抗肝纤胶囊对大鼠肝纤维化慢性血瘀症模型的影响

顿文亮，喻 斌，俞 云

(1.南京市中医院，江苏 南京 210001；2.南京中医药大学药学院，江苏 南京 210029)

肝纤维化(hepatic fibrosis，HF)是慢性肝损伤向肝硬化进展过程中的一个关键阶段，其主要特征是细胞外基质在肝脏的过度沉积，纤维结缔组织增生。导致血液循环障碍，影响血液与肝细胞的物质交换，加重肝细胞损伤[1]。抗肝纤胶囊具有活血通络,化瘀散结功效，临床主要治疗肝纤维化和痰瘀互结证。本实验主要观察抗肝纤胶囊是否具有改善肝纤维化所致慢性血瘀症血流动力学及凝血功能异常的作用。

1 材料

1.1 实验动物 清洁级Wistar大鼠60只，雄性，体质量(200～240)g，周龄9～10周，由浙江大学实验动物中心提供，合格证号:SCXK(浙)2008-0033。

1.2 药品与试剂 抗肝纤胶囊由三七、老鹤草、五味子等5味中药组成,采用传统水煎提取，浓缩至1.4 g(含生药量)/mL，置4 ℃冰箱保存备用，临用前加蒸馏水配制所需浓度；CCL4(分析纯)，北京化工厂；盐酸肾上腺素注射液1 mL∶1 mg，批号20081210,天津金耀氨基酸有限公司；血浆凝血酶原时间(PT)试剂盒，批号(Lot):STG10101-32，北京世帝科学仪器公司；活化部分凝血活酶时间(APTT)测定试剂盒，批号(Lot):STG20201-24，北京世帝科学仪器公司；纤维蛋白原(FIB)测定试剂盒,批号(Lot):STG20401-22，北京世帝科学仪器公司。

1.3 实验仪器 LDZ5-2低速自动平衡离心机，北京医用离心机厂；LG-PABER型血小板聚集及凝血因子分析仪，北京世帝科学仪器公司;LG-R-80系列血液黏度仪，北京世帝科学仪器公司。

2 方法

2.1 实验环境 清洁级大鼠饲养于南京中医药大学动物中心，室温(20±2)℃，湿度50%～60%,每天光照10～12 h。

2.2 分组与给药 随机将雄性大鼠分为5组，每组12只，即空白对照组(全价颗粒饲料喂养、自由饮水)，其他各组模型组、抗肝纤低剂量组1.5 g生药/kg，抗肝纤中剂量组3.0 g生药/kg,抗肝纤高剂量6.0 g生药/kg(每日79.5%单纯玉米面加20%猪油、0.5%胆固醇混合饲料饲喂大鼠，另以15%乙醇为饮料饲养动物)，抗肝纤各剂量组大鼠给药容积10 mL/kg，空白对照组和模型组给等体积生理盐水。

2.3 造模方法 40% CCL4橄榄油液，皮下注射,首剂0.5 mL/kg,以后0.25 mL/kg,每周2次，持续8周，每日79.5%单纯玉米面加20%猪油、0.5%胆固醇混合饲料饲喂大鼠，另以15%乙醇为饮料饲养动物。第7周开始，皮下注射肾上腺素0.1 mg/(kg·d),每天分2次注射，间隔12 h，连续7 d，造成肝纤化的慢性血瘀症模型。

2.4 实验步骤 大鼠先适应性饲养观察3 d，于第4天开始抗肝纤各剂量组、模型组开始造模，并灌胃给予相应药物、模型组给予等体积蒸馏水，共持续8周;空白对照组给予等量蒸馏水，全价颗粒饲料喂养。与第7周开始，皮下注射肾上腺素0.1 mg/(kg·d),每天分2次注射，间隔12 h，连续7 d。于最后1次皮下注射肾上腺素后，各组大鼠禁食12 h,于次日用10%水合氯醛麻醉(300 mg/kg腹腔注射)，仰位固定，颈动脉插管放血，分别用3.8%的枸橼酸钠溶液和肝素钠生理盐水溶液(500 U/mL)按1∶9抗凝。

2.5 实验检测指标 1)全血黏度:将肝素钠抗凝的血液采用LG-R-80系列血液黏度仪测定。2)血浆黏度：全血测试完毕后，剩余血样以3 000 r/min离心,进行血浆黏度的测试。3)凝血功能：将3.8%的枸橼酸钠抗凝的血液以3 000 r/min离心10 min，分离血小板血浆，采用LG-PABER型血小板聚集及凝血因子分析仪于37 ℃测定血小板最大聚集率、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、血浆纤维蛋白原(FIB)。

3 结果

3.1 抗肝纤胶囊对慢性血瘀大鼠全血黏度和血浆黏度的影响 见表1。

3.2 抗肝纤胶囊对慢性血瘀大鼠血小板聚集和凝血功能的影响 见表2。

表1 抗肝纤胶囊对慢性血瘀症模型大鼠血流动力学的影响(±s,n=8)

表2 抗肝纤胶囊对慢性血瘀症模型大鼠血小板聚集和凝血参数的影响(±s,n=8)

4 讨论

肝纤维化属中医“胁痛”“黄疸”“积聚”等范畴，主要病机为血瘀阻络、正气虚损和湿热内蕴。血瘀是肝纤维化形成的基本病机，也是各种肝病最根本、最重要的病理改变[2]。本实验参考四氯化碳、高脂、乙醇等复合因素造成大鼠肝纤维化模型和肾上腺素复制大鼠血瘀症模型文献[3-7]，并结合预实验结果，独创地复制出大鼠肝纤维化的慢性血瘀症模型，较以往用肾上腺素造成的血瘀模型更符合肝纤维化所表现的血液高凝状态；比四氯化碳等造成肝纤化的血瘀模型更稳定。以往的研究[6]发现，肝血瘀阻与肝纤维化密切相关，并与肝纤维化严重程度呈正相关。肝组织内纤维结缔组织增生导致：小叶中心的纤维化阻碍血流进入肝静脉，使肝功能损害及循环障碍；纤维隔的血管交通支使进出肝脏的血供相交通,导致门脉高压和微循环紊乱[9];T细胞、枯否细胞等炎性细胞激活，释放相关细胞因子，引起机体凝血-纤溶系统异常和血小板功能紊乱[10]；以及通过众多环节引起的血液循环障碍。前期实验证实了抗肝纤胶囊能显著改善四氯化碳所致的肝功能异常；本实验显示了抗肝纤胶囊显著改善肝纤维化的慢性血瘀症的血流动力学和凝血功能异常。中药复方抗肝纤胶囊可通过多层次、多靶点、多途径、多环节干预、调节肝纤维化进程，具有独特的优势。

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