氯胺酮对束缚加悬吊应激大鼠脑组织单胺类神经递质的影响

陆艳娟 杨成君 李晓林 (吉林大学白求恩医学院生物化学与分子生物学实验中心，吉林 长春 130021)

单胺类神经递质是一种功能复杂的神经活性物质，在应激状态下其含量异常〔1～4〕，目前尚未有关于麻醉剂氯胺酮对应激大鼠不同脑区单胺类神经递质含量变化影响的报道。

1 材料与方法

1.1 动物与分组 雄性SD大鼠，体重(250±10)g，吉林大学实验动物中心提供。正常饮食，昼夜饲养48 h。实验前12～24 h禁食，不限水。取雄性SD大鼠30只随机分为:应激对照组(S组)，将大鼠四肢用绷带分别固定于鼠板上，头朝下尾朝上悬挂，经股静脉注射5 ml生理盐水，在1 h内注射完毕;麻醉剂氯胺酮对照组(k1组)，1 h内经股静脉注入用5 ml生理盐水稀释的氯胺酮10 mg/kg;在束缚加悬吊后静脉注入用5 ml生理盐水稀释的氯胺酮10 mg/kg(k2组)，束缚加悬吊共6 h〔5〕。

1.2 实验试剂与仪器 注射用氯胺酮，北京紫竹药业有限公司;5-羟色胺(5-TH)，去甲肾上腺素(NE)，多巴胺(DA)，美国SⅠGMA公司;邻苯二甲醛，上海化学试剂公司，L-半胱氨酸，上海康达公司。荧光分光光度计RF-5301PC(日本岛津公司)，电热三用水箱DS-1型(北京医用仪器厂)，冷冻离心机TGL-16G型(上海分析仪器厂)。

1.3 单胺类神经递质测定与取材 各组动物实验结束后处死。迅速取脑组织，分出不同脑区，-80℃保存。用时取出，称重，于冰冷、酸性正丁醇中制成匀浆，离心分离水相及有机相。5-HT在碱性条件下与邻苯二甲醛缩合，形成具有荧光的化合物，NE、DA与氧化剂反应生成具有荧光的化合物，上述荧光化合物强度与浓度成直线关系，即可测定其荧光强度〔6〕。

1.4 统计学处理 应用SPSS13.0统计软件，数据结果以±s表示，组间比较用t检验。

2 结果

2.1 各组大鼠脑干NE、DA、5-HT含量比较 k2组脑干DA含量明显高于S组(P＜0.01)，而NE明显高于k1组(P＜0.01);5-HT含量没有明显变化。见表1。组别NE DA 5-HT

表1 各组大鼠脑干NE、DA、5-HT含量(μg/g，±s，n=10)

表1 各组大鼠脑干NE、DA、5-HT含量(μg/g，±s，n=10)

与S组比较:1)P＜0.05，2)P＜0.01;与 k1组比较:3)P＜0.05，4)P＜0.01;下表同

S组1.01±0.07 1.53±0.21 6.01±2.58 k1组 0.49±0.082) 1.59±0.31 5.07±1.79 k2组 0.87±0.244) 2.12±0.192)4.34±1.45

2.2 各组大鼠小脑NE、DA、5-HT含量比较 k1组和k2组NE含量明显高于S组(P＜0.01);k2组5-HT含量明显低于S组和k1组(P＜0.01);DA含量没有明显变化。见表2。

表2 各组大鼠小脑NE、DA、5-HT含量(μg/g，±s，n=10)

表2 各组大鼠小脑NE、DA、5-HT含量(μg/g，±s，n=10)

组别NE DA 5-HT S组0.24±0.04 1.16±0.17 3.45±0.25 k1组 1.08±0.322) 1.32±0.39 3.46±0.51 k2组 1.29±0.162) 1.18±0.21 1.38±0.192)4)

2.3 各组大鼠皮质NE、DA、5-HT含量比较 k1组及k2组皮质NE含量都低于S组(P＜0.05，P＜0.01)，DA含量高于S组(P＜0.05)。5-HT含量各组比较无明显差异(P＞0.05)。见表3。

表3 各组大鼠皮质NE、DA、5-HT含量(μg/g，±s，n=10)

表3 各组大鼠皮质NE、DA、5-HT含量(μg/g，±s，n=10)

组别NE DA 5-HT S组4.33±1.94 1.18±0.35 5.43±1.44 k1组 1.08±0.222) 1.31±0.221) 5.17±0.84 k2组 1.78±0.611) 1.88±0.381)3)4.37±2.46

3 讨论

近年来，抑郁症是全球范围内最受关注的公共卫生难题之一，应激与抑郁症的发病有着密不可分的相关性〔7〕。应激反应的重要特征之一是下丘脑-垂体-肾上腺轴激活，主要引起交感神经兴奋。单胺类神经递质包括NE、DA、5-HT等。应激状态时检测脑组织中单胺类神经递质含量变化对研究这类递质的生理、生化功能有重要意义。在正常情况下，单胺类神经递质的分泌保持在一定水平，并且他们之间的比例协调，从而维持功能稳定。随着应激情况出现，单胺类神经递质也相应发生改变，从而引起一系列功能紊乱症状的发生。当个体暴露于应激中，肾上腺轴活性增强，导致肾上腺皮质激素分泌增加，糖皮质激素是主要的应激激素之一，除能升高血压外，还能影响肾上腺素α受体的表达，增加儿茶酚胺类作用效果，同时还能通过对中枢神经的影响，抑制前列腺素、缓激肽、5-HT等的合成，继而引起血管收缩效应。糖皮质激素分泌增加还可以促进肾小管的重吸收，增加血容量，从而升高血压。5-HT在脑内分布广泛，是调节人体感觉、思维和行为等各种活动的重要神经递质，其水平变化与应激密切相关。本实验显示，不同脑区的单胺类神经递质NE、DA、5-HT对氯胺酮作用的敏感性不同，氯胺酮组小脑的5-HT明显低于对照组，而NE含量明显升高;脑干、皮质DA含量升高，说明氯胺酮对脑中枢神经产生一定的影响，以改变其神经递质的释放，其作用机制有待进一步探讨。

1 Zhu W，Xie W，Pan T，et al.Comparison of neuroprotective and neu-rorestorative capabilities of rasagiline and selegiline against lactacystin-induced nigrostriatal dopaminergic degeneration〔J〕.J Neurochem，2008;105(5):1970-8.

2 Gonzalez MM，Aston-Jones G.Light deprivation damages monoamine neurons and produces a depressive behavioral phenotype in rats〔J〕.Proc Natl Acad Sci U SA，2008;105(12):4898-903.

3 Jahng JW，Kim NY，Ryu V，et al.Dexamethasone reduces food intake，weight gain and the hypothalamic 5-HT concentration and increases plasma leptin in rats〔J〕.Eur JPharmacol，2008;581(1-2):64-70.

4 Park SS，Schulz EM，Lee D.Disruption of dopamine homeostasis underlines selective neurodegeneration mediated by alpha-synuclein〔J〕.Eur J Neurosci，2007;26(11):3104-12.

5 李晓林，陆艳娟，李晓梅，等.束缚加悬吊应激模型大鼠血清、脑组织单胺类神经递质含量变化〔J〕.中国实验诊断学杂志，2008;12(11):1349-51.

6 张 燕，王洪斌，杨海霞，等.荧光分光度法测定大鼠不同脑区单胺类神经递质〔J〕.东北农业大学学报，2010;41(1):94-6.

7 马 东，董文心.应激与抑郁症发病的相关性及新药研究进展〔J〕.世界临床药物，2009;30(9):557-61.