HIV筛查实验室的质量管理

荣幸 张永旭 张海波

目前我国艾滋病流行形势严峻，尽快发现感染者和患者、及时开展医疗救治工作是我国艾滋病防治工作的当务之急。HIV抗体筛查是发现HIV病毒携带者或患者的重要手段。我院在2008年建立了HIV筛查实验室。为了确保检验结果的准确性、严谨性，我HIV筛查实验室强化质量意识，严格遵守实验室SOP，进行室内质量控制，同时还参加省室间质评。现将我室的质量管理进行总结分析如下。

1 建立HIV筛查实验室SOP文件

HIV筛查实验室SOP文件包括：①样品的接收、登记、处理、保存和运输；②检测方法和步骤；③试剂使用和保存；④仪器的使用维护和校准；⑤质量控制要求及程序；⑥结果解释与报告；⑦保密程序；⑧实验室数据、相关文件记录与保存；⑨不确定样品追踪和处理；⑩实验室安全防护及实验室的清理和消毒。SOP的编写由HIV筛查实验室工作人员起草，实验室主任审定，每年修订一次。所有HIV筛查实验室工作人员都在SOP文件上签名表示已经阅读并掌握了有关内容，在实验过程中严格执行标准操作程序（SOP），不得擅自修改。

2 人员的资质和培训

HIV筛查实验室工作人员需经过上岗培训和在岗持续培训。上岗培训内容至少应包括：艾滋病检测相关基础知识，艾滋病相关检测技术及管理要求，实验操作，质量保证与质量控制，生物安全。要求HIV筛查实验室工作人员掌握相关专业知识和技能，能独立熟练地操作，并经考核合格，持证上岗。HIV筛查实验室工作人员至少每2年1次进行在岗持续培训，除接受检测基本培训内容外，还要求了解相关技术、质控及安全要求的新进展。

3 HIV筛查实验室的质量管理

3.1 样品的采集和处理 我室HIV抗体的检测最常用的样本是血清，根据需要，用一次性注射器（或真空采血管）抽取5m L静脉血，室温下自然放置1～2h，待血液凝固、血块收缩后再用1500～3000r/m in离心15m in，备用。采血完成后的穿刺针头必须丢弃于尖锐危险品容器里，妥善处理，防止发生职业暴露。HIV筛查实验室检测的筛查阳性样品应及时送省疾控中心的HIV确证实验室，筛查阴性样品，保存1个月。

3.2 筛查试剂和筛查方法 HIV筛查实验室的筛查试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂，其中酶联免疫试剂应批批检合格，临床质量评估敏感性和特异性高的试剂[1]。我室的筛查方法是酶联免疫吸附法（ELISA）。

3.3 设备维护与校准 HIV筛查实验室应设立常用仪器的维护及校准制度，以保证检测工作正常运转。必须经国家法定部门定期（每年至少1次）校准的仪器包括酶标仪/洗板机，加样器，温度计，高压灭菌器。加样器、温湿度计须经计量部门校准。

3.3.1 酶标读数仪、洗板机 每个工作日核对滤光片波长，检查洗板机管道是否通畅，是否有漏液现象。定期清洁仪器表面，保护光学零件不沾灰尘。每月检查洗板机洗涤时各孔是否与相应的冲洗头对位良好；负压是否符合规定要求。每年检查、清洗滤光片，如果出现破裂或霉点须更换；根据仪器内具有的校准程序或使用校准板，对滤光片的精密度进行校准并保留记录。实验过程中发现异常情况，应随时进行处理，可根据使用情况更换必要的部件。

3.3.2 移液器 每年至少校准1次，发现异常情况应随时进行校准。移液器的精密度应在厂家说明书规定的范围内。

3.3.3 冰箱和孵育箱 每个工作日检查和记录冰箱温度，每个工作日检查记录孵育箱温度，并做好记录。使用经过计量部门校准合格的温度计测量冰箱和孵育箱的实际温度。

3.3.4 生物安全柜和高压灭菌器 每次使用前检查仪器是否处于正常运转状态，并做好记录。生物安全柜和高压灭菌器必须每年1次请生产厂家校准。

3.4 HIV筛查实验室的室内质量控制

3.4.1 试剂盒内部对照 试剂盒内部对照质控品即为试剂盒内提供的阳性和阴性对照血清。试剂盒内部对照用于判断每次实验的有效性，但不能作为室内质控品使用。每一次检测临床样品时，必须有试剂盒内部对照，而且只能在同批号的试剂盒中使用。内部对照结果无效，必须重新试验。

3.4.2 室内质控品 我室只设置一个由省检验中心提供的弱阳性质控品，S/CO值在2～4。外部质控品的作用是，判断该批临床样品检测的有效性，因此，每次实验必须包含室内质控品，其结果无效，必须重新试验。

3.4.3 绘制质控图 质控图绘制步骤包括：①在常规条件下，对同一批血清连续测定20次（天）或以上，获得一组S/CO值，求均数和标准差（s），超出2s或3s的数据不应删除。②将均值（x）和标准差（s）分别在质控框架图中标示出来。以S/CO值作纵坐标（Y轴），每一批次试验作横坐标（X轴），绘制质控图。③从第21次起，将每次质控血清的检测结果依次点入该质控框架图中，检验进入质控状态。

3.4.4 质控规则及其使用 HIV筛查实验室在报告实验结果之前必须评价质控数据，可通过图形记录的检查或由计算机审核结果来决定。我室应用的是12S和13S规则。①告警（12S）：当外部质控品的S/CO值超出+2s范围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。当天的结果一般可以报告。②失控（13S）：当外部质控品的S/CO值超出+3s范围时，系统处于失控状态，本次实验结果不能被接受，可能是系统误差、随机误差或外部质控品稳定性下降所致。③漂移：连续几次（3～5次）外部质控品的S/CO值都落在均值的一侧则称为漂移，提示实验条件发生了较大的变化。④趋势：连续几次（5～7次）外部质控品的S/CO值几乎按一个方向分布时称为趋势，通常由参数的缓慢改变引起。

质控规则的使用应检出随机误差和系统误差，多规则质控方法能提高误差检出，并具有低的假失控概率。其要点为：出现1次2s范围的变化时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。

出现下列情况时，应暂停检测查找原因：①出现1次超出3s范围的变化；②连续2次出现同一方向超出2s范围的变化；③连续4次出现同一方向的超出1s范围的变化；④连续10次结果都在1s范围内，但落在均值线的同一侧。

3.4.5 质控图的分析及失控处理 实验室应建立质控图分析及失控情况处理程序。当质控已有计划并恰当地执行时，要求可靠的均值和标准差用于计算质控限，将假失控概率降到最低。当出现失控时，对原有外部质控品重复测定或更换新的外部质控品进行测定不是最有效的方法，必须找出问题发生的原因，找出解除问题的方法，并消除原因，防止将来出现同样的问题。

[1]中国疾病预防控制中心.全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）[S].2009：50.