补血颗粒醇提工艺条件的优选

2011-04-25

长春中医药大学学报 2011年3期

(浙江医药高等专科学校，浙江宁波 315100)

补血颗粒由黄芪、延胡索、当归、陈皮组成，其方是由《重订严氏济生方》中古方三神丸衍化而来[1]。功能为补血活血，调经止痛。用于血虚血瘀、月经不调、痛经。根据处方中药材所含有效成分的性质，将延胡索单独用乙醇回流提取。笔者通过正交试验筛选，以其所含的主有效成分之一延胡索乙素含量为考察指标，用方差分析法进行分析，优选了补血颗粒提取工艺条件[2]。

1 实验仪器与材料

Agilent 1100型高效液相色谱仪、Advantage系列超纯水机(美国pall)、BS124S电子分析天平(德国Sartorius)、SB-12DT超声波清洗仪(宁波新芝生物仪器厂)、延胡索乙素对照品(中国药品生物制品检定所，含量测定用，批号：0726-200208)，投料延胡索经本实验室鉴定为罂粟科植物延胡索CorydalisyanhusuoW.T.Wang.的干燥块茎，其他试剂均为分析纯。

2 实验方法与结果

2.1 延胡索乙素的含量测定[3-4]

2.1.1 色谱条件色谱柱为Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；甲醇-0.1%磷酸溶液(用三乙胺调至pH至6.0)(60∶40)为流动相；流速1 mL/min；检测波长280 nm;理论塔板数按延胡索乙素峰计算应不低于2 000。

2.1.2 对照品溶液的制备称取延胡索乙素对照品适量，精密称定，加流动相制成每1 mL含0.1 mg的溶液，即得。

2.1.3 供试品溶液的制备精密吸取醇提液5 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。

2.2 浸出物含量测定精密吸取样品液10 mL，置干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105 ℃干燥5 h，置干燥器中冷却30 min，精密称定重量，再在上述温度下干燥1 h,冷却、称重，至连续2次称重的差异不超过5 mg，按下式计算得膏率(W为浸膏质量，M为药材质量，V为样品溶液体积)。

2.3 醇提工艺正交设计[5]准确称取延胡索粗粉(过一号筛)50 g，加乙醇回流提取，以乙醇浓度、加醇量、提取次数、提取时间为考察因素，每个因素设计3个水平,以延胡索乙素含量为本品提取工艺的评价指标，以浸出物含量作为本品的参考指标，按L9(34)正交表安排试验，平行操作，见表1。

表1 因素水平表

2.4 正交试验及结果按醇提正交试验设计方案安排试验，得滤液,试验结果见表2。方差分析结果见表3。

表2 L9(34)正交试验结果

表3 延胡索乙素含量方差分析

F0.10(2，2)=9.00；F0.05(2，2)=19.00；F0.01(2，2)=99.00

实验结果表明，以延胡索乙素的含量为本品提取工艺的评价指标，以浸出物含量作为本品的参考指标，直观分析显示各因素作用主次为C>A>B>D，最佳提取方案为A1B3C3D2。方差分析结果表明煎煮次数(A)、加水量(B)、煎煮时间(C)三因素均对实验结果有显著性影响，提取时间(D)因素，由于极差值较小，对实验结果无显著性影响。因此选用A1B3C3D2。

2.5 验证试验为了进一步考察优选工艺的可靠性及稳定性，按2.3项下的提取条件进行提取，按优选工艺条件进行3次验证试验，测定结果见表4，结果表明正交试验优选的工艺条件稳定、可靠。