 ,晾干,置紫外灯(254nm)下检视,供试品色谱中,在与对照药材相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,而阴性无干扰。

2.1.2 虎杖的薄层鉴别分别取供试样品与阴性样品内容物及虎杖对照药材各约 0.5g,加甲醇 25ml,加热回流 1h,滤过,滤液蒸干,残渣加 2.5mol/L硫酸溶液 10ml,超声处理 5min,加氯仿 10mL,加热回流1h,冷却,分取氯仿层,酸液用氯仿提取 2次,每次8mL,合并氯仿液,浓缩至约 1mL作为供试品与阴性样品溶液及对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录 VIB)试验,吸取供试品溶液、对照药材溶液及阴性样品溶液各 2 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶ 1)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯(365nm)下检视;供试品色谱中,在与对照药材相应的位置上,显相同橙黄色的荧光斑点,而阴性无干扰。

2.1.3 茵陈的薄层鉴别取供试样品及阴性样品内容物各约 0.4g,加甲醇 20mL,浸泡过夜,超声处理20min,滤过,滤液浓缩至约 2mL,作为供试品溶液及阴性对照品溶液;另取茵陈对照药材 0.2g,同法制备,即得茵陈对照药材溶液;照薄层色谱法 (中国药典2005年版一版附录 VI B)试验,吸取供试品溶液、阴性对照溶液及茵陈对照药材溶液各 5 μL,分别点于同一硅胶 G薄层板上,以环己烷-甲苯-醋酸乙酯-甲酸 (5∶5∶10∶ 0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯(365nm)下检视;在供试品色谱中,在与对照药材溶液主斑点相应位置上,显相同的红色斑点,而阴性溶液在相应的位置上无此斑点。

2.1.4 广藿香的薄层鉴别取供试样品内容物 0.5g,加的石油醚 (30～ 60℃ )10mL,冷浸 1h,过滤 ,残渣用同沸程石油醚回流提取 2次,每次 10m L,保持微沸1h,过滤,合并提取液,减压浓缩至约 2mL,作为供试品溶液。另取百秋李醇对照品,加醋酸乙酯制成每1mL含 1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典 2005年版一版附录 VIB)试验。吸取供试品溶液 10 μ L,对照品溶液 5 μL,分别点于同一硅胶 G薄层板上,以正己烷-醋酸乙酯(6:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以 5%香草醛-硫酸溶液,加热至斑点清晰,供试品色谱中,在与对照品溶液相应的位置上,应显相同颜色的斑点,而阴性无干扰。

2.2 龙胆苦苷的含量测定[2]

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 用十八硅氧烷键合硅胶为填充剂;用甲醇-水为流动相,梯度洗脱 ,0～ 6.5min:甲醇 -水 (30∶ 70);8.5～ 13min:甲醇-水 (50:50);15～ 25min: 甲醇-水 (30:70)。流速:1mL/min;检测波长:270nm;理论塔板数按龙胆苦苷计应不低于3000[1]。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取龙胆苦苷对照品适量,加甲醇制成每 1.0mL含 0.2mg的溶液,即得。

2.2.3 供试品溶液的制备取胶囊剂 10粒,倾出内容物,混匀,精密称取约 0.15g,置具塞锥形瓶中,精密加甲醇 10mL,密塞,称定重量,超声处理 20min,放冷,称定重量,加甲醇补足减失的重量,摇匀,取滤液,用微孔滤膜过滤,即得。

2.2.4 空白试验阴性对照的制备:以处方中药味比例和制备工艺制成不含白芍的空白样品,再按供试品制备方法处理,制成阴性对照溶液。吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液 10 μL注入液相色谱仪,依法测定。结果对照品溶液与供试品溶液在相同的保留时间有相应的峰,而阴性对照没有。说明测定的专属性好、无干扰。

2.2.5 标准曲线的绘制 分别精密吸取龙胆苦苷对照品溶液 (浓度 0.2mg/mL)2、 4、 6、 8、 10 μL,按上述色谱条件注入色谱仪,以峰面积 A为纵坐标,龙胆苦苷含量 C(μ g)为横坐标绘制标准曲线,回归方程为A=1855224C+2954.8,相关系数 r=0.9999,龙胆苦苷在 0.0865～ 0.433 mg/ml之间有良好的线性关系。

2.2.6 精密度试验取龙胆苦苷对照品溶液,重复进样 6次,记录峰面积,结果 RSD为 0.8%,表明本方法精密度良好。

2.2.7 重复性试验取本品适量,共 6份,照“2.2.3”项下的方法制备供试品溶液,分别精密取 10 μL进样,在上述色谱条件下测得样品,RSD为 2.58%,表明此方法重复性良好。

2.2.8 加样回收率试验采取加样回收法,取一定量已知含量的样品 6份,分别加入龙胆苦苷对照品适量,照“2.2.3”项下的方法制备供试品溶液,在上述色谱条件下测定含量,计算回收率(数据见表 1)。

表1 回收率试验结果表

2.2.9 稳定性试验:精密取本品适量,照“2.2.3”项下的方法制备供试品溶液 ,分别于 0、2、4、8、12、24h进样 10 μL,记录的峰面积,结果见表 2。

表2 稳定性试验

结果表明:该供试品在 24h内稳定性良好。

2.2.10 样品的含量测定取本品 3批样,照“2.2.3”项下的方法制备供试品溶液,依上述色谱条件测定,测定结果分别为 5.12mg/粒,5.04 mg/粒,4.77 mg/粒。考虑到生产实际情况,含量限度定为每粒含龙胆以龙胆苦苷 (C16H20O9)计不得少于 4.0mg/粒。

3 讨 论 在本实验薄层色谱研究中,对于龙胆、虎杖、茵陈和广藿香的薄层色谱条件,我们从展开剂的种类、比例及展开条件等均进行了深入研究,最终制定出了简便、可行的鉴别方法。

在龙胆苦苷的含量测定实验中,我们对其色谱条件和系统适用性进行科学的考究,充分对比等度洗脱和梯度洗脱的色谱峰分离度,杂质峰和溶剂峰的干扰性,最终优选出了梯度洗脱的色谱条件,实验结果表明该条件分离度好,无干扰峰,精密度高,可以作为该制剂的定量控制指标。

我们在本实验研究过程中,曾尝试对该制剂中陈皮等药材进行薄层鉴别,经过反复摸索展开比例和条件,最终色谱结果还是不太清晰和稳定,故尚未选入此质量标准中。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部[M].北京:化学工业出版社,2010:1.

[2] 王冬梅.安宫消瘤胶囊质量标准的研究 [J].中药材,2008,31(12):1911.