RP-HPLC法测定妇康宝口服液中芍药苷的含量

杨 波，徐 建，王 丹，王婷婷，徐 云

(吉林修正药业新药开发有限公司，吉林 长春 130012)

妇康宝口服液源于《金匮要略》中的“胶艾汤”,方由当归、白芍、川芎、熟地黄等7味中药组成，具有补血调经，止血安胎之功效，用于失血过多，面色萎黄，月经不调，小腹冷痛等妇科病[1]。由于在部颁标准中没有关于妇康宝口服液的含量测定项,为了更好地控制该药品的质量，提高质量标准，本试验采用RP-HPLC法对妇康宝口服液中芍药的主要成分芍药苷的含量进行了测定，作为该制剂的质量标准依据，通过试验证明此方法稳定可靠、重现性好。

1 实验材料

高效液相色谱仪：美国安捷伦(1)1200高效液相色谱仪；美国安捷伦(2)1200紫外检测器；Meltter AE240双量程电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)，AB204-E电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。乙腈为色谱纯；磷酸、甲醇均为分析纯;水为重蒸水。芍药苷对照品(批号：110736-200731，规格：约20 mg，纯度97.9%，供含量测定用，购自中国食品药品检定研究院)。

2 实验方法

2.1 色谱条件 色谱柱：AgiLent C18(250 mm×4.6mm，5 μm)，流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液(19∶81)，流速：1.0 mL/min，检测波长为230 nm，柱温为35 ℃。

2.2 对照品溶液的制备 称取芍药苷对照品约10 mg,精密称定为12.44 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL,置25 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1 mL含芍药苷48.72 μg)。

2.3 供试品溶液的制备 精密量取本品5 mL，置分液漏斗中，加水10 mL，混匀,用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15 mL，合并正丁醇提取液，水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 mL,置5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 线性关系范围 精密吸取对照品溶液3、5、10、15、20 μL，按上述色谱条件分别注入液相色谱仪，以标准品浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标。标准曲线方程为Y=1.412 9X+6.804 5(r=0.999 8)，结果表明芍药苷进样量在146.145～974.30 μg范围内呈良好线性关系。

2.5 专属性试验 取按处方比例缺白芍的阴性对照样品，按上述色谱条件测定HPLC色谱图。同法测定芍药苷对照品、供试品及溶剂的HPLC色谱图。结果阴性对照样品的色谱图中，在与芍药苷吸收峰保留时间的相应位置上，无吸收峰出现，表明阴性对照无干扰，此方法专属性强。

2.6 稳定性试验 精密吸取同一批供试品溶液(批号20100101)5 mL，按2.3项下制备供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24 h注入液相色谱仪中，考察其稳定性。结果显示样品溶液峰面积RSD为1.22%，表明样品在24 h内的稳定性良好。

2.7 重复性试验 精密吸取同一批供试品溶液(批号20100101)5 mL,共6分，按2.3项下制备供试品溶液，进行含量测定。结果芍药苷峰面积RSD为0.60%,表明方法有良好的重现性。

2.8 回收率试验 精密吸取同一批(批号20100101)已知含量的样品2.5 mL，共6分，分别精密加入芍药苷对照品溶液(浓度为1.215 9 mg/mL)2 mL，按2.3项下制备供试品溶液。计算6次平均回收率为98.08，RSD为1.90%。结果表明此方法准确、可行。

2.9 3批样品含量测定 分别精密吸取3批妇康宝口服液(批号分别为20100101、20100102、20100103)5 mL，按2.3项下制备供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液各10 mL，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算3批样品含量分别为1.224、1.049、1.253 mg/mL。

3 讨论

参考《中国药典》[2]，又经预试验摸索，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长为230 nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于3 000。考察3种流动相系统：以乙腈-水(26∶74)[3]、乙腈-水-冰醋酸(30∶70∶0.6)[4-5]、乙腈-0.15%磷酸溶液(19∶81)进行比较，结果以乙腈-0.3%磷酸溶液(19∶81)为流动相[6-8],样品分离效果好，理论板数高，故选择流动相作为检测本品的流动相。

在预实验中还考察了样品的制备方法，采用大孔树脂纯化法、甲醇法、正丁醇提取法等3种方法对样品进行纯化处理[9-10]，通过含量测定，正丁醇提取法得到的样品中芍药苷含量较高，且杂质峰少，分离较好，故选择正丁醇提取法为供试品溶液制备方法。

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