阿司匹林对大鼠胃溃疡愈合的影响和机制

李成军 马丹丹 祝友朋 王国忠 (齐齐哈尔医学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006)

阿司匹林具有解热、镇痛、抗癌、抗风湿作用〔1〕、还能防治心脑血管疾病〔2，3〕，是老年人常用的药物。但是，阿司匹林有损伤胃肠道黏膜的副作用〔4〕，10% ～25%长期服用阿司匹林患者可发生消化性胃溃疡〔5〕，老年人消化性溃疡的发病有逐年增高的趋势〔6〕。阿司匹林通过抑制环加氧酶导致前列腺素生成减少引起消化性溃疡的研究已比较清楚，最近报道生长因子在溃疡的修复中起重要作用〔7〕。但是，阿司匹林对胃黏膜生长因子的影响与溃疡愈合的关系尚未进行深入研究。本研究探讨了阿司匹林对表皮生长因子(EGF)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响与胃黏膜血流的关系以及对溃疡愈合的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 选用雄性清洁级Wistar大鼠，体重180～210 g，由哈尔滨医科大学第二附属医院实验动物中心提供。Motic Med 6.0数码医学图像分析仪、组织血流量检测仪和光学显微镜都为日本产品，LRH-250-A型生化培养箱为中国产品。阿司匹林为美国Alfa Aesar公司产品，EGF和VEGF一抗为博奥森生物技术有限公司产品，它们的酶标二抗以及DAB显色试剂盒都是康为世纪生物科技有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 乙酸胃溃疡模型复制与分组 乙醚麻醉大鼠，腹部手术将胃拉出腹腔，将内径6 mm的塑料管紧贴于胃体与幽门交界处血管少的部位，注入100%(V/V)的乙酸75μl，25 s后移除乙酸，缝合腹壁〔8〕。模型复制后第8天随机分为模型组:在8～15 d每日只禁食5 h，不做任何处理;盐水组:在8～15 d每日禁食4 h后，用灌胃法给每只大鼠生理盐水2 ml，然后再禁食1 h;阿司匹林组:在8～15 d每日禁食4 h后，用灌胃法给阿司匹林50 mg/kg体重，然后再禁食1 h。在第16天收集标本进行各项指标检测。

1.2.2 溃疡面积的检测 按公式1/4(溃疡长径×溃疡宽径)×π计算，π取值为3.14。

1.2.3 黏膜下组织微血管数的检测 在光学显微镜下放大200倍，计数HE染色切片肉芽组织中已形成血管腔结构的毛细血管作为微血管数，每组随机取4个标本做切片，每张切片随机取2个视野，结果表示为个/高倍视野(个/HP)。

1.2.4 EGF和VEGF的检测 用免疫组织化学Elivison二步法检测。EGF一抗1∶100稀释，VEGF一抗1∶150稀释，二抗都是1∶150稀释，用DAB显色试剂盒显色。然后每组随机取4张

切片，每张切片随机取2个视野，用数码医学图像分析仪检测其积分光密度。

1.2.5 胃黏膜血流(GMBF)的检测 采用氢气清除法检测溃疡边缘血流，以正常大鼠相应部位GMBF作对照，以百分比变化表示(%)〔9〕。

1.3 统计学分析 用SPSS 16.0统计软件进行分析，所得数据用±s表示，组间差异用单因素方差分析中的最小显著差法(LSD)进行分析。

2 结果

2.1 各组溃疡面积 阿司匹林组溃汤面积为(11.88±2.56)mm2，明显高于模型组和盐水组〔(8.37±3.03)mm2，(9.14±2.48)mm2，P ＜0.05〕。见图1。

2.2 各组EGF和VEGF表达的差异 阿司匹林组溃疡边缘黏膜组织EGF和VEGF的积分光密度较模型组及盐水组明显减低(P＜0.01)。见表1，图2。

2.3 各组肉芽组织微血管数和GMBF的差异 阿司匹林组微血管数和GMBF较其他组减少(P＜0.01)，见表2。

图1 各组溃疡部位病理学观察(HE，×100)

表1 各组EGF和VEGF的积分光密度的差异(±s，n=8)

表1 各组EGF和VEGF的积分光密度的差异(±s，n=8)

与阿司匹林组比较:1)P＜0.01，下表同

组别EGF VEGF模型组 13.99±4.611) 28.43±6.451)盐水组 16.28±5.041) 32.53±4.821)阿司匹林组7.41±3.84 19.45±5.27

图2 各组EGF和VEGF表达的差异(DAB，×400)

表2 各组微血管数和GMBF的差异(±s，n=8)

表2 各组微血管数和GMBF的差异(±s，n=8)

组别 微血管数GMBF模型组 14.63±3.851) 79.28±4.621)盐水组 12.01±2.561) 83.29±5.191)阿司匹林组7.88±3.52 69.68±7.79

3 讨论

胃溃疡是由于黏膜侵袭因素和黏膜自身防御-修复因素之间失衡所致〔10〕。阿司匹林是胃黏膜的重要侵害因素。用100%的乙酸75μl复制的大鼠胃溃疡，在第3天溃疡面积约为27 mm2，然后溃疡逐渐愈合，至第8天溃疡面积约为17 mm2〔8〕。本研究表明溃疡正在进行愈合，而阿司匹林组溃疡边缘黏膜结构紊乱，表明阿司匹林是胃黏膜的重要侵害因素而抑制溃疡愈合。EGF和VEGF在溃疡的修复中具有重要作用，参与黏膜细胞和血管的再生〔11，12〕。本结果表明阿司匹林可能通过抑制EGF和VEGF的表达而抑制溃疡愈合。GMBF在溃疡的修复中起重要作用〔13〕，可为黏膜提供氧和营养物质，以促进胃黏膜细胞再生。表明阿司匹林抑制EGF和VEGF导致微血管生成减少和黏膜血流降低，抑制了溃疡的愈合。总之，阿司匹林通过抑制EGF和VEGF的表达导致微血管生成减少和黏膜血流降低，抑制了溃疡的愈合，因此，在应用阿司匹林的同时，应重视增加GMBF药物的应用，以防止阿司匹林对胃黏膜的损害。

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3 廖仁昊，陈立英，梁容仙，等.阿司匹林联合脑缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注后炎性反应的影响〔J〕.中国老年学杂志，2010;30(13):1846-8.

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5 顾同进，曹忆嵘.低剂量阿司匹林对黏膜损伤的防治〔J〕.老年医学与保健，2007;13(1):58-60.

6 于惠珍.老年消化性溃疡33例临床分析〔J〕.中国老年学杂志，2009;29(11):1433-4.

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8 Brzozowski T，Kwiecień S，Konturek PC，et al.Comparison of nitric oxidereleasing NSAⅠD and vitamin Cwith classic NSAⅠD in healing of chronic gastric ulcers;involvement of reactive oxygen species〔J〕.Med Sci Monit，2001;7(4):592-9.

9 Konturek PC，Brzozowski T，Pajdo R，et al.Ghrelin-a new gastroprotective factor in gastric mucosa〔J〕.JPhysiol Pharmacol，2004;55(2):325-36.

10 李 岩.消化性溃疡的药物治疗进展〔J〕.中国实用内科杂志，2007;27(1):24-5.

11 Luo JC，Chi CW，Lin HY，et al.Dexamethasone inhibits epidermal growth factor-stimulated gastric epithelial cell proliferation〔J〕.J Pharmacol Exp Ther，2007;320(2):687-94.

12 Wallace JL，Dicay M，McKnight W，et al.Platelets accelerate gastric ulcer healing through presentation of vascular endothelial growth factor〔J〕.Br J Pharmacol，2006;148(3):274-8.

13 Ceranowicz P，Warzecha Z，Dembinski A，et al.Treatment with ghrelin accelerates the healing of acetic acid-induced gastric and duodenal ulcers in rats〔J〕.J Physiol Pharmacol，2009;60(1):87-98.